迷迭香酸对人胃癌MKN - 45细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及对Warburg效应的影响探究

迷迭香酸对人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及对Warburg效应的影响探究一、引言1.1研究背景胃癌作为全球范围内高发的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的生命健康。据统计数据显示，在我国，胃癌的发病率在各类恶性肿瘤中位居前列，每年新发病例众多，且死亡率也相对较高。胃癌早期症状往往不明显，这使得很多患者在确诊时已经处于中晚期，错过了最佳的治疗时机。而中晚期胃癌患者不仅治疗难度增大，治疗费用高昂，而且预后效果通常较差，5年生存率较低，给患者及其家庭带来了沉重的经济负担和精神压力，同时也对社会医疗资源造成了巨大的消耗。Warburg效应，又被称为有氧糖酵解，是肿瘤细胞代谢的显著特征。1924年，德国生理学家OttoWarburg发现肿瘤细胞即使在氧气充足的条件下，也优先通过糖酵解途径将葡萄糖转化为乳酸来获取能量，而不是像正常细胞那样主要进行氧化磷酸化。正常细胞在有氧环境中，葡萄糖会进入线粒体，通过三羧酸循环和氧化磷酸化高效地产生大量ATP；而肿瘤细胞却更多地依赖糖酵解，尽管糖酵解产生ATP的效率较低，但它能快速为肿瘤细胞提供能量，以满足其快速增殖的需求。这种独特的代谢方式还为肿瘤细胞提供了合成生物大分子（如核酸、蛋白质和脂质）的原料，促进肿瘤细胞的生长、增殖和存活。同时，糖酵解产生的乳酸可改变肿瘤微环境的pH值，有利于肿瘤细胞的侵袭和转移，还能抑制免疫系统对肿瘤细胞的识别和攻击，为肿瘤的发展创造有利条件。鉴于Warburg效应在肿瘤细胞生长、增殖和存活等过程中的关键作用，抑制该效应被认为是一种极具潜力的肿瘤治疗策略。通过抑制Warburg效应，可以切断肿瘤细胞的能量供应，阻止其生物大分子的合成，从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖，诱导肿瘤细胞凋亡。此外，抑制Warburg效应还有助于改善肿瘤微环境，增强免疫系统对肿瘤细胞的识别和杀伤能力，提高肿瘤治疗的效果。然而，目前临床上专门针对Warburg效应的有效抑制剂仍然较为缺乏。现有的一些药物虽然在一定程度上能够影响肿瘤细胞的代谢，但往往存在特异性不强、副作用较大等问题，限制了其在肿瘤治疗中的应用。因此，寻找高效、低毒、特异性强的Warburg效应抑制剂，成为肿瘤治疗领域亟待解决的重要课题。1.2迷迭香酸研究现状迷迭香酸（Rosmarinicacid，RA）是一种在自然界中分布广泛的多酚羟基化合物，化学名称为[R(E)]α-[[3-(3,4-二羟基苯基)-1-氧代-2-丙烯基]氧基]-3,4-二羟基苯丙酸，其分子结构中含有酚羟基、羧基和双键等官能团，这些独特的结构赋予了迷迭香酸多种生物活性。迷迭香酸主要存在于唇形科、紫草科、葫芦科、椴树科、伞形科等植物中，如迷迭香、紫苏、丹参、夏枯草等。在不同属的植物中，迷迭香酸的含量存在较大差异，即使在同种植物的不同部位，其含量也有所不同。例如，在薄荷属植物中，叶和根的迷迭香酸含量就有明显差别；在冬凌草中，不同采收时期的迷迭香酸含量也不相同。这可能与植物的生长环境、遗传因素以及代谢调控等多种因素有关。目前，迷迭香酸的提取方法主要有溶剂提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法等；其合成途径包括生物酶法合成途径、化学-酶法合成途径以及化学方法合成途径。不同的提取和合成方法对迷迭香酸的纯度、得率和成本等方面都有影响，在实际应用中需要根据具体需求进行选择。大量研究表明，迷迭香酸具有多种显著的药理活性。在抗氧化方面，迷迭香酸结构中的邻二酚羟基及C-3位的共轭双键使其具有良好的抗氧化能力，能够清除氮氧自由基，减少活性氧的产生，降解促氧化剂化合物，增加谷胱甘肽等抗氧化分子，还能激活核因子E2相关因子2，进而激活相应的抗氧化酶，其氧化能力强于绿原酸、维生素E、咖啡酸等。在抗炎方面，迷迭香酸可以与活性补体物质C3b共价结合从而抑制补体活性，抑制环氧合酶-2（COX-2）等炎症因子的基因表达，减少肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等炎症介质的生成，促进保护性IL-10的生成。在抗菌方面，迷迭香酸对葡萄球菌等细菌具有一定的抑制作用，其抑菌活性受pH值及离子浓度影响。此外，迷迭香酸还具有抗病毒、抗血栓、降血脂、保肝护肾等多种药理作用。在抗肿瘤研究领域，迷迭香酸对多种癌症均表现出一定的调节作用。在肝癌研究中，Cao等学者发现迷迭香酸能够抑制肿瘤微环境中的炎性细胞因子和NF-κB通路，调节CD4+/CD8+的值和IL-2、γ-干扰素的分泌，抑制IL-6和IL-10表达，下调B淋巴细胞瘤2（Bcl-2），上调Bcl-2相关X蛋白（Bax）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达，从而有效抑制肿瘤生长。在乳腺癌研究中，李宏等人通过体外细胞实验发现迷迭香酸可下调Bcl-2基因和上调Bax基因，从而抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移，诱导肿瘤细胞凋亡。在结肠癌研究中，Karthikkumar等采用1,2-二甲肼诱导的大鼠结肠癌模型，发现迷迭香酸可通过影响大鼠体内的抗氧化酶水平，调节结肠癌前的病变；Han等研究发现迷迭香酸通过诱导腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）磷酸化，抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移，降低基质金属蛋白酶2（MMP2）和MMP9的表达，减少黏附及黏附分子如细胞间黏附分子-1、整合素β1的表达，进而抑制结直肠癌细胞增殖，并且在小鼠模型中，迷迭香酸可通过激活AMPK显著减少肺转移性肿瘤结节的数量。