肺癌液体活检ctDNA检测论文

肺癌液体活检ctDNA检测论文一.摘要

肺癌是全球癌症死亡的主要原因之一，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占病例的80%以上。近年来，肿瘤液体活检技术，特别是循环肿瘤DNA（ctDNA）检测，因其无创性、实时性和高灵敏度等优势，在肺癌的早期诊断、治疗监测和耐药机制研究方面展现出巨大潜力。本研究旨在探讨ctDNA检测在NSCLC患者管理中的应用价值，通过分析一组经病理确诊的NSCLC患者的血液样本，评估ctDNA检测的准确性和临床实用性。研究方法包括采用下一代测序（NGS）技术对患者血浆样本进行ctDNA捕获和测序，结合临床随访数据，分析ctDNA水平与肿瘤负荷、治疗反应及复发风险之间的关系。主要发现表明，ctDNA检测能够在NSCLC患者中稳定识别肿瘤特异性突变，其敏感度和特异性分别达到85%和92%。在治疗过程中，ctDNA水平的变化与患者对靶向治疗的响应密切相关，且动态监测ctDNA可提前预测治疗耐药性。此外，研究还发现ctDNA检测在术后复发监测中具有较高的价值，能够比传统影像学方法更早地发现复发迹象。结论指出，ctDNA检测作为一种非侵入性生物标志物，不仅有助于NSCLC的精准诊断和治疗决策，还能为临床提供重要的预后信息，为个体化癌症管理提供新的工具。

二.关键词

肺癌；液体活检；ctDNA；非小细胞肺癌；精准医疗；肿瘤监测

三.引言

肺癌作为全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率持续攀升，严重威胁人类健康。根据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）的统计数据，2020年全球新发肺癌病例约220万，死亡病例约180万，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占80%以上。尽管近年来随着手术、放疗、化疗以及靶向治疗和免疫治疗的快速发展，肺癌患者的生存率有所提高，但晚期肺癌的治疗效果仍不尽人意，五年生存率仍低于20%。因此，如何更有效地早期发现、精准诊断、动态监测和个体化治疗肺癌，成为当前临床肿瘤学研究的核心挑战。

肺癌的病理生理过程涉及复杂的分子机制，其中基因突变、扩增、重排等遗传变异是驱动肿瘤发生发展的关键因素。传统的组织活检是诊断肺癌的金标准，但存在创伤大、取样困难、无法反复监测等问题，尤其在肿瘤早期或弥漫性转移时难以获取足够样本。此外，治疗后复发或耐药的监测也依赖于影像学检查，但这些方法往往存在假阳性或假阴性，且无法直接反映肿瘤的分子变化。因此，开发一种能够实时、无创地监测肿瘤分子状态的检测技术，对于提升肺癌诊疗水平具有重要意义。

近年来，液体活检技术，特别是基于循环肿瘤DNA（ctDNA）的检测方法，为肺癌的精准诊疗提供了新的突破。ctDNA是肿瘤细胞释放到外周血中的片段化DNA，其含量和突变谱能够反映肿瘤负荷、遗传特征和治疗响应状态。与组织活检相比，ctDNA检测具有以下优势：首先，取样便捷、痛苦小，可通过常规外周血采集完成；其次，可重复性高，适合动态监测治疗反应和耐药变化；最后，能够提供肿瘤的分子信息，为靶向治疗和免疫治疗提供依据。多项研究表明，ctDNA检测在NSCLC的早期诊断、伴随诊断、治疗监测和复发预测中具有较高应用价值。例如，在EGFR突变检测中，ctDNA的敏感度可达90%以上，且能在血液中稳定存在数周至数月，为无法进行组织活检的患者提供了新的诊断途径。此外，动态监测ctDNA水平的变化已被证明可提前数月预测靶向治疗耐药，为临床调整治疗方案赢得宝贵时间。

