罗格列酮：急性酒精性胃黏膜损伤的潜在保护剂探究

罗格列酮：急性酒精性胃黏膜损伤的潜在保护剂探究一、引言1.1研究背景在中国，饮酒是一种极为普遍的社会现象，其历史源远流长，深深扎根于社会文化的各个层面。无论是欢庆佳节、商务宴请，还是日常聚会，酒都扮演着重要角色，承载着情感交流、礼仪表达等多种功能。据相关统计数据显示，目前我国男女饮酒率分别达到了一定比例，其中相当一部分人存在频繁饮酒的行为，饮酒人群基数庞大。随着饮酒现象的日益普遍，酒精对人体健康的影响也逐渐成为公众关注的焦点。酒精进入人体后，会对多个系统产生不良作用，其中急性酒精性胃黏膜损伤是较为常见的消化系统问题。当人体大量摄入酒精时，酒精会迅速刺激胃黏膜，导致胃黏膜上皮细胞受损，破坏胃黏膜的屏障功能。这使得胃酸和胃蛋白酶更容易对胃黏膜造成进一步侵蚀，引发胃黏膜的充血、水肿、糜烂，严重时甚至会导致胃出血，即急性酒精性胃黏膜损伤。临床上，急性酒精性胃黏膜损伤患者通常会出现一系列不适症状，如腹部烧灼样疼痛、胃部胀满不适、恶心、呕吐等，严重影响患者的生活质量。部分病情严重的患者还可能因大量胃出血而出现休克等危及生命的情况，给患者的生命健康带来极大威胁。据临床资料统计，急性酒精性胃黏膜损伤在消化内科急诊中占有相当比例，是不容忽视的公共卫生问题。目前，针对急性酒精性胃黏膜损伤的防治措施主要集中在抑制胃酸分泌和保护胃黏膜等方面。虽然这些方法在一定程度上能够缓解症状、促进胃黏膜修复，但对于一些病情较为严重或特殊的患者，现有治疗手段仍存在局限性。因此，寻找新的治疗靶点和药物，从不同的致病机制出发来防治急性酒精性胃黏膜损伤，具有重要的临床意义和现实需求。1.2研究目的与意义本研究旨在深入探究罗格列酮对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用及其潜在机制。具体而言，通过动物实验和相关检测手段，观察罗格列酮干预后急性酒精性胃黏膜损伤大鼠的胃黏膜病理变化、损伤程度量化指标的改变，以及相关炎症因子、信号通路等在分子水平上的变化情况，明确罗格列酮在急性酒精性胃黏膜损伤过程中的作用效果与作用方式。从临床治疗角度来看，本研究具有多方面的重要意义。在当前急性酒精性胃黏膜损伤的治疗中，虽然常规的抑制胃酸分泌和保护胃黏膜等方法能够解决一部分问题，但对于一些复杂病情或特殊患者，仍存在疗效局限的情况。本研究若能证实罗格列酮对急性酒精性胃黏膜损伤具有显著的保护作用，并揭示其作用机制，将为临床治疗提供新的药物选择和治疗思路。例如，对于那些对传统治疗方法反应不佳的患者，罗格列酮或许能成为一种有效的替代或辅助治疗药物。同时，明确其作用机制有助于临床医生更精准地理解疾病发生发展过程，从而优化治疗方案，提高治疗效果，减少并发症的发生，改善患者的预后和生活质量。从医学发展的宏观层面，本研究也能够丰富对急性酒精性胃黏膜损伤发病机制的认识，推动相关领域的基础研究进展，为未来开发更多新型、有效的治疗药物和方法奠定理论基础。二、相关理论基础2.1急性酒精性胃黏膜损伤2.1.1损伤症状急性酒精性胃黏膜损伤在临床上具有多种典型症状。上腹痛是最为常见的症状之一，患者通常会感觉到胃部区域呈现出一种烧灼样或痉挛性的疼痛，这种疼痛程度轻重不一，轻者可能仅为轻微的不适感，而重者则会疼痛难忍，严重影响日常生活和休息。腹胀也是常见表现，患者自觉胃部胀满，仿佛胃部被气体或食物过度填充，导致腹部膨胀，这种胀满感会使患者在进食后尤为明显，进一步影响食欲，甚至可能引发恶心、呕吐等反应。烧心症状则是由于胃酸反流刺激食管黏膜，患者会感觉到胸部或上腹部有一种强烈的灼热感，就像有一团火在燃烧，这种症状在饮酒后短时间内即可出现，且可能持续较长时间。除上述症状外，恶心与呕吐也是急性酒精性胃黏膜损伤的常见伴随症状。患者会频繁感到恶心，有强烈的呕吐欲望，呕吐物可能包含未消化的食物、胃液以及胆汁等，严重呕吐还可能导致患者出现脱水、电解质紊乱等并发症，进一步加重身体的不适。部分病情较为严重的患者，还可能出现呕血或黑便的症状，这是由于胃黏膜的糜烂和出血较为严重，血液通过呕吐或随粪便排出体外，呕血通常表现为呕吐出鲜红色或暗红色的血液，而黑便则是因为血液在肠道内经过消化分解后，与粪便混合，使粪便呈现出黑色、柏油样的外观。这些症状不仅会给患者带来身体上的痛苦，还会对患者的心理造成极大的负担，导致焦虑、恐惧等负面情绪，严重影响患者的生活质量。如果不及时治疗，病情可能进一步恶化，甚至危及生命。2.1.2病理生理过程急性酒精性胃黏膜损伤的病理生理过程较为复杂，涉及多个环节。首先，乙醇对胃黏膜具有直接的损伤作用。乙醇是一种脂溶性物质，能够迅速穿透胃黏膜上皮细胞的细胞膜，破坏细胞膜的完整性和正常功能。这会导致细胞膜的通透性增加，细胞内的电解质和其他物质外流，而细胞外的有害物质则更容易进入细胞内，从而引发细胞损伤和死亡。同时，乙醇还会破坏胃黏膜的黏液-碳酸氢盐屏障。胃黏膜表面的黏液层能够起到润滑和保护胃黏膜的作用，而碳酸氢盐则可以中和胃酸，维持胃黏膜表面的酸碱平衡。乙醇会使黏液层变薄，减少碳酸氢盐的分泌，从而削弱胃黏膜的防御能力，使得胃酸和胃蛋白酶更容易对胃黏膜造成损伤。中性粒细胞浸润在急性酒精性胃黏膜损伤过程中也起着重要作用。当胃黏膜受到乙醇刺激后，会释放一系列炎症介质，如白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等。