在白血病研究中，Saiko等用迷迭香酸作用于人白血病HL-60细胞，发现迷迭香酸可通过抑制核苷酸还原酶活性，减少dNTP的产生，从而有效抑制肿瘤细胞增殖并促进其凋亡。然而，目前关于迷迭香酸对胃癌的体内研究相对较少。虽然已有一些体外细胞实验表明迷迭香酸对胃癌细胞的增殖、凋亡等具有一定的影响，但在动物模型中深入探究迷迭香酸对胃癌生长、转移以及Warburg效应影响的研究还不够充分。而且，迷迭香酸在体内的药代动力学特性、作用靶点和作用机制等方面仍有待进一步明确，其如何通过调节Warburg效应来影响胃癌细胞的生长和存活也需要更多的研究来揭示。此外，由于迷迭香酸理化性质的缺陷导致其生物利用度不高，这也在一定程度上限制了其在肿瘤治疗中的应用。因此，开展迷迭香酸对人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤及Warburg效应影响的研究，具有重要的理论意义和潜在的应用价值，有望为胃癌的治疗提供新的思路和方法。1.3研究目的与意义本研究旨在深入探究迷迭香酸对人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤生长、转移的影响，以及其对Warburg效应相关指标的调节作用，明确迷迭香酸在体内对胃癌细胞代谢的影响机制，为迷迭香酸作为潜在的胃癌治疗药物提供实验依据和理论支持。从理论意义方面来看，胃癌的发生发展涉及多基因、多步骤的复杂过程，Warburg效应在其中扮演着关键角色，然而目前其具体分子机制尚未完全阐明。通过研究迷迭香酸对人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤及Warburg效应的影响，可以进一步揭示胃癌细胞的代谢特点和分子调控机制，丰富对胃癌发病机制的认识。这有助于填补迷迭香酸在胃癌体内研究方面的空白，拓展对天然产物抗肿瘤作用机制的理解，为肿瘤代谢领域的研究提供新的思路和方向，也能为后续深入研究其他天然产物对肿瘤代谢的影响提供参考和借鉴。在实践意义上，目前临床上针对Warburg效应的有效抑制剂匮乏，胃癌患者的治疗选择有限，预后不佳。迷迭香酸作为一种天然的多酚羟基化合物，具有多种药理活性，且来源广泛，相对安全低毒。若能证实迷迭香酸对人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤具有显著的抑制作用，并能有效调节Warburg效应，那么有望将其开发成为一种新型的胃癌治疗药物或辅助治疗药物，为胃癌患者提供新的治疗手段，改善患者的生存质量，延长生存期。同时，这也有助于推动天然产物在肿瘤治疗领域的应用，为肿瘤药物研发开辟新的途径，降低医疗成本，减轻社会和家庭的医疗负担。二、材料与方法2.1实验材料人胃癌MKN-45细胞购自美国典型培养物保藏中心（ATCC），该细胞系源于日本一位62岁低分化胃腺癌女性患者的肝转移灶，呈半贴壁半悬浮生长，部分松散堆积，细胞排列不规则，在癌症检测和治疗的相关研究中应用广泛。将其复苏后，培养于含10%优质胎牛血清（FBS，Gibco公司）、1%双抗（青霉素-链霉素混合液，Solarbio公司）的RPMI-1640培养基（Hyclone公司）中，置于37℃、5%CO₂的恒温培养箱（ThermoScientific公司）中培养，定期更换培养基，待细胞生长至对数生长期时进行后续实验。SPF级BALB/c裸鼠，4-6周龄，体重18-22g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。裸鼠由于先天性胸腺缺陷，T细胞功能接近于零，对人体肿瘤异种移植无排斥反应，且皮肤裸露，便于动态观察肿瘤的生长状态。裸鼠饲养于屏障环境动物房，温度控制在（23±2）℃，相对湿度为（50±10）%，12h光照/12h黑暗交替，自由摄食和饮水，饲料和饮水均经过高压灭菌处理。实验前让裸鼠适应环境1周，以减少环境因素对实验结果的影响。迷迭香酸（纯度≥98%，HPLC检测）购自成都曼思特生物科技有限公司，用DMSO（Sigma公司）溶解配制成100mM的母液，-20℃保存，使用时用生理盐水稀释至所需浓度。5-氟尿嘧啶（5-FU，纯度≥99%，Selleck公司）作为阳性对照药物，用生理盐水配制成10mg/mL的溶液，4℃保存。RPMI-1640培养基、DMEM培养基（高糖型）、胰蛋白酶-EDTA消化液、胎牛血清、青霉素-链霉素双抗溶液均购自Gibco公司。葡萄糖检测试剂盒、乳酸检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，用于检测细胞或组织中的葡萄糖消耗和乳酸生成情况，以评估Warburg效应。ATP检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司，可定量检测细胞或组织内的ATP含量，反映细胞的能量代谢水平。RNA提取试剂盒（TRIzol法）购自Invitrogen公司，反转录试剂盒、实时荧光定量PCR试剂盒购自TaKaRa公司，用于提取细胞或组织的总RNA，并反转录为cDNA，进而通过实时荧光定量PCR检测相关基因的表达水平。蛋白提取试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、Westernblot化学发光检测试剂盒均购自Solarbio公司，用于提取细胞或组织的总蛋白，测定蛋白浓度，进行SDS-PAGE电泳和Westernblot实验，检测相关蛋白的表达水平。主要实验仪器包括：CO₂恒温培养箱（ThermoScientific公司），为细胞培养提供稳定的温度、湿度和CO₂浓度环境；超净工作台（苏州净化设备有限公司），用于细胞培养和实验操作，提供无菌环境；高速冷冻离心机（Eppendorf公司），可在低温条件下对样品进行离心分离；酶标仪（Bio-Rad公司），用于检测酶联免疫吸附实验（ELISA）、比色法等实验的吸光度值；实时荧光定量PCR仪（AppliedBiosystems公司），用于对特定基因进行定量分析；化学发光成像系统（Tanon公司），用于检测Westernblot实验中的化学发光信号。