团体标准征求意见稿-乐昌香芋组培苗技术规程

ICS67.080

B31

T/GDSMM

广东省种子协会团体标准

T/GDSMMXXX-2020

乐昌香芋组培种苗生产技术规程

TechnicalSpecificationforSeedlingProductionofLechangtaroTissueCulture

（征求意见稿）

2020年xx月xx日发布2020年xx月xx日实施

广东省种子协会发布

T/GDSMMXXX-2020

乐昌香芋组培种苗生产技术规程

1范围

本标准规定了乐昌香芋组织培养过程中的术语和定义、培养基制备、组培室消毒灭菌、抱子组培苗

生产等方面的技术规程。

本标准适用于乐昌香芋组织培养繁殖苗木。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

DB15/T1939—2020文冠果组织培养育苗技术规程

NY/T391绿色食品产地环境质量

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1外植体explant

植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。外植体通常选择生长健壮的无病虫的植株

上的正常器官或组织。

3.2接种inoculation

在无菌条件下将表面灭菌后的外植体或继代、生根组培材料接入培养基的过程。

4培养基配制

4.1培养基配方

MS培养基：具体成分见附录A中的表A.1。

制备用于不定芽诱导的培养基，配方为：在所述MS培养基上添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）和萘乙

酸（NAA）；在不定芽诱导培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）的浓度为1.0mg/L，萘乙酸（NAA）的浓

度为0.2mg/L。

制备用于继代增殖的培养基，配方为：在所述MS培养基的基础上添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）和

萘乙酸（NAA），在继代增殖培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）的浓度为1-3.0mg/L，萘乙酸（NAA）

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的浓度为0.2mg/L。

制备用于无菌生根的培养基，配方为：在所述MS培养基的基础上添加吲哚丁酸（IBA）

和萘乙酸（NAA），在生根培养基中吲哚丁酸（IBA）的浓度为0.2mg/L，萘乙酸（NAA）的浓度为

1mg/L。

4.1培养基母液及培养基配制

按照DB15/T1939—2020执行。

4.2环境与器具消毒灭菌

按照DB15/T1939—2020执行。

5组织培养技术

5.1外植体及其消毒

选取生长健康的乐昌香芋幼嫩的球茎作为外植体，用中性洗涤剂洗涤球茎，以去除表面的污垢，然

后去除多余的叶片，干净纸巾吸干表面水分，在超净工作台上，先用70%酒精浸泡30s，再用无菌水冲

洗3次，每次3min。

立即转入0.1%的升汞溶液中消毒8-12min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次5min，得到消毒外植