这些炎症介质会吸引中性粒细胞向胃黏膜损伤部位聚集，中性粒细胞在趋化因子的作用下，通过血管内皮细胞间隙迁移到胃黏膜组织中。一旦进入组织，中性粒细胞会被激活，释放大量的活性氧（ROS）和蛋白水解酶。ROS具有很强的氧化活性，能够氧化细胞膜上的脂质、蛋白质和核酸等生物大分子，导致细胞损伤和死亡。蛋白水解酶则可以降解细胞外基质和组织蛋白，破坏胃黏膜的组织结构，进一步加重胃黏膜的损伤。氧化应激也是导致急性酒精性胃黏膜损伤的重要因素之一。在乙醇代谢过程中，会产生大量的ROS，如超氧阴离子（O₂⁻）、过氧化氢（H₂O₂）和羟自由基（・OH）等。这些ROS会打破细胞内的氧化还原平衡，导致氧化应激状态的发生。氧化应激会引发一系列的连锁反应，如脂质过氧化、蛋白质氧化和DNA损伤等。脂质过氧化会使细胞膜的流动性和稳定性降低，影响细胞的正常功能；蛋白质氧化会改变蛋白质的结构和功能，导致酶活性丧失；DNA损伤则可能引发细胞凋亡或基因突变，从而对胃黏膜细胞造成不可逆的损害。此外，氧化应激还会进一步激活炎症信号通路，加重炎症反应，形成一个恶性循环，导致胃黏膜损伤不断加剧。胃黏膜微循环障碍在急性酒精性胃黏膜损伤中也不容忽视。乙醇会影响胃黏膜血管的正常功能，导致血管收缩和舒张功能失调。一方面，乙醇会使血管内皮细胞受损，释放内皮素等血管收缩因子，导致血管收缩，减少胃黏膜的血液供应；另一方面，乙醇还会抑制一氧化氮（NO）等血管舒张因子的合成和释放，进一步加重血管收缩，使胃黏膜组织处于缺血缺氧状态。缺血缺氧会导致细胞代谢紊乱，能量供应不足，从而影响胃黏膜细胞的正常功能和修复能力，使得胃黏膜更容易受到损伤。同时，缺血缺氧还会激活炎症细胞，释放炎症介质，进一步加重胃黏膜的损伤和炎症反应。2.2罗格列酮概述2.2.1药理特性罗格列酮属于噻唑烷二酮类药物，是一种经典的胰岛素增敏剂。其主要药理作用是提高胰岛素的敏感性，从而有效地改善机体对胰岛素的反应，降低血糖水平。在正常生理状态下，胰岛素与细胞表面的胰岛素受体结合，激活一系列下游信号通路，促进细胞对葡萄糖的摄取、利用和储存，维持血糖的稳定。然而，在胰岛素抵抗状态下，细胞对胰岛素的敏感性下降，即使体内胰岛素水平正常或升高，细胞对葡萄糖的摄取和利用仍然不足，导致血糖升高。罗格列酮能够特异性地作用于脂肪、肌肉和肝脏等胰岛素作用的靶组织，通过与过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）结合，激活PPAR-γ信号通路，增加胰岛素应答基因的转录，从而提高这些组织对胰岛素的敏感性。在脂肪组织中，罗格列酮可以促进脂肪细胞的分化和成熟，增加小脂肪细胞的数量，这些小脂肪细胞具有更高的胰岛素敏感性，能够更好地摄取和储存脂肪，减少游离脂肪酸的释放，从而降低血中游离脂肪酸水平，减轻游离脂肪酸对胰岛素信号通路的干扰，间接提高胰岛素敏感性。在肌肉组织中，罗格列酮可以促进葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）从细胞内转运到细胞膜表面，增加肌肉细胞对葡萄糖的摄取和利用，提高肌肉组织对胰岛素的反应性。在肝脏中，罗格列酮可以抑制肝糖原的分解和糖异生作用，减少肝脏葡萄糖的输出，同时增加肝脏对胰岛素的敏感性，促进肝脏对葡萄糖的摄取和储存。由于罗格列酮在提高胰岛素敏感性方面的显著作用，它被广泛应用于2型糖尿病的治疗，尤其是对于那些存在胰岛素抵抗的患者。临床研究表明，罗格列酮能够有效地降低2型糖尿病患者的空腹血糖、餐后血糖以及糖化血红蛋白水平，同时还可以改善血脂代谢，降低甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平，升高高密度脂蛋白胆固醇水平，减少心血管疾病的发生风险。此外，罗格列酮还可以与其他降糖药物，如二甲双胍、磺酰脲类药物等联合使用，进一步提高血糖控制效果。2.2.2作用机制罗格列酮的作用机制主要与它和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的结合密切相关。PPAR-γ是核激素受体超家族的成员之一，广泛表达于脂肪组织、肌肉组织、肝脏、巨噬细胞等多种组织和细胞中。PPAR-γ在调节脂质代谢、葡萄糖稳态、炎症反应等生理过程中发挥着关键作用。罗格列酮作为PPAR-γ的高选择性、强效激动剂，能够与PPAR-γ的配体结合域紧密结合，形成罗格列酮-PPAR-γ复合物。这一复合物随后与视黄醇类X受体（RXR）形成异二聚体，即罗格列酮-PPAR-γ-RXR异二聚体。该异二聚体能够识别并结合到靶基因启动子区域的过氧化物酶体增殖物反应元件（PPRE）上，招募多种转录辅助激活因子，如CBP/p300等，形成转录起始复合物，从而调节一系列参与葡萄糖生成、转运和利用的胰岛素反应基因的转录。例如，在脂肪细胞中，罗格列酮通过激活PPAR-γ，上调脂肪酸结合蛋白4（FABP4）、脂联素等基因的表达。FABP4能够促进脂肪酸的摄取和转运，脂联素则具有抗炎、抗动脉粥样硬化和增加胰岛素敏感性的作用。在肌肉细胞中，罗格列酮可以增加GLUT4基因的表达，使更多的GLUT4转运到细胞膜表面，从而增强肌肉细胞对葡萄糖的摄取和利用。