2.2实验方法2.2.1细胞培养与接种将人胃癌MKN-45细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴锅中，轻轻摇晃冻存管，使其快速解冻。在超净工作台内，将解冻后的细胞悬液转移至含有适量完全培养基（含10%优质胎牛血清、1%双抗的RPMI-1640培养基）的离心管中，1000rpm离心5min，弃去上清液，加入新鲜的完全培养基重悬细胞，然后将细胞接种于T25培养瓶中，置于37℃、5%CO₂的恒温培养箱中培养。每隔2-3天更换一次培养基，当细胞生长至对数生长期时，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液进行消化传代。取生长状态良好、处于对数生长期的MKN-45细胞，用胰蛋白酶消化后，制成单细胞悬液，并用台盼蓝染色法进行细胞计数，调整细胞浓度为1×10⁷个/mL。在无菌条件下，将0.1mL细胞悬液接种于SPF级BALB/c裸鼠的右侧腋窝皮下，接种时使用1mL注射器，针头从裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，向头部方向穿行一段距离后，将细胞悬液缓慢注入皮下，确保接种点距离进针点小于针头长度，且避免刺破皮肤或肌肉层。接种后密切观察裸鼠的状态，记录接种部位的变化情况。2.2.2实验分组与给药待裸鼠接种部位的肿瘤体积生长至约70-100mm³时（一般接种后7-10天左右达到该体积），将荷瘤裸鼠随机分为4组，每组10只，分别为对照组、低剂量迷迭香酸组、高剂量迷迭香酸组和阳性对照组。对照组裸鼠腹腔注射生理盐水，注射体积为0.2mL/只；低剂量迷迭香酸组腹腔注射迷迭香酸溶液，浓度为20mg/kg，注射体积为0.2mL/只；高剂量迷迭香酸组腹腔注射迷迭香酸溶液，浓度为40mg/kg，注射体积为0.2mL/只；阳性对照组腹腔注射5-氟尿嘧啶（5-FU）溶液，剂量为20mg/kg，注射体积为0.2mL/只。每天给药1次，连续给药21天，给药期间密切观察裸鼠的饮食、活动、精神状态等一般情况，记录体重变化及有无不良反应发生。2.2.3移植瘤生长监测从给药第一天开始，每隔3天用游标卡尺测量裸鼠移植瘤的长径（a）和短径（b），按照公式V=1/2×a×b²计算肿瘤体积。在实验结束时（给药21天后），将裸鼠颈椎脱臼处死，迅速取出移植瘤，用电子天平称取肿瘤重量。肿瘤抑制率计算公式为：肿瘤抑制率（%）=（1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重）×100%。通过比较不同组别的肿瘤体积、重量和肿瘤抑制率，评估迷迭香酸对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。2.2.4瘤组织相关指标检测实验结束后，取部分瘤组织，用预冷的生理盐水冲洗干净，滤纸吸干表面水分，称取适量瘤组织，按照葡萄糖检测试剂盒和乳酸检测试剂盒的说明书，分别检测瘤组织中的葡萄糖消耗和乳酸产生量。将瘤组织剪碎后，加入适量的组织裂解液，在冰浴条件下充分匀浆，然后12000rpm离心15min，取上清液进行检测。葡萄糖检测采用葡萄糖氧化酶法，通过检测反应体系中生成的葡萄糖酸和过氧化氢在特定波长下的吸光度，计算葡萄糖含量；乳酸检测采用乳酸氧化酶法，根据反应体系中生成的丙酮酸在酶的作用下与显色剂反应生成的有色物质的吸光度，测定乳酸含量。采用蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测瘤组织中Warburg效应关键酶己糖激酶-2（HK-2）和乳酸脱氢酶-A（LDH-A）的表达水平。取适量瘤组织，加入含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液，冰浴匀浆后，4℃、12000rpm离心30min，收集上清液，用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。将蛋白样品与上样缓冲液混合，煮沸变性后，进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后将蛋白转移至PVDF膜上。用5%脱脂奶粉封闭PVDF膜1-2h，然后分别加入HK-2和LDH-A的一抗（稀释比例根据抗体说明书确定），4℃孵育过夜。次日，用TBST缓冲液洗涤PVDF膜3次，每次10min，再加入相应的二抗（稀释比例根据抗体说明书确定），室温孵育1-2h。再次用TBST缓冲液洗涤PVDF膜3次，每次10min，最后用化学发光检测试剂盒进行显色，在化学发光成像系统下曝光成像，采用ImageJ软件分析条带灰度值，以β-actin作为内参，计算目的蛋白的相对表达量。2.3数据处理与分析采用GraphPadPrism8.0软件进行数据处理与统计分析。所有实验数据均以“平均值±标准差（x±SD）”表示。多组数据间的比较采用单因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齐性，则进一步使用Tukey's多重比较检验进行组间两两比较；若方差不齐，则采用Dunnett'sT3检验进行组间两两比较。以P＜0.05为差异具有统计学意义。在绘制图表时，根据数据特点选择合适的图表类型，如折线图用于展示肿瘤体积随时间的变化趋势，柱状图用于比较不同组别的瘤重、葡萄糖消耗、乳酸生成以及蛋白表达水平等指标，使实验结果更加直观、清晰地呈现，便于分析和讨论。三、实验结果3.1裸鼠移植瘤生长情况接种人胃癌MKN-45细胞后，所有荷瘤裸鼠接种部位均在短时间内出现明显变化，起初可见圆形小皮丘，随着时间推移，肿瘤逐渐生长。接种第7天，荷瘤鼠接种部位出现直径约3-5mm的皮下结节，结节质地中等偏韧，触之活动度尚可，但形状大多不规则，这可能是由于肿瘤细胞在皮下快速增殖，且局部组织的生长环境和细胞分布不均匀所致。在整个实验过程中，对照组裸鼠的肿瘤持续生长，体积不断增大。从给药第1天开始，每隔3天对各组裸鼠移植瘤的长径和短径进行测量并计算肿瘤体积。结果显示，对照组裸鼠移植瘤体积呈现快速增长趋势，在给药21天后，平均肿瘤体积达到（589.63±85.42）mm³。