体。

5.2不定芽诱导

在超净工作台内，将消毒外植体切割成0.4×0.5cm的单芽，然后将茎段接种于用于不定芽诱导的

培养基；每瓶接1个外植体，分布均匀，封好瓶口后，注明品种代号、接种人员及日期等，放至培养室

培养，诱导培养18-22d，得到乐昌香芋不定芽。

诱导培养条件如下：温度为26±3℃，湿度为80-90%，光照时间为14h/d，光照强度为800-12001x。

5.3继代增殖

将不定芽诱切除叶片和顶芽，接入继代培养基，置于培养室培养，继代培养20-25d，得到乐昌香

芋丛芽。

接种数量根据培养容器的大小决定，要求材料摆布均匀，间距1.0cm-2.0cm。

继代增殖培养条件如下：温度为26±3℃，湿度为50-65%，光照时间为14h/d，光照强度为800-12001x。

5.4无菌生根

当继代增殖培养的乐昌香芋无菌苗生长到3.0cm-5.0cm时，进行切繁，并保持每株均有一个不定

芽，接入用于无菌生根的培养基中进行生根培养15-20d，得到乐昌香芋幼苗。

接种数量根据培养容器的大小决定，要求材料摆布均匀，间距1.0cm-2.0cm。无菌苗在培养基中的

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插入深度为5mm-8mm，保持壮苗直立。

生根培养条件如下：温度为28±3℃，湿度为70-85%，光照时间为14小时/天，光照强度为800-12001x。

5.5炼苗

香芋幼苗生长至根长0.3cm、苗高5cm后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养5-7d，

5.6假植

然后洗净根部培养基，移入采用64孔的穴盘，基质为泥炭土与园土，比例为5：1，浇定根水1-2次，

保持叶面湿度。保持棚内温度25-30℃，浇水遵循见干见湿原则。

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附录A

（资料性附录）

表A.1MS培养基混合母液配制表

扩大倍扩大后称母液定容体积配置培养基吸取量

编号

母液名称化试名称mg/L数mgmLmL/L

NH4NO316504066000

AKNO319004076000100025

大量元素MgSO4·7H2O3704014800

BCaCl2·2H2O44010044000100010

CKH2PO417010017000100010

FeSO4·7H2O27.81002780

铁盐D100010

Na2EDTA·2H2O37.21003720

MnSO4·4H2O22.31002230

微量元素EZnSO4·7H2O8.6100860100010

H3BO36.2100620

KI0.8310083

Na2MoO4·2H2O0.2510025

F100010

CuSO4·5H2O0.0251002.5

CoCl2·6H2O0.0251002.5

有机成分甘氨酸2100200

盐酸硫胺素B10.110010

G10001

盐酸吡哆酸B60.510050

烟酸0.510050

H肌醇100100500050010

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前  言

本文件按照GB/T1.1—2020的规定进行编制。

本文件由广东省农业科学院作物研究所提出。

本文件由广东省种子协会归口。

本文件起草单位：广东省农业科学院作物研究所、乐昌市现代农业产业发展中心、乐昌昌农农业投

资有限公司、乐昌市农业技术推广总站、广州禾立田生物科技有限公司、化海关综合服务技术中心。

本文件主要起草人：王继华、蔡时可、梅瑜、沈鸿云、陈玉梅、赵海丽、陈小媛、杨元秀、黄丽君、

罗群胜、王泽清、邵振芳、邓永辉、颜素娟。

本标准为首次发布。

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乐昌香芋组培种苗生产技术规程

1范围

本标准规定了乐昌香芋组织培养过程中的术语和定义、培养基制备、组培室消毒灭菌、抱子组培苗

生产等方面的技术规程。

本标准适用于乐昌香芋组织培养繁殖苗木。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

DB15/T1939—2020文冠果组织培养育苗技术规程

NY/T391绿色食品产地环境质量

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1外植体explant

植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。外植体通常选择生长健壮的无病虫的植株

上的正常器官或组织。

3.2接种inoculation

在无菌条件下将表面灭菌后的外植体或继代、生根组培材料接入培养基的过程。

4培养基配制

4.1培养基配方

MS培养基：具体成分见附录A中的表A.1。

制备用于不定芽诱导的培养基，配方为：在所述MS培养基上添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）和萘乙

酸（NAA）；在不定芽诱导培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）的浓度为1.0mg/L，萘乙酸（NAA）的浓

度为0.2mg/L。

制备用于继代增殖的培养基，配方为：在所述MS培养基的基础上添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）和

萘乙酸（NAA），在继代增殖培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）的浓度为1-3.0mg/L，萘乙酸（NAA）

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的浓度为0.2mg/L。

制备用于无菌生根的培养基，配方为：在所述MS培养基的基础上添加吲哚丁酸（IBA）

和萘乙酸（NAA），在生根培养基中吲哚丁酸（IBA）的浓度为0.2mg/L，萘乙酸（NAA）的浓度为

1mg/L。

4.1培养基母液及培养基配制

按照DB15/T1939—2020执行。

4.2环境与器具消毒灭菌

按照DB15/T1939—2020执行。

5组织培养技术

5.1外植体及其消毒

选取生长健康的乐昌香芋幼嫩的球茎作为外植体，用中性洗涤剂洗涤球茎，以去除表面的污垢，然

后去除多余的叶片，干净纸巾吸干表面水分，在超净工作台上，先用70%酒精浸泡30s，再用无菌水冲

洗3次，每次3min。

立即转入0.1%的升汞溶液中消毒8-12min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次5min，得到消毒外植

体。