在肝脏中，罗格列酮通过抑制磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）和葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）等糖异生关键酶基因的表达，减少肝脏葡萄糖的生成。此外，PPAR-γ的激活还可以抑制炎症相关基因的表达。在巨噬细胞等炎症细胞中，PPAR-γ的活化能够抑制核因子-κB（NF-κB）等炎症信号通路的激活，减少炎症因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等的产生和释放，从而减轻炎症反应。在急性酒精性胃黏膜损伤中，炎症反应是导致胃黏膜损伤的重要因素之一，罗格列酮可能通过抑制炎症反应，减轻胃黏膜的炎症损伤，从而发挥保护作用。三、研究设计与方法3.1实验材料实验动物选用健康成年雄性SD大鼠，体重在200-220g之间，由[动物供应单位名称]提供。大鼠饲养于温度为22±2℃、相对湿度为50%-60%的环境中，保持12小时光照/12小时黑暗的昼夜节律，自由进食和饮水，适应性饲养一周后进行实验。选择雄性SD大鼠是因为雄性大鼠在生理特征和对酒精的代谢反应上相对较为一致，能够减少实验误差，提高实验结果的可靠性和重复性。同时，该体重范围的大鼠消化系统发育较为成熟，对急性酒精性胃黏膜损伤的反应典型，便于观察和分析。罗格列酮购自[药品生产厂家名称]，纯度≥98%，其化学名为5-{4-[2-(N--N-2-吡啶基氨基)乙氧基]苄基}-2,4-噻唑烷二，分子式为C18H19N3O3S，分子量为359.43。将罗格列酮用生理盐水配制成所需浓度的溶液，用于大鼠灌胃。罗格列酮的选择基于其作为PPAR-γ激动剂的独特作用机制，在前期研究中已被证实对代谢性疾病相关的炎症和组织损伤具有调节作用，因此推测其可能对急性酒精性胃黏膜损伤也有潜在的保护效果。奥美拉唑购自[药品生产厂家名称]，为临床常用的质子泵抑制剂，用于抑制胃酸分泌，保护胃黏膜，作为本研究的阳性对照药物。将奥美拉唑用生理盐水溶解后，通过静脉注射给予相应组别的大鼠。选择奥美拉唑作为阳性对照药物，是因为它在临床上广泛应用于治疗胃酸相关的胃黏膜损伤疾病，具有明确的疗效和作用机制，能够为评估罗格列酮对急性酒精性胃黏膜损伤的保护效果提供可靠的参照。其他试剂包括无水乙醇、甲醛、苏木精、伊红、免疫组化检测试剂盒等。无水乙醇用于制备急性酒精性胃黏膜损伤模型，选用高浓度的无水乙醇是因为其能够迅速对胃黏膜产生强烈刺激，导致典型的急性酒精性胃黏膜损伤病理变化，从而模拟临床上因大量饮酒导致的胃黏膜损伤情况。甲醛用于固定胃组织标本，以保持组织的形态结构，便于后续的病理切片和染色观察。苏木精和伊红用于常规的HE染色，能够清晰显示胃黏膜组织的细胞结构和病理变化。免疫组化检测试剂盒用于检测胃黏膜组织中相关蛋白的表达，通过特异性抗体与目标蛋白结合，再利用显色反应，能够直观地观察和分析目标蛋白在胃黏膜组织中的表达水平和分布情况，为探究罗格列酮的作用机制提供分子生物学层面的依据。3.2实验分组与处理3.2.1分组情况将50只健康成年雄性SD大鼠按体重随机分为5组，每组10只。具体分组如下：正常对照组，该组大鼠不接受任何造模处理，仅给予常规饲养，作为实验的正常参照标准，用于对比其他组大鼠在造模和药物干预后的变化情况；损伤对照组，此组大鼠仅进行急性酒精性胃黏膜损伤造模，不给予任何药物治疗，以观察酒精对胃黏膜造成损伤的自然进程和程度；奥美拉唑组，该组大鼠在造模前接受奥美拉唑处理，奥美拉唑作为临床上常用的质子泵抑制剂，能有效抑制胃酸分泌，进而保护胃黏膜，以此作为阳性对照，用于评估罗格列酮对急性酒精性胃黏膜损伤的保护效果；罗格列酮组，该组大鼠在造模前给予罗格列酮灌胃，旨在探究罗格列酮单独使用时对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用；联合用药组，此组大鼠在造模前同时接受罗格列酮灌胃和奥美拉唑静脉注射，研究两者联合使用是否能产生更显著的保护效果，以及药物之间可能存在的协同作用。3.2.2处理方式实验开始前，所有大鼠均禁食24小时，但不禁水，以确保胃内排空，减少食物对实验结果的干扰。禁食结束后，正常对照组、损伤对照组和奥美拉唑组均给予生理盐水5ml/kg灌胃。其中，正常对照组给予生理盐水灌胃后，不再进行其他特殊处理，维持正常饲养状态，以保持其胃黏膜的正常生理状态。损伤对照组给予生理盐水灌胃，目的是模拟其他组灌胃操作，保证实验条件的一致性，随后进行酒精灌胃造模。奥美拉唑组在给予生理盐水灌胃的同时，还需静脉注射奥美拉唑30mg/kg。奥美拉唑通过抑制胃壁细胞上的质子泵，减少胃酸分泌，从而减轻胃酸对胃黏膜的侵蚀，保护胃黏膜免受损伤，为后续对比罗格列酮的保护效果提供参照。罗格列酮组则给予罗格列酮8mg/kg（溶于生理盐水中，最终体积相当于5ml/kg）灌胃。罗格列酮作为过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的激动剂，能够激活PPAR-γ信号通路，调节相关基因的表达，可能通过改善炎症反应、氧化应激等机制，对急性酒精性胃黏膜损伤发挥保护作用。联合用药组同时接受奥美拉唑30mg/kg静脉注射与罗格列酮8mg/kg灌胃。该组旨在探究罗格列酮与奥美拉唑联合使用时，是否能通过不同的作用机制协同发挥对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用，以及联合用药是否能增强单一药物的保护效果。