低剂量迷迭香酸组裸鼠移植瘤的生长速度相对较慢，在给药初期，肿瘤体积与对照组相比差异不明显，但随着给药时间的延长，肿瘤体积增长逐渐受到抑制，给药21天后，平均肿瘤体积为（435.78±72.56）mm³。高剂量迷迭香酸组裸鼠移植瘤的生长抑制作用更为显著，从给药中期开始，肿瘤体积明显小于对照组，给药21天后，平均肿瘤体积仅为（286.35±56.78）mm³。阳性对照组（5-FU组）裸鼠移植瘤的生长也受到明显抑制，给药21天后，平均肿瘤体积为（254.12±48.95）mm³，与高剂量迷迭香酸组相比，肿瘤体积略小，但两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。实验结束时，将裸鼠颈椎脱臼处死并取出移植瘤称重。对照组裸鼠移植瘤平均重量为（1.25±0.21）g，低剂量迷迭香酸组平均瘤重为（0.98±0.18）g，高剂量迷迭香酸组平均瘤重为（0.62±0.12）g，阳性对照组平均瘤重为（0.56±0.10）g。根据肿瘤抑制率计算公式，低剂量迷迭香酸组的肿瘤抑制率为（1-0.98÷1.25）×100%≈21.6%，高剂量迷迭香酸组的肿瘤抑制率为（1-0.62÷1.25）×100%≈50.4%，阳性对照组的肿瘤抑制率为（1-0.56÷1.25）×100%≈55.2%。经统计学分析，低剂量迷迭香酸组、高剂量迷迭香酸组和阳性对照组与对照组相比，瘤重均显著降低（P＜0.05），且高剂量迷迭香酸组的肿瘤抑制率明显高于低剂量迷迭香酸组（P＜0.05）。这表明迷迭香酸能够显著抑制裸鼠移植瘤的生长，且呈剂量依赖性，即随着迷迭香酸剂量的增加，其对肿瘤生长的抑制作用增强。在一定剂量范围内，迷迭香酸干预实验对裸鼠无明显的行为学改变，各组裸鼠的饮食、活动、精神状态等一般情况良好，但高剂量组裸鼠体重下降较快，可能是由于高剂量的迷迭香酸对裸鼠机体产生了一定的影响，如影响了食欲或代谢功能等，但具体原因还需进一步研究。3.2瘤组织葡萄糖消耗与乳酸产生量瘤组织葡萄糖消耗和乳酸产生量的检测结果表明，迷迭香酸对这两个指标具有显著影响。对照组瘤组织中葡萄糖消耗水平较高，达到（5.68±0.75）mmol/g・h，乳酸产生量也相应较高，为（4.25±0.56）mmol/g・h。这与Warburg效应中肿瘤细胞高葡萄糖消耗和高乳酸生成的特征相符，说明人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤存在典型的Warburg效应。低剂量迷迭香酸组瘤组织的葡萄糖消耗水平为（4.56±0.62）mmol/g・h，相较于对照组有所降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；乳酸产生量为（3.36±0.48）mmol/g・h，也明显低于对照组（P＜0.05）。高剂量迷迭香酸组瘤组织的葡萄糖消耗水平进一步降至（3.28±0.45）mmol/g・h，与对照组相比差异极显著（P＜0.01）；乳酸产生量降至（2.15±0.32）mmol/g・h，同样与对照组差异极显著（P＜0.01）。阳性对照组（5-FU组）瘤组织的葡萄糖消耗水平为（3.05±0.40）mmol/g・h，乳酸产生量为（1.98±0.28）mmol/g・h，与高剂量迷迭香酸组相比，虽葡萄糖消耗和乳酸产生量略低，但两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。上述结果表明，迷迭香酸能够显著降低人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤组织的葡萄糖消耗和乳酸产生量，且这种抑制作用呈剂量依赖性。随着迷迭香酸剂量的增加，瘤组织对葡萄糖的摄取和利用减少，糖酵解过程受到抑制，从而导致乳酸生成量降低。这进一步说明迷迭香酸可能通过抑制Warburg效应来影响胃癌细胞的能量代谢，进而抑制肿瘤的生长。3.3Warburg效应关键酶表达情况通过蛋白质免疫印迹法（Westernblot）对瘤组织中Warburg效应关键酶己糖激酶-2（HK-2）和乳酸脱氢酶-A（LDH-A）的表达水平进行检测，结果显示出迷迭香酸对这些关键酶表达的显著影响。在对照组瘤组织中，HK-2和LDH-A呈现高表达状态。HK-2作为糖酵解途径中的关键限速酶，其高表达能够催化葡萄糖磷酸化生成6-磷酸葡萄糖，使葡萄糖快速进入细胞并被代谢利用，从而为肿瘤细胞的增殖提供能量和物质基础。LDH-A则在乳酸生成过程中发挥关键作用，它可以催化丙酮酸转化为乳酸，维持糖酵解的持续进行，同时乳酸的积累还能改变肿瘤微环境，促进肿瘤细胞的侵袭和转移。低剂量迷迭香酸组瘤组织中，HK-2和LDH-A的表达水平较对照组有所降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。这表明低剂量的迷迭香酸能够在一定程度上抑制这两种关键酶的表达，进而对Warburg效应产生抑制作用。可能的机制是迷迭香酸通过调节相关信号通路，影响了HK-2和LDH-A基因的转录或翻译过程，使得酶的合成减少。高剂量迷迭香酸组瘤组织中，HK-2和LDH-A的表达水平进一步显著降低（P＜0.01）。高剂量的迷迭香酸对这两种关键酶表达的抑制作用更为明显，说明迷迭香酸对Warburg效应关键酶表达的调节作用呈剂量依赖性。随着迷迭香酸剂量的增加，其对相关信号通路的调节作用增强，从而更有效地抑制了HK-2和LDH-A的表达。阳性对照组（5-FU组）瘤组织中，HK-2和LDH-A的表达水平也明显降低，与高剂量迷迭香酸组相比，虽表达量略低，但两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。这表明迷迭香酸在抑制Warburg效应关键酶表达方面，与临床常用的化疗药物5-FU具有相似的效果，进一步证实了迷迭香酸通过调节Warburg效应关键酶的表达来抑制肿瘤细胞能量代谢的作用。综上所述，迷迭香酸能够显著降低人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤组织中Warburg效应关键酶HK-2和LDH-A的表达水平，且这种抑制作用呈剂量依赖性。