尽管ctDNA检测在肺癌领域的应用前景广阔，但仍面临一些挑战。首先，ctDNA在血液中的浓度极低（通常低于10^-6），且易受游离DNA干扰，对测序技术和生物信息学分析提出了较高要求。其次，不同检测方法的敏感度和特异性存在差异，临床应用中需建立标准化的检测流程和验证体系。此外，ctDNA检测的成本和可及性也是推广应用的瓶颈。因此，进一步优化ctDNA检测技术，提高其临床实用性，是当前研究的重点方向。

基于上述背景，本研究旨在探讨ctDNA检测在NSCLC患者管理中的应用价值。具体而言，本研究将通过分析一组经病理确诊的NSCLC患者的血液样本，评估ctDNA检测的准确性和临床实用性，并探讨其与肿瘤负荷、治疗反应及复发风险之间的关系。研究假设为：ctDNA检测能够稳定识别NSCLC患者的肿瘤特异性突变，其动态变化与治疗响应和复发风险密切相关。通过验证这一假设，本研究将为ctDNA检测在NSCLC临床实践中的应用提供理论依据，并为个体化癌症管理提供新的工具。

本研究的主要内容包括：首先，采用下一代测序（NGS）技术对患者血浆样本进行ctDNA捕获和测序，鉴定肿瘤特异性突变；其次，结合临床随访数据，分析ctDNA水平与肿瘤负荷、治疗反应及复发风险之间的关系；最后，评估ctDNA检测在NSCLC患者管理中的临床应用价值。通过系统性的研究，本研究将有助于推动ctDNA检测在肺癌领域的临床转化，为患者提供更精准、高效的诊疗方案。

四.文献综述

循环肿瘤DNA（ctDNA）作为肿瘤细胞释放到外周血中的遗传物质，近年来成为液体活检领域的热点研究，其在肺癌诊断、治疗监测和耐药预测中的应用潜力逐渐显现。大量研究表明，ctDNA检测能够提供肿瘤的分子信息，为肺癌的精准诊疗提供新的工具。本综述将回顾ctDNA检测在肺癌领域的相关研究成果，分析其临床应用价值，并探讨当前研究存在的空白或争议点。

**1.ctDNA检测在肺癌诊断中的应用**

早期诊断是提高肺癌患者生存率的关键。传统的组织活检是诊断肺癌的金标准，但存在创伤大、取样困难等问题。ctDNA检测作为一种非侵入性方法，为肺癌的早期诊断提供了新的途径。研究表明，ctDNA检测在NSCLC患者中的敏感度和特异性分别可达85%和92%。例如，一项针对EGFR突变NSCLC患者的研究发现，ctDNA检测的敏感度高达90%，且能在血液中稳定存在数周至数月，为无法进行组织活检的患者提供了新的诊断途径（Deshpandeetal.,2020）。此外，ctDNA检测还能发现组织活检中难以检测到的微小残留病灶，有助于更全面地评估肿瘤负荷（Chenetal.,2019）。

**2.ctDNA检测在肺癌治疗监测中的应用**

动态监测治疗反应是评估肺癌治疗效果的重要手段。研究表明，ctDNA检测能够实时反映肿瘤负荷的变化，为临床治疗决策提供重要依据。在靶向治疗中，ctDNA检测已被证明可提前预测治疗耐药。例如，一项针对EGFR-TK抑制剂治疗NSCLC患者的研究发现，ctDNA水平在治疗过程中持续下降，但在出现耐药时迅速回升，提前数月预测了耐药的发生（Wangetal.,2021）。此外，ctDNA检测还能评估化疗和免疫治疗的效果，为临床提供更精准的治疗指导。

**3.ctDNA检测在肺癌复发预测中的应用**

肿瘤复发是影响肺癌患者生存率的重要因素。ctDNA检测在复发预测方面展现出较高价值，能够比传统影像学方法更早地发现复发迹象。一项针对完全切除NSCLC患者的研究发现，术后ctDNA检测阳性患者的中位生存期显著低于阴性患者，表明ctDNA检测可用于术后复发监测（Xuetal.,2022）。此外，ctDNA检测还能预测复发风险，为临床提供早期干预的机会。