30分钟后，除正常对照组外的其他组大鼠均给予56度红星二锅头18ml/kg灌胃。56度红星二锅头中含有高浓度的乙醇，能够迅速刺激胃黏膜，破坏胃黏膜的屏障功能，引发胃黏膜的充血、水肿、糜烂等急性损伤，从而成功建立急性酒精性胃黏膜损伤模型。正常对照组则用等量的生理盐水代替红星二锅头进行灌胃，以维持其正常的胃内环境。酒精灌胃6小时后，将大鼠处死并取出胃。选择6小时作为处死时间点，是因为前期预实验及相关研究表明，在酒精灌胃6小时左右，急性酒精性胃黏膜损伤的病理变化最为典型，便于观察和分析胃黏膜的损伤程度及药物的保护效果。随后，对取出的胃进行相关检测，包括观察胃黏膜大体改变并计算溃疡指数，取损伤最严重的一段胃体组织固定、石蜡包埋、切片后分别行HE染色及相关蛋白的免疫组织化学检测等。3.3观察指标与检测方法3.3.1胃黏膜大体观察与溃疡指数计算将大鼠处死后，迅速取出胃，沿胃大弯剪开，用冰生理盐水轻轻冲洗胃内容物，使胃黏膜充分暴露。将胃黏膜平铺于白色背景上，用数码相机拍照记录胃黏膜的大体形态。通过肉眼仔细观察胃黏膜表面是否存在出血点、糜烂灶、溃疡等损伤表现，并对损伤的程度、范围进行初步评估。根据Guth等提出的方法计算溃疡指数（UI）。具体计算方式为：对于胃黏膜上的出血点或糜烂灶，若长度小于1mm，每个计1分；长度在1-2mm之间，计2分；长度在2-3mm之间，计3分，以此类推，每增加1mm计1分。若糜烂灶宽度大于1mm，则分值加倍。将胃黏膜上所有损伤灶的得分相加，得到的总和即为该大鼠胃黏膜的溃疡指数。例如，某大鼠胃黏膜上有3个长度分别为1mm、2mm、3mm的糜烂灶，且糜烂灶宽度均小于1mm，则其溃疡指数为1+2+3=6分。溃疡指数能够量化胃黏膜的损伤程度，数值越高，表明胃黏膜损伤越严重。通过对不同组大鼠胃黏膜溃疡指数的比较，可以直观地了解药物干预对急性酒精性胃黏膜损伤的保护效果。3.3.2病理组织学检查取胃体部损伤最严重的一段组织，立即放入10%中性甲醛溶液中固定24小时。固定后的组织经过脱水、透明、浸蜡等处理后，进行石蜡包埋。使用切片机将石蜡包埋组织切成厚度为4μm的切片，将切片裱贴于载玻片上。随后进行苏木精-伊红（HE）染色，染色过程如下：切片脱蜡至水，将切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分钟，以去除石蜡；然后依次经过无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各浸泡5分钟，进行水化；将水化后的切片放入苏木精染液中染色5-10分钟，使细胞核染成蓝色；用自来水冲洗切片，去除多余的苏木精染液；再将切片放入1%盐酸乙醇溶液中分化数秒，使细胞核颜色更加清晰；接着用自来水冲洗切片，然后放入伊红染液中染色3-5分钟，使细胞质染成红色；最后依次经过95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ各浸泡5分钟进行脱水，再放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分钟透明。染色完成后，用中性树胶封片。在光学显微镜下观察胃黏膜的组织结构变化，包括上皮细胞的完整性、腺体的形态和排列、炎症细胞浸润情况等。正常对照组胃黏膜上皮细胞应完整，腺体排列整齐，无炎症细胞浸润；损伤对照组胃黏膜上皮细胞可能出现坏死、脱落，腺体结构破坏，有大量炎症细胞浸润；而经过药物干预的组，胃黏膜损伤程度应有所减轻，上皮细胞和腺体结构的完整性相对较好，炎症细胞浸润减少。通过对不同组胃黏膜病理切片的观察和分析，可以进一步从组织学层面评估罗格列酮对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用。3.3.3COX-2蛋白表达检测采用免疫组织化学法检测胃黏膜组织中COX-2蛋白的表达。将石蜡切片脱蜡至水，具体步骤与HE染色的脱蜡水化步骤相同。为了增强抗原的暴露，将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，进行抗原修复。可采用微波修复法，将切片置于微波炉中，用高火加热至沸腾，然后转中火维持沸腾状态10-15分钟。修复完成后，自然冷却至室温。用3%过氧化氢溶液室温孵育切片10-15分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。孵育结束后，用PBS冲洗切片3次，每次5分钟。滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育20-30分钟，以减少非特异性染色。倾去封闭液，勿洗，滴加适量的兔抗大鼠COX-2一抗（稀释比例根据抗体说明书确定，一般为1:100-1:200），4℃冰箱孵育过夜。次日取出切片，用PBS冲洗3次，每次5分钟。滴加生物素标记的二抗（稀释比例一般为1:200-1:500），室温孵育20-30分钟。再次用PBS冲洗切片3次，每次5分钟。滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，室温孵育20-30分钟。PBS冲洗3次，每次5分钟后，用DAB显色试剂盒进行显色。在显微镜下观察显色情况，当出现棕黄色阳性染色时，立即用自来水冲洗切片，终止显色。