（正式版）DB22∕T 3495-2023 《露地辣椒疫病诊断与防治技术规程》

222023-09-28发布DB22/T3495—2023I请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的DB22/T3495—20231露地辣椒疫病诊断与防治技术规程GB/T8321（所有部分）农药合理使用聚合酶链式反应polymerasechainreacti4辣椒疫病诊断与防治技术程序的构成辣椒疫病诊断与防治程序主要包括以下几个阶段，流程见图2症害诊断(见第5章)症害诊断(见第5章)症状诊断(见5.1)病原菌诊断(见5.2)病害综合防治(见第6章)图1辣椒疫病诊断与防治程序流程5病害诊断5.1症状诊断5.1.1病害样本采集在田间采集有代表性的发病植株，用于症状识别与病原菌鉴定。5.1.2苗期症状主要在根和茎基部发病，呈暗绿色水渍状病斑，病部变软、变褐、缢缩，病株猝倒和湿腐，有时也呈立枯状死亡。5.1.3成株期症状成株期的根、茎、叶和果实都能发病。具体表现如下：a)根部染病，发病初期呈淡褐色湿腐状病斑，逐渐变为黑褐色，导致根部及根颈部韧皮部腐烂，木质部变淡褐色，引起整株萎蔫死亡，典型症状参见图A.1;b)茎枝染病，发病初期病斑为水浸状，环绕茎枝表面扩展，导致茎枝黑杆，病部以上枝叶迅速凋萎，典型症状参见图A.2;c)叶部染病，产生边缘不明显的黄绿色病斑，病斑呈圆形或近圆形，病叶很快湿腐脱落，参见图d)果实染病，发病部位始于蒂部，发病初期产生暗绿色水浸状病斑，后期逐渐扩大可遍及整个果实，病果迅速变褐软腐，湿度大时，表面长出灰白色霉层，干燥后形成暗褐绿色僵果，残留在枝上，典型症状参见图A.4。35.2.1.1.1取洁净的载玻片，在中间滴一滴清水，用洁净的解剖针等直接挑取病部或培养基上的霉状5.2.1.1.2加盖盖玻片，使盖玻片一侧边缘与水滴边缘接触，并慢慢放下盖玻片，避免产生气泡，待在普通光学显微镜物镜10×10倍的视野下进行形态观察：a)菌丝无色，无隔膜，形态图参见图B.1;b)游动孢囊梗3根～5根成束由叶背气孔伸出，具3个～4个分枝，其顶端膨大形成游动孢c)游动孢子囊单胞无色，卵圆形，顶端有乳头状突起，大小为(23～40)μm×(18～22)μm,形5.2.2.1.1采集具有典型疫病症状的发病组织，在病健交界处剪成5mm²~10mm²小块，在超净工作台上浸于75%酒精中表面消毒30s,再用3%次氯酸钠消毒2min～3min,用无菌水漂洗3次；5.2.2.1.2取4小块病叶置于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基中，在25℃光暗交替培养2d~以基因组DNA为模板，采用通用引物ITS4/ITS5(ITS4:5’-TCCTCCGCT扩增产物检测结果表明ITS序列长度约为800bp,检测结果参见图C.1。号为LJ10)为辣椒疫霉菌(P.capsiciLeonian),其ITS序列长度为821bp,详细序列参见C.4。采用mega7邻接法方法，基于ITS序列建立了辣椒疫霉菌(编号为LJ10)的系统发育树，参见图C.2。DB22/T3495—20234根据栽培习性及气候条件，选择抗病品种，优先选择兼抗两种以上辣椒病害的品种。与玉米、大豆及十字花科蔬菜、葱蒜类蔬菜等非茄科作物进行kg，N:P:K=1:0.5:1.2，适量增施中量元素及微量元素。蹲苗结束后，浇一次透水，视辣椒生长情况，播种前，首先是用55℃~60℃温水浸种20min，再用清水浸种10h～12h，28℃条件下催3次。主要农药种类、作用方式、使用时期及施药量5DB22/T3495—2023(资料性)辣椒疫病症状图片A.1辣椒疫病不同发病部位典型症状辣椒疫病典型症状图片见图A.1～A.4。图A.2茎枝部症状图A.3叶部症状6DB22/T3495—20237(资料性)病原菌显微形态及纯化菌落形态B.1病原菌显微形态病原菌形态见图B.1～B.3。图B.1病原菌菌丝的形态(显微镜10×10倍数)图B.2病原菌游动孢子囊梗(显微镜10×10倍数)图B.3病原菌游动孢子囊(显微镜10×10倍数)8B.2病原菌纯化的菌落形态DB22/T3495—20239C.1.1将灭菌的研砵，研杵及药匙备用，配置好的CTC.1.2先加入少量灭菌的石英砂于适量扩繁的病菌菌丝体中迅速研磨后分装于离心管中，再加入事先摇匀一次，并开盖放气，防止因为气体受热膨胀而使盖子C.1.4移取上清液至新离心管中，加入2倍体积的无水乙醇，轻轻转动离心管，使DNA沉淀，待白C.1.5弃上清液，吸取适量75%的酒精于离心管中，轻轻摇匀，离心5mC.2.2.3在凝胶成像系统进行电泳结果观察，判断是否为预扩增长度的条带，无非特异性条带，且浓DB22/T3495—2023图C.1ITS经PCR扩增后产物电泳检测结果PCR产物测序，确定了辣椒疫霉菌ITS序列片段大小为821bp。1CGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCACACCTAAAA61AACCGTATCAACCCTTTTAGTTGGGGGTCTTGTACCCTATCATGGCGAATGTTTGGACTT121CGGTCCGGGCGAGTAGCTTTTTGTTTTAAACCCATTTCACAATTC181GACGAAAGTCTCTGCTTTT241CATCGATGAAGAACGCTGCGAACTGC301ATCGAAATTTTGAACGCATATTGCA361TGTCCGTACATCAAACTTGGCTTTC421GTGAAGTGTCTTGCGTGTTGTCCTTCGGGTCGACTGCGAGTCCTTTTAAATGTACTG481TGTACTTCTCTTTGCTCGAAAAGCGTG541AGTCGGCGAC(CGGTTTGTCTGCTGCGGCGTTTAAAGGAGGAGTGTTCG601GTTGGCTTCGGCTGAACAGGCGCTTATTGAATGCTTTTCCTGCTGTGGCGTGA661GTGAACCGTAGCTGTGTTTGGCTTGGCTTTTGAATCGGCTTTGC721GGCGGCTTCGGCTGTCGAGGGTCGATCCATTTTGGGAATTTTGTGTGCAC781ATCTCAATTGGACCTGATATCAGGCAAGATTACCCGCTATAC.5辣椒疫霉菌(P.capsiciLeonian)发育系统树基于ITS序列，采用mega7邻接法方法建立了辣椒疫霉菌(编号为LJ10)的系统发育树，见图C.2。PhytophthoragonapodyidesS1-5(MF034093)PhytophthoraborealisAKWA43.2-0708(JQ626597)PhytophthorapalmivoraM2(MN831454)PhytophthorapalmivoraM1(MN831455)Phytophthorainfestans09-YEL(MW829630)PhytophthorainfestaPhytophthoracapsPhytophthoracaps100PhytophthoracapsiciJS6(FusariumsolaniMRC-2565(MH582400)图