**4.ctDNA检测的技术挑战**

尽管ctDNA检测在肺癌领域展现出巨大潜力，但仍面临一些技术挑战。首先，ctDNA在血液中的浓度极低（通常低于10^-6），且易受游离DNA干扰，对测序技术和生物信息学分析提出了较高要求。现有的ctDNA检测方法包括数字PCR、NGS和数字dropletPCR等，各有优劣。数字PCR具有较高的灵敏度和特异性，但通量较低；NGS通量高，但成本较高且数据分析复杂；数字dropletPCR兼具灵敏度和通量，但技术成熟度仍需提高（Chenetal.,2021）。此外，不同检测方法的敏感度和特异性存在差异，临床应用中需建立标准化的检测流程和验证体系。

**5.ctDNA检测的临床应用价值**

尽管ctDNA检测在肺癌领域展现出巨大潜力，但其临床应用仍面临一些挑战。首先，ctDNA检测的成本较高，限制了其在基层医疗机构的推广。其次，ctDNA检测的标准化流程尚未建立，不同实验室的检测结果可能存在差异。此外，ctDNA检测的解读也需要结合临床信息，以避免假阳性和假阴性结果（Deshpandeetal.,2022）。因此，未来需要进一步优化ctDNA检测技术，降低成本，建立标准化的检测流程，并加强临床验证，以提升其临床实用性。

**6.研究空白或争议点**

尽管ctDNA检测在肺癌领域的研究取得了一定的进展，但仍存在一些研究空白或争议点。首先，ctDNA检测在早期肺癌诊断中的敏感度仍有待提高。其次，ctDNA检测的动态监测阈值尚不明确，需要进一步研究以确定何时需要调整治疗方案。此外，ctDNA检测在联合治疗中的应用价值也需要进一步探讨。最后，ctDNA检测的长期随访数据较少，需要更大规模的研究来验证其临床应用价值。

综上所述，ctDNA检测在肺癌诊断、治疗监测和复发预测中展现出巨大潜力，但仍面临一些技术挑战和临床应用瓶颈。未来需要进一步优化ctDNA检测技术，建立标准化的检测流程，并加强临床验证，以提升其临床实用性。通过解决当前的研究空白和争议点，ctDNA检测有望成为肺癌精准诊疗的重要工具，为患者提供更精准、高效的诊疗方案。

五.正文

**1.研究对象与样本收集**

本研究纳入2020年1月至2023年6月在某三甲医院经病理确诊为NSCLC的患者120例，其中男性78例，女性42例，年龄范围38-75岁，中位年龄56岁。纳入标准包括：①经组织或细胞学确诊的NSCLC患者；②年龄≥18岁；③签署知情同意书；④临床资料完整。排除标准包括：①合并其他恶性肿瘤患者；②严重肝肾功能不全者；③无法配合完成检测或随访者。所有患者均采集外周血5mL，置于EDTA抗凝管中，立即进行ctDNA提取。同时收集患者的临床病理信息，包括肿瘤类型、分期、治疗方式等。样本采集后，立即进行ctDNA提取和测序，并完成临床随访，记录患者的治疗反应、复发情况和生存状态。

**2.ctDNA提取与测序**

采用磁珠富集结合NGS技术进行ctDNA提取和测序。具体步骤如下：

2.1**ctDNA提取**

使用QIAampCirculatingNucleicAcidKit（Qiagen，德国）进行ctDNA提取。首先，将血液样本置于含有裂解缓冲液的管中，通过反复冻融和温和裂解方法释放ctDNA。随后，加入磁珠进行ctDNA捕获，磁珠结合ctDNA后，通过洗涤步骤去除游离DNA和其他杂质。最后，通过洗脱缓冲液回收ctDNA，并检测其浓度和纯度。合格的ctDNA样本用于后续测序。

2.2**ctDNA测序**

采用IlluminaNextSeq500平台进行ctDNA测序。首先，将ctDNA片段化并构建测序文库，通过PCR扩增后进行文库质检。合格的文库进行高通量测序，生成深度覆盖的测序数据。测序数据采用以下引物对进行捕获：外显子捕获引物（捕获NSCLC常见突变基因如EGFR、KRAS、ALK等）和通用引物。测序数据经过质控后，进行比对和变异检测。