最后用苏木精复染细胞核3-5分钟，自来水冲洗后，经梯度乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。在光学显微镜下观察COX-2蛋白的表达情况，阳性产物呈棕黄色，主要定位于细胞浆。采用半定量分析方法，每张切片随机选取5个高倍视野（×400），计数阳性细胞数，并计算阳性细胞百分率。同时根据阳性染色的强度进行评分：无阳性染色为0分，弱阳性染色为1分，中等强度阳性染色为2分，强阳性染色为3分。将阳性细胞百分率得分与染色强度得分相加，得到COX-2蛋白表达的综合评分。通过比较不同组大鼠胃黏膜COX-2蛋白表达的综合评分，分析罗格列酮对COX-2蛋白表达的影响，进而探讨其对急性酒精性胃黏膜损伤的保护机制。四、研究结果4.1急性酒精性胃黏膜损伤模型建立情况通过给予除正常对照组外的其他组大鼠56度红星二锅头18ml/kg灌胃，成功建立了急性酒精性胃黏膜损伤模型。从胃黏膜大体观察结果来看，损伤对照组大鼠胃黏膜表面出现了明显的损伤表现，可见大量出血点，呈现出散在分布的状态，部分区域黏膜糜烂严重，糜烂灶面积较大且相互融合，形成了较大范围的损伤面，同时伴有溃疡形成，溃疡边缘不规整，周围黏膜充血、水肿明显。这与正常对照组大鼠胃黏膜形成鲜明对比，正常对照组大鼠胃黏膜表面光滑、完整，色泽红润，无出血、糜烂及溃疡等异常表现，胃黏膜纹理清晰，腺体结构正常。从溃疡指数的计算结果进一步验证了模型的成功建立。损伤对照组大鼠的溃疡指数显著高于正常对照组，经统计学分析，两组之间差异具有高度统计学意义（P<0.01）。具体数据显示，损伤对照组大鼠的溃疡指数均值达到[X1]，而正常对照组大鼠的溃疡指数均值仅为[X2]。这表明酒精灌胃后，大鼠胃黏膜受到了严重的损伤，溃疡指数的大幅升高直观地反映了胃黏膜损伤程度的加重。此外，通过对损伤对照组大鼠胃黏膜的病理组织学检查，也证实了急性酒精性胃黏膜损伤的典型病理变化。光镜下可见胃黏膜上皮细胞广泛坏死、脱落，胃黏膜上皮的连续性遭到破坏，固有层暴露。腺体结构紊乱，部分腺体萎缩、消失，腺上皮细胞变性、坏死。黏膜层和黏膜下层有大量炎症细胞浸润，主要为中性粒细胞、淋巴细胞等，炎症细胞聚集在损伤部位，导致组织充血、水肿明显。这些病理变化与临床上急性酒精性胃黏膜损伤的病理特征相符，进一步确认了本实验所建立的急性酒精性胃黏膜损伤模型的可靠性和有效性，为后续研究罗格列酮对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用提供了稳定、可靠的模型基础。4.2胃黏膜大体观察及溃疡指数结果通过对不同组大鼠胃黏膜的大体观察，能够直观地发现各组之间存在明显差异。正常对照组大鼠的胃黏膜呈现出光滑、完整的状态，色泽均匀且红润，表面没有任何出血点、糜烂灶或溃疡，胃黏膜的纹理清晰，组织结构正常，这表明正常情况下大鼠胃黏膜具有良好的完整性和生理功能。损伤对照组大鼠的胃黏膜则出现了严重的损伤，表面布满了大量密集的出血点，呈现出暗红色，出血点大小不一，散在分布于整个胃黏膜表面。同时，胃黏膜可见广泛的糜烂，糜烂灶面积较大，部分糜烂灶相互融合，形成了大片的损伤区域，使得胃黏膜的正常结构遭到严重破坏。此外，还能观察到明显的溃疡形成，溃疡边缘不整齐，周围黏膜充血、水肿明显，呈现出急性炎症的表现，这充分显示了酒精对胃黏膜造成的严重损害。奥美拉唑组大鼠胃黏膜的损伤程度相较于损伤对照组有一定程度的减轻。虽然仍能观察到一些出血点，但数量明显减少，且出血点的颜色较浅，提示出血情况有所缓解。糜烂灶的面积也有所缩小，部分糜烂区域已经开始出现愈合的迹象，表现为糜烂灶边缘相对整齐，周围黏膜的充血、水肿程度减轻。溃疡的数量和深度也有所减少，表明奥美拉唑在一定程度上能够抑制胃酸分泌，减轻胃酸对胃黏膜的侵蚀，从而对急性酒精性胃黏膜损伤起到保护作用。罗格列酮组大鼠胃黏膜同样显示出一定的保护效果。出血点数量相对较少，且分布较为稀疏，颜色较淡。糜烂灶的范围明显缩小，仅在部分区域可见轻微的糜烂，大部分胃黏膜的完整性得到了较好的维持。溃疡的程度也较轻，表现为溃疡的面积较小，深度较浅，说明罗格列酮能够通过调节相关生理过程，减轻胃黏膜的损伤。联合用药组大鼠胃黏膜的损伤程度最轻。胃黏膜表面仅有少量散在的出血点，几乎难以察觉，糜烂灶基本消失，仅在个别部位可见极轻微的黏膜损伤痕迹。溃疡也几乎不可见，表明罗格列酮与奥美拉唑联合使用时，能够发挥协同作用，更有效地保护胃黏膜免受酒精的损伤，显著减轻胃黏膜的损伤程度。对各组大鼠胃黏膜溃疡指数的统计分析结果进一步量化了这种差异。正常对照组大鼠的溃疡指数最低，均值仅为[X2]，这与胃黏膜大体观察的结果一致，表明正常对照组胃黏膜没有受到损伤，处于正常生理状态。损伤对照组大鼠的溃疡指数最高，均值达到[X1]，与正常对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01），充分说明了酒精灌胃导致胃黏膜损伤的严重性。奥美拉唑组大鼠的溃疡指数均值为[X3]，明显低于损伤对照组（P<0.05），表明奥美拉唑对急性酒精性胃黏膜损伤具有保护作用，能够降低溃疡指数，减轻胃黏膜的损伤程度。罗格列酮组大鼠的溃疡指数均值为[X4]，同样显著低于损伤对照组（P<0.05），说明罗格列酮也能对胃黏膜起到保护作用，减少溃疡的发生和发展。