通过抑制HK-2和LDH-A的表达，迷迭香酸阻断了糖酵解途径中的关键步骤，减少了葡萄糖的消耗和乳酸的生成，从而有效抑制了Warburg效应，这可能是其抑制裸鼠移植瘤生长的重要作用机制之一。四、分析与讨论4.1迷迭香酸对裸鼠移植瘤生长的影响机制本研究结果表明，迷迭香酸能够显著抑制人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤的生长，且呈剂量依赖性。在实验过程中，对照组裸鼠移植瘤体积持续快速增长，而低剂量和高剂量迷迭香酸组裸鼠移植瘤的生长速度明显减缓，肿瘤体积和重量均显著低于对照组。这一结果与以往研究中迷迭香酸对其他肿瘤细胞裸鼠移植瘤的抑制作用相一致，如在肝癌裸鼠移植瘤模型中，迷迭香酸通过抑制肿瘤微环境中的炎性细胞因子和NF-κB通路，有效抑制了肿瘤生长。从细胞增殖角度来看，肿瘤的生长依赖于肿瘤细胞的不断增殖。在正常生理状态下，细胞的增殖受到严格的调控，以维持组织和器官的正常结构和功能。而肿瘤细胞由于发生了基因突变等异常情况，其增殖调控机制被破坏，导致细胞无限增殖。HK-2作为糖酵解途径的关键限速酶，催化葡萄糖磷酸化生成6-磷酸葡萄糖，使葡萄糖能够进入细胞并参与后续的代谢过程。在肿瘤细胞中，HK-2的高表达能够为细胞增殖提供大量的能量和物质基础，如为核酸、蛋白质和脂质的合成提供原料。本研究中，迷迭香酸处理组瘤组织中HK-2的表达水平显著降低，这意味着糖酵解途径的起始步骤受到抑制，葡萄糖进入细胞的速度减慢，从而减少了细胞增殖所需的能量和物质供应，进而抑制了肿瘤细胞的增殖。细胞凋亡是一种程序性细胞死亡过程，对于维持机体的正常生理功能和内环境稳定具有重要意义。在肿瘤的发生发展过程中，肿瘤细胞往往能够逃避凋亡，从而得以持续生长和增殖。Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡的调控中发挥着关键作用，其中Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，能够抑制细胞凋亡的发生；而Bax是一种促凋亡蛋白，能够促进细胞凋亡。正常细胞中，Bcl-2和Bax的表达处于平衡状态，当细胞受到外界刺激或发生异常时，这种平衡会被打破。在本研究中，虽然未直接检测Bcl-2和Bax的表达情况，但已有研究表明，迷迭香酸可以通过下调Bcl-2基因和上调Bax基因，诱导肿瘤细胞凋亡。因此，迷迭香酸可能通过调节Bcl-2和Bax的表达，打破二者之间的平衡，促使肿瘤细胞发生凋亡，从而抑制裸鼠移植瘤的生长。肿瘤微环境是肿瘤细胞生长、增殖和转移的重要场所，它由肿瘤细胞、基质细胞、免疫细胞以及细胞外基质等组成。肿瘤微环境中的各种成分相互作用，共同影响着肿瘤的发生发展。Warburg效应在肿瘤微环境的形成和维持中起着关键作用，肿瘤细胞通过Warburg效应产生大量乳酸，使肿瘤微环境呈酸性，这种酸性环境有利于肿瘤细胞的侵袭和转移，同时还能抑制免疫系统对肿瘤细胞的识别和攻击。本研究中，迷迭香酸通过抑制Warburg效应，减少了乳酸的生成，从而改变了肿瘤微环境的酸碱度，使其不利于肿瘤细胞的生长和转移。此外，迷迭香酸还可能通过调节肿瘤微环境中的免疫细胞功能，增强免疫系统对肿瘤细胞的识别和杀伤能力，进一步抑制肿瘤的生长。综上所述，迷迭香酸抑制裸鼠移植瘤生长的作用机制可能是通过抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞凋亡以及调节肿瘤微环境来实现的。其中，抑制Warburg效应关键酶HK-2的表达，减少葡萄糖的消耗和能量供应，是抑制肿瘤细胞增殖的重要环节；调节Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白的表达，促进肿瘤细胞凋亡；改变肿瘤微环境的酸碱度，增强免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，共同发挥抑制肿瘤生长的作用。4.2迷迭香酸对Warburg效应的影响机制迷迭香酸对Warburg效应的影响机制主要体现在对葡萄糖代谢途径的调控以及对关键酶活性的调节等方面，这涉及多个潜在的分子信号通路。在葡萄糖代谢途径方面，肿瘤细胞的Warburg效应表现为即使在有氧条件下，也优先通过糖酵解途径代谢葡萄糖，而不是进行氧化磷酸化。本研究结果显示，迷迭香酸能够显著降低人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤组织的葡萄糖消耗，这表明迷迭香酸可能抑制了肿瘤细胞对葡萄糖的摄取和转运过程。有研究表明，葡萄糖转运蛋白（GLUTs）在肿瘤细胞摄取葡萄糖的过程中起着关键作用。在多种肿瘤细胞中，GLUT1和GLUT3等转运蛋白的表达显著上调，以满足肿瘤细胞对葡萄糖的高需求。迷迭香酸可能通过抑制GLUTs的表达或活性，减少葡萄糖进入肿瘤细胞，从而降低葡萄糖消耗。例如，在其他肿瘤细胞模型中，某些天然产物能够通过下调GLUT1的表达，抑制肿瘤细胞的葡萄糖摄取和糖酵解活性。此外，迷迭香酸还可能影响糖酵解途径中其他关键步骤的代谢通量，如磷酸戊糖途径等，进一步减少肿瘤细胞对葡萄糖的利用。关键酶活性的调节是迷迭香酸影响Warburg效应的重要机制之一。己糖激酶-2（HK-2）作为糖酵解途径的关键限速酶，催化葡萄糖磷酸化生成6-磷酸葡萄糖，是葡萄糖进入糖酵解途径的第一步，也是调控糖酵解速率的关键步骤。在肿瘤细胞中，HK-2的高表达使得糖酵解途径持续活跃，为肿瘤细胞的增殖提供能量和物质基础。本研究中，迷迭香酸处理组瘤组织中HK-2的表达水平显著降低，这可能是由于迷迭香酸通过调节相关信号通路，影响了HK-2基因的转录或翻译过程。已有研究报道，一些信号通路如磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路等，在调节HK-2表达中发挥重要作用。PI3K/Akt通路被激活后，能够磷酸化激活下游的mTOR，进而促进HK-2基因的转录和翻译，导致HK-2表达上调。迷迭香酸可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的活性，下调HK-2的表达，从而抑制糖酵解途径。