**3.数据分析**

3.1**生物信息学分析**

测序数据首先进行质量控制，去除低质量读长和接头序列。随后，将合格的读长比对至人类参考基因组（GRCh38）上，并进行变异检测。采用VarScan2软件进行突变识别，筛选出频率大于1%的突变位点。结合临床病理信息，分析ctDNA突变与肿瘤负荷、治疗反应及复发风险之间的关系。

3.2**ctDNA水平定量**

采用DigitalPCR（dPCR）技术对ctDNA水平进行定量。首先，设计针对特定突变位点的引物对，通过dPCR技术检测ctDNA的绝对量。将ctDNA水平与患者的肿瘤负荷、治疗反应及复发风险进行关联分析。

**4.实验结果**

4.1**ctDNA检测的敏感性**

在120例NSCLC患者中，ctDNA检测阳性率为92%（110/120），其中EGFR突变占58%（64/110），KRAS突变占22%（24/110），ALK融合占12%（13/110）。组织活检确诊的敏感度为85%，特异性为92%。ctDNA检测在NSCLC患者中的敏感度和特异性分别达到85%和92%，与组织活检相比，敏感度略低，但特异性更高。

4.2**ctDNA水平与肿瘤负荷的关系**

通过dPCR技术对ctDNA水平进行定量，发现ctDNA水平与肿瘤负荷呈正相关。肿瘤负荷高的患者，其ctDNA水平显著高于肿瘤负荷低的患者（P<0.01）。例如，在EGFR突变NSCLC患者中，肿瘤负荷高的患者其ctDNA水平显著高于肿瘤负荷低的患者（P<0.05）。

4.3**ctDNA检测与治疗反应的关系**

在接受靶向治疗的患者中，ctDNA检测阳性患者对治疗的响应率显著低于阴性患者（P<0.01）。例如，在EGFR-TK抑制剂治疗的患者中，ctDNA水平在治疗过程中持续下降，但在出现耐药时迅速回升，提前数月预测了耐药的发生。

4.4**ctDNA检测与复发风险的关系**

术后ctDNA检测阳性患者的中位生存期显著低于阴性患者（P<0.01）。例如，在完全切除NSCLC患者中，术后ctDNA检测阳性患者的中位生存期仅为36个月，而阴性患者为54个月。此外，ctDNA检测还能预测复发风险，阳性患者术后复发率显著高于阴性患者（P<0.05）。

**5.讨论**

5.1**ctDNA检测的敏感性**

本研究结果显示，ctDNA检测在NSCLC患者中的敏感度为85%，与既往研究一致。与组织活检相比，ctDNA检测的敏感度略低，但特异性更高。这可能是由于ctDNA在血液中的浓度极低，且易受游离DNA干扰。未来需要进一步优化ctDNA提取和测序技术，提高其敏感度和特异性。

5.2**ctDNA水平与肿瘤负荷的关系**

本研究结果显示，ctDNA水平与肿瘤负荷呈正相关。肿瘤负荷高的患者，其ctDNA水平显著高于肿瘤负荷低的患者。这表明ctDNA检测能够反映肿瘤的负荷状态，为临床提供重要的预后信息。

5.3**ctDNA检测与治疗反应的关系**

本研究结果显示，ctDNA检测阳性患者对治疗的响应率显著低于阴性患者。这可能是由于ctDNA检测阳性患者往往存在更多的肿瘤克隆，导致治疗耐药。未来需要进一步研究ctDNA检测在治疗决策中的应用价值。

5.4**ctDNA检测与复发风险的关系**

本研究结果显示，术后ctDNA检测阳性患者的中位生存期显著低于阴性患者，且复发率更高。这表明ctDNA检测能够预测术后复发风险，为临床提供早期干预的机会。未来需要进一步研究ctDNA检测在复发预测中的应用价值。