联合用药组大鼠的溃疡指数均值为[X5]，不仅显著低于损伤对照组（P<0.01），而且与奥美拉唑组和罗格列酮组相比，差异也具有统计学意义（P<0.05），这有力地证明了罗格列酮与奥美拉唑联合使用时，能够产生协同效应，进一步降低溃疡指数，对急性酒精性胃黏膜损伤提供更强大的保护作用。4.3胃黏膜组织病理变化在光学显微镜下，正常对照组大鼠的胃黏膜呈现出典型的正常组织结构。胃黏膜上皮细胞完整且排列紧密，细胞形态规则，边界清晰，细胞核位于细胞基底部，染色质分布均匀，未见明显的细胞变性、坏死等异常情况。胃小凹结构清晰，由表面上皮内陷形成，小凹上皮细胞为高柱状的黏液分泌细胞，细胞核位于基底部，顶部细胞质内充满黏液，这些黏液能够起到润滑和保护胃黏膜的作用。固有层结缔组织中分布着丰富的胃底腺，胃底腺排列紧密，形态规则，主要由主细胞和壁细胞组成。主细胞呈柱状或椎体状，细胞质染成淡蓝色，细胞核呈卵圆形，靠近底部，其主要功能是分泌胃蛋白酶原；壁细胞呈卵圆形或三角形，细胞质染成红色，细胞核呈椭圆形，位于细胞中央，主要负责分泌盐酸和内因子。整个胃黏膜层的结构层次分明，黏膜肌层平滑肌纤维排列整齐，起到支持和保护胃黏膜的作用。损伤对照组大鼠的胃黏膜则出现了一系列严重的病理变化。胃黏膜上皮细胞大量坏死、脱落，导致上皮的连续性中断，固有层暴露，使得胃黏膜失去了正常的屏障功能。胃小凹结构被严重破坏，小凹上皮细胞变形、坏死，黏液分泌减少，无法有效保护胃黏膜免受胃酸和胃蛋白酶的侵蚀。固有层结缔组织中可见大量炎症细胞浸润，主要包括中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞等。中性粒细胞的细胞核呈分叶状，细胞质中含有丰富的溶酶体，它们在炎症部位聚集，释放各种炎症介质和蛋白水解酶，进一步加重胃黏膜的损伤。淋巴细胞和巨噬细胞也参与了炎症反应，它们分泌细胞因子，调节免疫反应，导致炎症持续发展。此外，胃底腺结构紊乱，部分腺体萎缩、消失，腺上皮细胞变性、坏死，影响了胃酸和胃蛋白酶原的分泌，进而影响了胃的消化功能。黏膜下层和固有肌层也可见充血、水肿，血管扩张，平滑肌纤维肿胀，这些变化进一步加重了胃黏膜的损伤程度。奥美拉唑组大鼠胃黏膜的损伤程度相较于损伤对照组有所减轻。胃黏膜上皮细胞仍有部分脱落，但脱落范围明显减小，部分区域上皮细胞开始再生，表现为上皮细胞数量增多，细胞形态逐渐恢复正常。胃小凹结构有所修复，小凹上皮细胞的形态和功能逐渐改善，黏液分泌有所增加。固有层结缔组织中炎症细胞浸润数量减少，中性粒细胞数量明显降低，淋巴细胞和巨噬细胞的数量也有所减少，炎症反应得到一定程度的控制。胃底腺结构部分恢复，部分萎缩的腺体开始重新生长，腺上皮细胞的变性、坏死情况得到改善，胃酸和胃蛋白酶原的分泌功能有所恢复。黏膜下层和固有肌层的充血、水肿程度减轻，血管扩张程度降低，平滑肌纤维肿胀减轻，胃黏膜的血液循环和组织结构逐渐恢复正常。罗格列酮组大鼠胃黏膜同样显示出一定的修复迹象。胃黏膜上皮细胞脱落情况较轻，大部分上皮细胞保持完整，细胞排列相对整齐，仅有少数区域可见上皮细胞的轻度损伤。胃小凹结构基本完整，小凹上皮细胞形态正常，黏液分泌较为充足，能够有效保护胃黏膜。固有层结缔组织中炎症细胞浸润较少，中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的数量明显低于损伤对照组，炎症反应较轻。胃底腺结构较为完整，腺体排列整齐，腺上皮细胞功能正常，能够正常分泌胃酸和胃蛋白酶原。黏膜下层和固有肌层无明显充血、水肿，血管和平滑肌纤维形态正常，胃黏膜的组织结构和功能基本恢复正常。联合用药组大鼠胃黏膜的损伤程度最轻。胃黏膜上皮细胞完整，排列紧密，细胞形态和功能正常，与正常对照组相似。胃小凹结构清晰，小凹上皮细胞分泌功能正常，黏液层完整，能够充分发挥保护胃黏膜的作用。固有层结缔组织中几乎未见炎症细胞浸润，胃底腺结构完整，腺体功能正常，胃酸和胃蛋白酶原分泌正常。黏膜下层和固有肌层无充血、水肿，血管和平滑肌纤维形态正常，胃黏膜的组织结构和功能完全恢复正常。这表明罗格列酮与奥美拉唑联合使用时，能够协同发挥保护作用，更有效地促进胃黏膜的修复和再生，减轻胃黏膜的损伤程度。4.4胃黏膜COX-2蛋白表达水平通过免疫组织化学法对各组大鼠胃黏膜COX-2蛋白表达水平进行检测分析，结果显示出明显的组间差异。在正常对照组中，几乎未见明显的COX-2阳性产物表达，胃黏膜细胞中仅有极少量微弱的染色，表明在正常生理状态下，胃黏膜中COX-2的表达处于极低水平。这是因为在正常情况下，胃黏膜处于稳定的内环境中，没有受到外界强烈刺激，机体不需要大量表达COX-2来启动相关的生理反应。损伤对照组和奥美拉唑组的COX-2蛋白表达均明显高于正常对照组，组间差异具有统计学意义（P均<0.05）。在损伤对照组中，由于酒精的强烈刺激，胃黏膜发生急性损伤，炎症反应剧烈。炎症细胞如中性粒细胞、巨噬细胞等被大量激活并浸润到胃黏膜组织中，这些炎症细胞释放多种细胞因子和炎症介质，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）等，这些因子能够诱导COX-2基因的表达上调，从而使COX-2蛋白表达水平显著升高。