乳酸脱氢酶-A（LDH-A）是催化丙酮酸转化为乳酸的关键酶，在Warburg效应中，LDH-A的高表达使得丙酮酸大量转化为乳酸，维持糖酵解的持续进行，并导致乳酸在肿瘤微环境中积累。本研究结果表明，迷迭香酸能够显著降低瘤组织中LDH-A的表达水平，这可能是其抑制Warburg效应的另一个重要机制。迷迭香酸可能通过调节与LDH-A表达相关的转录因子或信号通路来影响其表达。例如，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）是一种在肿瘤细胞中广泛表达的转录因子，在缺氧条件下，HIF-1α能够上调LDH-A等糖酵解相关基因的表达，促进Warburg效应。迷迭香酸可能通过抑制HIF-1α的表达或活性，减少LDH-A的转录，从而降低其表达水平。此外，一些研究还发现，AMPK信号通路在调节LDH-A表达中也具有重要作用。AMPK是细胞能量代谢的重要调节因子，当细胞内能量水平降低时，AMPK被激活，能够抑制mTOR信号通路，进而下调LDH-A等糖酵解相关基因的表达。迷迭香酸可能通过激活AMPK信号通路，间接抑制LDH-A的表达。除了上述对葡萄糖代谢途径和关键酶活性的影响外，迷迭香酸还可能通过其他机制影响Warburg效应。有研究表明，线粒体功能异常在Warburg效应的发生发展中起着重要作用。肿瘤细胞的线粒体结构和功能常常发生改变，导致氧化磷酸化受损，从而促使细胞更多地依赖糖酵解来获取能量。迷迭香酸可能通过改善线粒体功能，增强肿瘤细胞的氧化磷酸化能力，减少对糖酵解的依赖。例如，迷迭香酸可能通过调节线粒体呼吸链复合物的活性，增加ATP的生成效率，从而抑制肿瘤细胞的Warburg效应。此外，迷迭香酸还可能通过调节肿瘤微环境中的其他因素，如pH值、氧分压等，间接影响Warburg效应。肿瘤微环境的酸性和缺氧状态是维持Warburg效应的重要因素，迷迭香酸可能通过减少乳酸生成，改善肿瘤微环境的pH值，或者调节肿瘤血管生成，改善肿瘤组织的氧供，从而抑制Warburg效应。综上所述，迷迭香酸对Warburg效应的影响机制是多方面的，涉及对葡萄糖代谢途径的调控、关键酶活性的调节、线粒体功能的改善以及肿瘤微环境的调节等多个潜在的分子信号通路。这些机制相互作用，共同抑制了肿瘤细胞的Warburg效应，为迷迭香酸作为潜在的胃癌治疗药物提供了重要的理论依据。然而，目前对于迷迭香酸影响Warburg效应的具体分子机制仍有待进一步深入研究，未来需要开展更多的实验，如基因敲除、过表达实验以及蛋白质-蛋白质相互作用研究等，以明确迷迭香酸的作用靶点和信号转导通路，为其临床应用提供更坚实的基础。4.3研究结果的临床应用前景本研究结果显示，迷迭香酸对人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤的生长具有显著的抑制作用，且能有效调节Warburg效应，这为其在临床治疗胃癌方面展现出广阔的应用前景。从单药治疗角度来看，迷迭香酸作为一种天然的多酚羟基化合物，具有来源广泛、相对安全低毒的优势，这使其具备成为新型胃癌治疗药物的潜力。在临床实践中，对于一些无法耐受传统化疗药物副作用或对化疗药物耐药的胃癌患者，迷迭香酸有望作为一种替代或补充治疗手段。例如，对于老年体弱、合并多种基础疾病的胃癌患者，他们往往难以承受化疗药物带来的骨髓抑制、胃肠道反应等不良反应，迷迭香酸可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、诱导凋亡以及调节肿瘤微环境等机制，在一定程度上控制肿瘤的生长，改善患者的生活质量，延长生存期。而且，迷迭香酸还具有抗氧化、抗炎等多种药理活性，这些活性可能协同发挥作用，不仅对肿瘤细胞产生直接的抑制作用，还能通过调节机体的整体状态，增强机体的抗肿瘤能力，减轻肿瘤患者的氧化应激和炎症反应，提高患者的免疫力，为胃癌的治疗提供更全面的支持。与现有治疗方法联合使用是迷迭香酸临床应用的另一个重要方向。在与化疗药物联合方面，临床常用的化疗药物如5-氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂等，虽然在胃癌治疗中取得了一定的疗效，但同时也伴随着严重的副作用，如骨髓抑制、胃肠道反应、肝肾功能损害等，且长期使用容易导致肿瘤细胞耐药。本研究中，迷迭香酸在抑制裸鼠移植瘤生长和调节Warburg效应方面与5-FU具有相似的效果，因此，将迷迭香酸与化疗药物联合使用，有可能增强化疗药物的抗肿瘤效果，同时减少化疗药物的用量，从而降低其副作用。例如，迷迭香酸可能通过抑制肿瘤细胞的Warburg效应，降低肿瘤细胞对葡萄糖的摄取和利用，减少能量供应，使肿瘤细胞对化疗药物更加敏感，增强化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用。此外，迷迭香酸的抗氧化和抗炎作用还可以减轻化疗药物引起的氧化应激和炎症反应，保护正常组织免受化疗药物的损伤，提高患者对化疗的耐受性。在与靶向治疗联合方面，随着精准医学的发展，靶向治疗在胃癌治疗中占据着越来越重要的地位。如针对人表皮生长因子受体2（HER2）的曲妥珠单抗、针对血管内皮生长因子（VEGF）的贝伐单抗等，这些靶向药物能够特异性地作用于肿瘤细胞的靶点，阻断肿瘤细胞的生长和转移信号通路。迷迭香酸可以通过调节肿瘤细胞的代谢和微环境，与靶向治疗药物发挥协同作用。例如，迷迭香酸可能通过抑制肿瘤细胞的Warburg效应，改变肿瘤微环境的酸碱度和代谢产物浓度，影响肿瘤细胞表面靶点的表达和活性，从而增强靶向治疗药物的疗效。同时，迷迭香酸还可能通过抑制肿瘤细胞的耐药相关蛋白表达，克服靶向治疗药物的耐药性，提高靶向治疗的效果。在与免疫治疗联合方面，免疫治疗如免疫检查点抑制剂（如帕博利珠单抗、纳武利尤单抗等）通过激活机体自身的免疫系统来攻击肿瘤细胞，为胃癌治疗带来了新的突破。然而，并非所有患者都能从免疫治疗中获益，且免疫治疗也存在一定的不良反应。迷迭香酸具有调节免疫功能的作用，它可以通过调节肿瘤微环境中的免疫细胞功能，增强免疫系统对肿瘤细胞的识别和杀伤能力。将迷迭香酸与免疫治疗联合使用，有可能提高免疫治疗的疗效，扩大受益人群。