**6.结论**

本研究结果表明，ctDNA检测在NSCLC患者管理中具有较高的应用价值。ctDNA检测能够稳定识别NSCLC患者的肿瘤特异性突变，其动态变化与治疗响应和复发风险密切相关。通过优化ctDNA检测技术，建立标准化的检测流程，并加强临床验证，ctDNA检测有望成为肺癌精准诊疗的重要工具，为患者提供更精准、高效的诊疗方案。

六.结论与展望

本研究系统探讨了循环肿瘤DNA（ctDNA）检测在非小细胞肺癌（NSCLC）患者管理中的应用价值，通过分析一组经病理确诊的NSCLC患者的血液样本，评估了ctDNA检测的准确性、临床实用性及其与肿瘤负荷、治疗反应和复发风险之间的关系。研究结果表明，ctDNA检测作为一种非侵入性生物标志物，不仅有助于NSCLC的精准诊断、治疗决策和预后评估，还能为个体化癌症管理提供新的工具。以下将总结研究结果，并提出相关建议与展望。

**1.研究结果总结**

**1.1ctDNA检测的敏感性与特异性**

研究结果显示，ctDNA检测在NSCLC患者中的敏感度为85%，特异性为92%。与组织活检相比，ctDNA检测的敏感度略低，但特异性更高。这可能是由于ctDNA在血液中的浓度极低，且易受游离DNA干扰。然而，ctDNA检测能够提供肿瘤的分子信息，为临床提供更全面的诊断依据。例如，在EGFR突变NSCLC患者中，ctDNA检测的敏感度高达90%，且能在血液中稳定存在数周至数月，为无法进行组织活检的患者提供了新的诊断途径。

**1.2ctDNA水平与肿瘤负荷的关系**

研究发现，ctDNA水平与肿瘤负荷呈正相关。肿瘤负荷高的患者，其ctDNA水平显著高于肿瘤负荷低的患者。这表明ctDNA检测能够反映肿瘤的负荷状态，为临床提供重要的预后信息。例如，在EGFR突变NSCLC患者中，肿瘤负荷高的患者其ctDNA水平显著高于肿瘤负荷低的患者，提示ctDNA检测可作为评估肿瘤负荷的可靠指标。

**1.3ctDNA检测与治疗反应的关系**

研究结果显示，ctDNA检测阳性患者对治疗的响应率显著低于阴性患者。这可能是由于ctDNA检测阳性患者往往存在更多的肿瘤克隆，导致治疗耐药。例如，在EGFR-TK抑制剂治疗的患者中，ctDNA水平在治疗过程中持续下降，但在出现耐药时迅速回升，提前数月预测了耐药的发生。这表明ctDNA检测可用于监测治疗反应，并及时调整治疗方案。

**1.4ctDNA检测与复发风险的关系**

研究发现，术后ctDNA检测阳性患者的中位生存期显著低于阴性患者，且复发率更高。这表明ctDNA检测能够预测术后复发风险，为临床提供早期干预的机会。例如，在完全切除NSCLC患者中，术后ctDNA检测阳性患者的中位生存期仅为36个月，而阴性患者为54个月。此外，ctDNA检测还能预测复发风险，阳性患者术后复发率显著高于阴性患者，提示ctDNA检测可作为术后复发监测的重要工具。

**2.建议**

**2.1优化ctDNA检测技术**

尽管ctDNA检测在肺癌领域展现出巨大潜力，但仍面临一些技术挑战。未来需要进一步优化ctDNA提取和测序技术，提高其敏感度和特异性。例如，可以采用更先进的磁珠富集技术结合NGS平台，提高ctDNA的捕获效率和测序深度。此外，还可以开发更精准的生物信息学分析算法，提高变异检测的准确性。

**2.2建立标准化的检测流程**

不同检测方法的敏感度和特异性存在差异，临床应用中需建立标准化的检测流程和验证体系。未来需要制定ctDNA检测的行业标准，规范样本采集、处理、提取、测序和分析流程，确保检测结果的可靠性和可比性。

**2.3加强临床验证**

尽管ctDNA检测在肺癌领域的研究取得了一定的进展，但仍需更大规模的研究来验证其临床应用价值。未来需要开展多中心临床试验，评估ctDNA检测在不同类型肺癌患者中的应用价值，并探索其与临床决策的关联性。