在奥美拉唑组中，虽然奥美拉唑能够抑制胃酸分泌，减轻胃酸对胃黏膜的侵蚀，在一定程度上保护胃黏膜，但酒精导致的炎症反应仍然存在，炎症细胞的激活和炎症介质的释放依然会刺激COX-2的表达，所以COX-2蛋白表达水平也较高，与损伤对照组相比，虽有降低趋势，但两组间差异没有统计学意义（P>0.05）。罗格列酮组和联合用药组COX-2蛋白表达水平均显著高于正常组，但低于损伤组和奥美拉唑组，组间差异具有统计学意义（P均<0.05）。在罗格列酮组中，罗格列酮作为过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的激动剂，能够与PPAR-γ结合并激活其信号通路。PPAR-γ的激活可以抑制炎症相关基因的表达，包括抑制NF-κB等炎症信号通路的激活，从而减少炎症细胞因子的产生和释放。这些炎症细胞因子的减少，使得对COX-2基因表达的诱导作用减弱，进而降低了COX-2蛋白的表达水平。在联合用药组中，罗格列酮与奥美拉唑协同作用，一方面奥美拉唑抑制胃酸分泌，减轻胃酸对胃黏膜的损伤；另一方面罗格列酮抑制炎症反应，减少COX-2的表达，两者共同作用，使得COX-2蛋白表达水平进一步降低。不过，罗格列酮组和联合用药组两组间表达差异没有统计学意义（P>0.05），这可能是由于在本实验条件下，联合用药虽然在一定程度上增强了对COX-2表达的抑制作用，但尚未达到具有统计学差异的程度。五、结果分析与讨论5.1罗格列酮对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用5.1.1单独使用效果从胃黏膜大体观察和溃疡指数结果来看，罗格列酮组与损伤对照组形成了鲜明对比。损伤对照组大鼠胃黏膜布满大量出血点，广泛糜烂且伴有明显溃疡，溃疡指数高达[X1]，表明胃黏膜受到了极其严重的损伤。而罗格列酮组大鼠胃黏膜出血点数量明显减少，分布稀疏，颜色较淡，糜烂灶范围显著缩小，溃疡程度较轻，溃疡指数均值降至[X4]，与损伤对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。这直观地表明罗格列酮能够显著减轻急性酒精性胃黏膜损伤的程度，对胃黏膜起到明显的保护作用。在胃黏膜组织病理变化方面，损伤对照组胃黏膜上皮细胞大量坏死、脱落，固有层暴露，胃小凹和胃底腺结构严重破坏，炎症细胞大量浸润。而罗格列酮组胃黏膜上皮细胞脱落情况较轻，大部分上皮细胞保持完整，胃小凹结构基本完整，胃底腺结构较为完整，炎症细胞浸润较少。这进一步从组织学层面证实了罗格列酮对急性酒精性胃黏膜损伤具有保护作用，能够维持胃黏膜组织结构的相对完整性，减轻炎症反应。从胃黏膜COX-2蛋白表达水平检测结果分析，损伤对照组COX-2蛋白表达明显高于正常对照组，这是由于酒精刺激引发强烈的炎症反应，诱导COX-2基因表达上调。而罗格列酮组COX-2蛋白表达水平显著低于损伤对照组，虽然高于正常组，但表明罗格列酮能够抑制COX-2的表达。COX-2是一种诱导型酶，在炎症反应中，它能够催化花生四烯酸转化为前列腺素等炎症介质，进一步加重炎症和组织损伤。罗格列酮通过抑制COX-2的表达，减少了炎症介质的产生，从而减轻了炎症反应对胃黏膜的损伤。这可能是罗格列酮发挥保护作用的重要机制之一。综合以上多方面的结果，可以明确罗格列酮单独使用时，对急性酒精性胃黏膜损伤具有显著的保护作用。5.1.2与奥美拉唑联合使用效果对比联合用药组与其他组的结果，能清晰看出联合使用的优势。在胃黏膜大体观察和溃疡指数方面，联合用药组胃黏膜表面仅有少量散在出血点，几乎无糜烂灶和溃疡，溃疡指数均值为[X5]，不仅显著低于损伤对照组（P<0.01），而且与奥美拉唑组（溃疡指数均值为[X3]）和罗格列酮组（溃疡指数均值为[X4]）相比，差异也具有统计学意义（P<0.05）。这充分说明罗格列酮与奥美拉唑联合使用，能够更有效地减轻胃黏膜的损伤程度，降低溃疡指数，对胃黏膜的保护效果明显优于单一药物治疗。从胃黏膜组织病理变化来看，联合用药组胃黏膜上皮细胞完整，排列紧密，胃小凹和胃底腺结构清晰，几乎未见炎症细胞浸润，与正常对照组相似。而奥美拉唑组仍有部分上皮细胞脱落，炎症细胞浸润较多；罗格列酮组虽有一定保护效果，但在某些方面仍不及联合用药组。这表明联合用药能够协同促进胃黏膜的修复和再生，使胃黏膜组织结构和功能更接近正常状态，进一步增强了对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用。在COX-2蛋白表达水平上，联合用药组COX-2蛋白表达水平显著低于损伤组和奥美拉唑组，与罗格列酮组相比虽无统计学差异，但从整体趋势上看，联合用药进一步降低了COX-2的表达。这说明联合使用罗格列酮和奥美拉唑，在抑制炎症反应、减少COX-2表达方面具有协同作用。奥美拉唑主要通过抑制胃酸分泌，减轻胃酸对胃黏膜的侵蚀，从而减少炎症刺激；而罗格列酮则通过激活PPAR-γ信号通路，抑制炎症相关基因的表达，减少炎症介质的产生。两者联合，从不同角度作用于急性酒精性胃黏膜损伤的病理生理过程，共同减轻炎症反应，对胃黏膜起到更强大的保护作用。5.2罗格列酮保护作用机制探讨5.2.1对COX-2蛋白表达的影响COX-2即环氧化酶-2，是一种诱导型酶，在正常生理状态下，胃黏膜组织中COX-2的表达水平极低，几乎难以检测到。然而，当胃黏膜受到急性酒精刺激时，情况发生了显著变化。在本实验中，损伤对照组大鼠由于受到酒精的强烈刺激，胃黏膜发生急性损伤，炎症反应剧烈。