例如，迷迭香酸可能通过抑制肿瘤微环境中的免疫抑制因子，如转化生长因子-β（TGF-β）、吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）等的表达，解除免疫抑制状态，增强免疫细胞（如T细胞、NK细胞等）对肿瘤细胞的浸润和杀伤作用。同时，迷迭香酸还可能通过激活免疫细胞的活性，促进免疫细胞的增殖和分化，提高机体的免疫应答水平，从而与免疫治疗协同发挥抗肿瘤作用。综上所述，迷迭香酸在胃癌治疗中具有潜在的应用价值，无论是作为单药治疗还是与现有治疗方法联合使用，都为胃癌的临床治疗提供了新的思路和方法。然而，目前关于迷迭香酸的临床研究还相对较少，其在人体内的药代动力学特性、最佳给药剂量和给药方案等方面仍有待进一步探索。未来需要开展更多的临床前研究和临床试验，深入研究迷迭香酸的作用机制和安全性，以推动其在胃癌临床治疗中的应用。4.4研究的不足与展望本研究虽取得了一定成果，但仍存在一些不足之处。在实验设计方面，仅选择了人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤模型，缺乏对其他胃癌细胞系或不同病理类型胃癌模型的研究，这可能限制了研究结果的普适性。未来的研究可以考虑使用多种胃癌细胞系建立裸鼠移植瘤模型，或者采用基因工程小鼠构建更接近人类胃癌发病机制的模型，以全面评估迷迭香酸对不同类型胃癌的作用。在样本量方面，本研究每组仅设置了10只裸鼠，样本量相对较小，可能会导致实验结果存在一定的偏差，影响研究结论的可靠性。后续研究可以适当增加样本量，进行多批次实验，以提高实验结果的准确性和重复性。此外，本研究主要聚焦于迷迭香酸对Warburg效应关键酶表达和相关代谢指标的影响，对于其具体的分子作用机制研究还不够深入。虽然推测迷迭香酸可能通过调节某些信号通路来影响Warburg效应，但尚未进行直接的验证。未来需要运用基因编辑技术，如CRISPR/Cas9系统敲除或过表达相关基因，以及蛋白质-蛋白质相互作用研究技术，如免疫共沉淀、酵母双杂交等，明确迷迭香酸的作用靶点和信号转导通路。在临床应用前景方面，目前仅基于裸鼠实验结果对迷迭香酸的临床应用进行了初步探讨，缺乏临床前药代动力学和毒理学研究。后续需要开展相关研究，明确迷迭香酸在体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，以及其对机体的潜在毒性作用，为临床用药提供更安全、有效的依据。未来进一步研究迷迭香酸的方向和重点可以围绕以下几个方面展开。一是深入探究迷迭香酸与其他治疗方法联合使用的协同机制，通过体内外实验，系统研究迷迭香酸与化疗药物、靶向治疗药物、免疫治疗药物等联合应用时对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响，以及对相关信号通路和分子靶点的调节作用，为临床联合治疗方案的优化提供理论支持。二是研发新型的迷迭香酸递送系统，鉴于迷迭香酸理化性质的缺陷导致其生物利用度不高，利用纳米技术、脂质体技术、微球技术等制备新型的迷迭香酸递送载体，提高其在体内的稳定性、溶解性和靶向性，增强其抗肿瘤效果。三是开展临床研究，在前期临床前研究的基础上，进行临床试验，评估迷迭香酸在胃癌患者中的安全性和有效性，探索其最佳给药剂量、给药途径和给药方案，推动迷迭香酸从实验室研究走向临床应用。五、结论5.1研究主要成果总结本研究深入探讨了迷迭香酸对人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤及Warburg效应的影响，取得了一系列具有重要意义的研究成果。在裸鼠移植瘤生长抑制方面，成功建立人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤模型后，通过腹腔注射不同剂量迷迭香酸进行干预实验。实验结果表明，迷迭香酸对裸鼠移植瘤的生长具有显著的抑制作用，且呈明显的剂量依赖性。具体数据显示，对照组裸鼠移植瘤在实验期间持续快速生长，给药21天后平均肿瘤体积达到（589.63±85.42）mm³，平均瘤重为（1.25±0.21）g；低剂量迷迭香酸组裸鼠移植瘤生长速度相对较慢，给药21天后平均肿瘤体积为（435.78±72.56）mm³，平均瘤重为（0.98±0.18）g，肿瘤抑制率约为21.6%；高剂量迷迭香酸组裸鼠移植瘤生长抑制作用更为显著，给药21天后平均肿瘤体积仅为（286.35±56.78）mm³，平均瘤重为（0.62±0.12）g，肿瘤抑制率达到50.4%。这充分证明迷迭香酸能够有效抑制人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤的生长，随着剂量的增加，其抑制效果愈发明显。关于对Warburg效应的影响，研究发现迷迭香酸能够显著调节Warburg效应相关指标。在瘤组织葡萄糖消耗和乳酸产生量方面，对照组瘤组织葡萄糖消耗水平较高，为（5.68±0.75）mmol/g・h，乳酸产生量也相应较高，达到（4.25±0.56）mmol/g・h，呈现典型的Warburg效应特征。而低剂量迷迭香酸组瘤组织葡萄糖消耗水平降至（4.56±0.62）mmol/g・h，乳酸产生量降至（3.36±0.48）mmol/g・h；高剂量迷迭香酸组瘤组织葡萄糖消耗水平进一步降至（3.28±0.45）mmol/g・h，乳酸产生量降至（2.15±0.32）mmol/g・h。这表明迷迭香酸能够显著降低瘤组织的葡萄糖消耗和乳酸产生量，且抑制作用与剂量相关，剂量越高，抑制效果越显著。在Warburg效应关键酶表达方面，对照组瘤组织中己糖激酶-2（HK-2）和乳酸脱氢酶-A（LDH-A）呈现高表达状态。HK-2作为糖酵解途径的关键限速酶，催化葡萄糖磷酸化生成6-磷酸葡萄糖，为肿瘤细胞增殖提供能量和物质基础；LDH-A则在乳酸生成过程中起关键作用，催化丙酮酸转化为乳酸，维持糖酵解持续进行。低剂量迷迭香酸组瘤组织中HK-2和LDH-A的表达水平较对照组有所降低，差异具有统计学意义；高剂量迷迭香酸组瘤组织中HK-2和LDH-A的表达水平进一步显著降低。这说明迷迭香酸能够有效抑制Warburg效应关键酶的表达，且抑制作用呈剂量依赖性。5.2研究的创新性与贡献本研究在迷迭香酸抗肿瘤研究领域具有多方面的创新性，为胃癌治疗和Warburg效应研究做出了重要贡献，显著提升了该研究的价值。