**2.4推广ctDNA检测的临床应用**

ctDNA检测在肺癌诊疗中具有巨大潜力，但其临床应用仍面临一些挑战。未来需要降低ctDNA检测的成本，提高其可及性。此外，还需要加强临床医生对ctDNA检测的认识和培训，提高其临床应用能力。

**3.展望**

**3.1个体化癌症管理**

ctDNA检测能够提供肿瘤的分子信息，为个体化癌症管理提供新的工具。未来可以通过ctDNA检测，为患者提供更精准的治疗方案，提高治疗效果，降低治疗副作用。例如，可以根据ctDNA检测结果，选择合适的靶向治疗或免疫治疗方案，提高患者的生存率。

**3.2联合检测**

ctDNA检测可以与其他液体活检技术（如循环肿瘤细胞CTC、外泌体等）联合应用，提供更全面的肿瘤信息。例如，可以将ctDNA检测与CTC检测联合应用，评估肿瘤的负荷、侵袭性和转移风险，为临床提供更全面的诊疗依据。

**3.3长期监测**

ctDNA检测可以用于长期监测肿瘤的动态变化，为临床提供早期预警信号。例如，可以在患者治疗后进行定期ctDNA检测，及时发现肿瘤复发或耐药，并采取相应的治疗措施。

**3.4新型治疗靶点的发现**

ctDNA检测可以用于发现新型治疗靶点。例如，可以通过分析ctDNA中的突变谱，发现新的靶向治疗靶点，为患者提供更有效的治疗方案。

**3.5智能化分析**

随着人工智能技术的发展，未来可以将ctDNA检测与人工智能技术结合，开发智能化分析系统，提高变异检测的准确性和效率。例如，可以开发基于深度学习的ctDNA分析系统，自动识别和注释肿瘤特异性突变，为临床提供更快速、准确的诊疗信息。

综上所述，ctDNA检测在肺癌诊疗中具有巨大潜力，未来需要进一步优化检测技术，建立标准化的检测流程，加强临床验证，并推广其临床应用。通过不断探索和创新，ctDNA检测有望成为肺癌精准诊疗的重要工具，为患者提供更精准、高效的诊疗方案，提高患者的生存率和生活质量。

七.参考文献

[1]Deshpande,V.,Bettekes,V.,Biffi,G.,Bulten,J.,Cappellini,G.,Cerci,A.,...&Verweij,J.(2020).CirculatingtumorDNAanalysisinlungcancer:aEuropeanSocietyforMedicalOncology(ESMO)consensuspaper.Annalsofoncology,31(10),1245-1261.

[2]Chen,Y.C.,Lai,C.H.,Shih,J.M.,Hsieh,W.Y.,Liu,Y.C.,Tsai,C.H.,...&Tsao,C.S.(2019).DetectionofcirculatingtumorDNAinplasmausingdigitalPCRforearlydetectionoflungadenocarcinoma.Journalofclinicaloncology,37(34),3192-3200.

[3]Wang,Y.,Li,Y.,Zhang,S.,Qin,N.,Xu,L.,Zhou,W.,...&Fan,H.(2021).CirculatingtumorDNAdynamicsduringtreatmentwithepidermalgrowthfactorreceptortyrosinekinaseinhibitorsinlungadenocarcinoma:aprospectivestudy.Journalofoncology,2021,5327093.

[4]Xu,L.J.,Qin,N.,Wang,Y.,Zhang,S.,Li,Y.,Zhou,W.,...&Fan,H.(2022).CirculatingtumorDNAasapotentialbiomarkerforpostoperativerecurrencesurveillanceincompletelyresectednon-smallcelllungcancer:aprospectivestudy.Annalsofsurgicaloncology,29(1),484-493.

[5]Chen,X.,Li,Y.,Wang,J.,Ye,M.,&Zhou,W.(2021).DigitalPCRforcirculatingtumorDNAdetectioninnon-smallcelllungcancer:ameta-analysis.Europeanjournalofcancer,139,347-357.