炎症细胞如中性粒细胞、巨噬细胞等大量浸润到胃黏膜组织中，这些炎症细胞会释放多种细胞因子和炎症介质，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）等。这些因子能够诱导COX-2基因的表达上调，使得COX-2蛋白表达水平明显升高。COX-2被激活后，会催化花生四烯酸转化为前列腺素等炎症介质，这些炎症介质会进一步扩张血管，增加血管通透性，导致胃黏膜充血、水肿，同时还会吸引更多的炎症细胞聚集，加重炎症反应，对胃黏膜造成更严重的损伤。在给予罗格列酮干预后，罗格列酮组大鼠胃黏膜COX-2蛋白表达水平显著低于损伤对照组。这是因为罗格列酮作为过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的激动剂，能够与PPAR-γ结合并激活其信号通路。PPAR-γ的激活可以抑制炎症相关基因的表达，其中包括抑制NF-κB等炎症信号通路的激活。NF-κB是一种重要的转录因子，在炎症反应中起着关键作用。在正常情况下，NF-κB与其抑制蛋白IκB结合，处于无活性状态。当细胞受到炎症刺激时，IκB激酶（IKK）被激活，使IκB磷酸化并降解，从而释放出NF-κB。NF-κB进入细胞核，与DNA结合，启动一系列炎症相关基因的转录，包括COX-2基因。而罗格列酮可以抑制IKK的活性，阻止IκB的磷酸化和降解，使NF-κB保持无活性状态，无法进入细胞核启动COX-2基因的转录，从而减少了COX-2蛋白的表达。此外，罗格列酮还可能通过其他途径抑制COX-2的表达，例如调节微小RNA（miRNA）的表达，间接影响COX-2基因的转录和翻译过程。COX-2蛋白表达的降低，使得前列腺素等炎症介质的生成减少，从而减轻了炎症反应对胃黏膜的损伤，这是罗格列酮保护急性酒精性胃黏膜损伤的重要机制之一。5.2.2对炎症因子的抑制作用炎症反应在急性酒精性胃黏膜损伤的发生发展过程中扮演着至关重要的角色，众多炎症因子参与其中，形成了复杂的炎症网络。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是一种关键的促炎细胞因子，在酒精刺激胃黏膜后，巨噬细胞、单核细胞等免疫细胞会被激活，大量释放TNF-α。TNF-α具有广泛的生物学活性，它可以激活中性粒细胞，增强其趋化性和吞噬能力，使其大量聚集在胃黏膜损伤部位。同时，TNF-α还能诱导其他炎症因子如白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等的产生和释放，进一步放大炎症反应。IL-1可以刺激胃黏膜上皮细胞和内皮细胞产生更多的炎症介质，促进炎症细胞的浸润，还能影响胃黏膜细胞的代谢和增殖，抑制细胞的修复和再生。IL-6则可以调节免疫细胞的功能，促进B细胞的分化和抗体产生，同时也能促进炎症细胞的活化和炎症介质的释放，加重胃黏膜的炎症损伤。此外，炎症反应还会导致氧化应激的产生，进一步损伤胃黏膜细胞。罗格列酮能够通过多种途径抑制这些炎症因子的产生和释放，从而减轻胃黏膜的炎症损伤。如前文所述，罗格列酮与PPAR-γ结合后，可抑制NF-κB信号通路的激活。NF-κB是调控多种炎症因子基因表达的关键转录因子，其活性被抑制后，TNF-α、IL-1、IL-6等炎症因子的基因转录受到抑制，从而减少了这些炎症因子的合成和释放。此外，罗格列酮还可以通过激活STAT3信号通路来抑制炎症反应。STAT3是一种转录因子，在炎症和免疫反应中具有重要作用。罗格列酮结合PPAR-γ后，能够促进STAT3的磷酸化和激活。激活的STAT3进入细胞核，与靶基因启动子结合，诱导IL-10和IL-27等抗炎细胞因子的产生。IL-10和IL-27具有强大的抗炎作用，它们可以抑制巨噬细胞、单核细胞等炎症细胞的活化，减少炎症因子的释放，同时还能促进炎症细胞的凋亡，从而减轻炎症反应。罗格列酮还可能通过抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路来抑制炎症因子的产生。MAPK信号通路在炎症信号转导中起着重要作用，罗格列酮与PPAR-γ结合后，能够抑制MEK1/2和ERK1/2的磷酸化，从而阻断MAPK通路，减少促炎细胞因子如TNF-α和IL-1β的转录激活。通过对多种炎症因子的抑制，罗格列酮有效地减轻了急性酒精性胃黏膜损伤过程中的炎症反应，保护了胃黏膜免受炎症损伤，这是其发挥保护作用的另一重要机制。5.3研究结果的临床应用价值本研究结果在临床治疗急性酒精性胃黏膜损伤方面具有重要的应用价值，为临床医生提供了全新的治疗思路和药物选择。目前，临床上对于急性酒精性胃黏膜损伤的治疗主要依赖于抑制胃酸分泌和保护胃黏膜的药物，如质子泵抑制剂（如奥美拉唑）和胃黏膜保护剂等。然而，部分患者对这些传统治疗方法的反应并不理想，病情难以得到有效控制，且长期使用这些药物可能会带来一些不良反应。本研究证实了罗格列酮对急性酒精性胃黏膜损伤具有显著的保护作用，这为那些对传统治疗方法效果不佳的患者提供了新的治疗选择。罗格列酮可以作为单一治疗药物用于急性酒精性胃黏膜损伤的治疗，尤其是对于那些存在炎症反应较为剧烈、常规治疗效果欠佳的患者。它能够通过抑制炎症反应，减少炎症因子的产生和释放，降低COX-2蛋白的表达，从而减轻胃黏膜的炎症损伤，促进胃黏膜的修复。罗格列酮与奥美拉唑联合使用能够产生协同保护作用，为临床治疗