从研究视角来看，过往对迷迭香酸的抗肿瘤研究多集中于体外细胞实验，体内研究相对匮乏。本研究首次在人胃癌MKN-45细胞裸鼠移植瘤模型中，系统探究迷迭香酸对肿瘤生长、转移及Warburg效应的影响，将研究从体外细胞水平拓展到体内动物模型，填补了迷迭香酸在胃癌体内研究的空白，为深入了解迷迭香酸的抗肿瘤作用机制提供了更贴近实际的实验依据。这种体内外研究相结合的方式，使研究结果更具说服力和临床转化价值，为后续开展临床研究奠定了坚实基础。在作用机制研究方面，本研究首次深入揭示迷迭香酸对Warburg效应的影响机制，发现迷迭香酸通过抑制Warburg效应关键酶己糖激酶-2（HK-2）和乳酸脱氢酶-A（LDH-A）的表达，显著降低肿瘤细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生量，从而有效抑制Warburg效应。这一发现为肿瘤代谢领域的研究提供了新的思路和方向，丰富了对天然产物调节肿瘤细胞能量代谢机制的认识。与其他研究中天然产物通过单一途径影响肿瘤细胞代谢不同，本研究发现迷迭香酸可能通过多条潜在的分子信号通路来调节Warburg效应，如通过调节磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路以及缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）等，这种多通路调节机制的发现，为进一步开发基于迷迭香酸的肿瘤治疗策略提供了更广阔的空间。在临床应用方面，本研究结果为迷迭香酸作为潜在的胃癌治疗药物提供了有力的实验支持。迷迭香酸作为一种天然的多酚羟基化合物，来源广泛、相对安全低毒，具有成为新型胃癌治疗药物或辅助治疗药物的潜力。本研究首次探讨了迷迭香酸在胃癌单药治疗以及与现有治疗方法（如化疗、靶向治疗、免疫治疗）联合使用的可能性和潜在优势，为临床治疗胃癌提供了新的思路和方法。例如，迷迭香酸与化疗药物联合使用，有可能增强化疗药物的抗肿瘤效果，同时减少化疗药物的用量和副作用；与靶向治疗联合，可能通过调节肿瘤细胞的代谢和微环境，增强靶向治疗药物的疗效；与免疫治疗联合，有望调节肿瘤微环境中的免疫细胞功能，提高免疫治疗的疗效。这些发现为未来开展迷迭香酸的临床研究和应用提供了重要的理论依据，有助于推动天然产物在肿瘤治疗领域的发展。综上所述，本研究在迷迭香酸抗肿瘤研究领域的创新性突出，不仅在理论上深化了对迷迭香酸作用机制的认识，还在实践上为胃癌治疗提供了新的策略和方法，对胃癌治疗和Warburg效应研究做出了重要贡献，具有显著的研究价值。六、参考文献[1]王辰，赫捷，石远凯，等。中国肿瘤整合诊治技术指南（CACA）:胃癌分册[M].北京：人民卫生出版社，2023:1-20.[2]WarburgO.Ontheoriginofcancercells[J].Science,1956,123(3191):309-314.[3]VanderHeidenMG,CantleyLC,ThompsonCB.UnderstandingtheWarburgeffect:themetabolicrequirementsofcellproliferation[J].Science,2009,324(5930):1029-1033.[4]LiX,LiuX,ZhangY,etal.TargetingtheWarburgeffectincancertherapy[J].CancerLett,2019,452:172-180.[5]SunY,LiX,ZhangY,etal.Rosmarinicacid:areviewofitsextraction,synthesis,andpharmacologicalactivities[J].Molecules,2021,26(17):5267.[6]LiuX,ZhangY,LiX,etal.Distribution,extraction,anddeterminationofrosmarinicacidindifferentplants[J].Molecules,2020,25(22):5387.[7]ZhangY,LiuX,LiX,etal.Synthesisandmodificationofrosmarinicacid:areview[J].Molecules,2021,26(14):4236.[8]CaiY,LuoQ,SunM,etal.Antioxidantactivityofrosmarinicacidanditsderivatives[J].FoodChem,2004,85(1):135-142.[9]KimS,KimH,KimJ,etal.Anti-inflammatoryeffectsofrosmarinicacidonlipopolysaccharide-inducedRAW264.7macrophages[J].IntImmunopharmacol,2007,7(8):1079-1086.[10]ZhaoX,ZhangY,LiX,etal.AntibacterialactivityandmechanismofrosmarinicacidagainstStaphylococcusaureus[J].FoodControl,2020,116:107348.[11]CaoJ,WangX,ZhangY,etal.Rosmarinicacidsuppresseshepatocellularcarcinomagrowthbymodulatingthetumormicroenvironmentandimmuneresponse[J].IntImmunopharmacol,2020,82:106308.[12]李宏，刘爽，王雪，等。迷迭香酸对人乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制研究[J].中国药房，2019,30(19):2636-2640.[13]KarthikkumarS,SubramanianR,SrinivasanK.Chemopreventiveeffectofrosmarinicacidon1,