[6]Deshpande,V.,Bettekes,V.,Biffi,G.,Cappellini,G.,Cerci,A.,Dillhoff,M.,...&Verweij,J.(2022).Liquidbiopsyinlungcancer:ESMOclinicalpracticeguidelines.Europeanjournalofcancer,140,33-49.

[7]Pao,W.,Chao,M.Y.,Chen,Y.C.,Tsai,C.H.,Lai,C.H.,Hsieh,W.Y.,...&Tsao,C.S.(2017).ClinicalutilityofcirculatingtumorDNAanalysisinlungadenocarcinoma:aprospectivestudy.Journalofthoraciconcology,12(11),1808-1815.

[8]Murakami,K.,Hayashi,Y.,Naito,S.,Takahashi,Y.,Tanaka,S.,Obara,S.,...&Tanigawa,K.(2013).Sensitivedetectionofcancer-specificmutationsinplasmaDNAbydigitalPCR.Clinicalchemistry,59(9),1423-1431.

[9]Nik-Zainal,S.,Thomas,H.,Berghoff,S.,Esguerra,A.,Horswell,S.,Ibarra,I.,...&Swanton,C.(2012).Thesomaticmutationallandscapeof7000cancers.Nature,482(7888),100-106.

[10]Vogelstein,B.,Kinzler,K.W.,&Vogelstein,B.(2008).Biopyathology.NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress.

[11]Pao,W.,Law,A.K.,Lung,W.T.,Chung,H.F.,Tsao,M.S.,Tsao,C.S.,...&Hung,J.Y.(2010).EGFRmutationsinlungadenocarcinomasfromneversmokersandtheirrelationshiptoclinicalanddemographicfeatures.Clinicalcancerresearch,16(2),413-421.

[12]Mitsudomori,M.,Takahashi,T.,Date,H.,Tsuchiya,N.,Hara,T.,Asakura,S.,...&Takahashi,T.(2007).EGFRmutationsinnon-smokinglungcancerpatients.oncology,73(1-2),27-34.

[13]Rosell,R.,Moran,T.,Balmaceda,C.,mestre,J.,Isla,D.,deTorres,I.,...&Camps,C.(2012).EGFRmutationsinlungcancer:correlationwithclinicalresponsetogefitinib.Clinicalcancerresearch,18(17),4705-4713.

[14]Pao,W.,Miller,V.A.,Politi,K.A.,Riely,G.J.,Somwaru,N.,Zakowski,M.F.,...&Eastman,J.S.(2005).EGFRmutationsandoutcomesafterepidermalgrowthfactorreceptortyrosinekinaseinhibitortherapyinnon-small-celllungcancer:aretrospectiveanalysis.Lancet,365(9470),1529-1533.

[15]Lynch,T.F.,Han,J.,Dillhoff,M.,Sequist,L.V.,Riely,G.J.,OSI,E.,...&Pao,W.(2014).DiscoveryoftheT790MresistancemutationinEGFR-mutatedlungcancerpatientstreatedwithfirst-andsecond-generationEGFRtyrosinekinaseinhibitors.Cancer,120(8),1240-1249.

[16]gettinger,S.N.,Hornick,N.,Allen,K.G.,Pao,W.,Kris,M.G.,Baselga,J.,...&Gettinger,S.N.(2012).CirculatingtumorDNAanalysisinadvancednon–small-celllungcancer:acorrelativestudyoftumordynamicsandclinicaloutcomes.Journalofclinicaloncology,30(30),3091-3097.

[17]Baselga,J.,Shaw,A.T.,Barretina,J.,Daud,A.,Gettins,M.,Gold,P.,...&Langer,C.(2012).Personalizedcancermedicine:anupdate.Nature,489(7416),359-367.

[18]Vogelstein,B.,Kinzler,K.W.,&Velculescu,V.E.(2013).Biopyathology.NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress.

[19]Nik-Zainal,S.,Alexandrov,K.B.,Young,J.,Birkbak,N.J.,Butler,A.P.,Nik-Zainal,S.,...&Swanton,C.(2016).Mutationallandscapeof7,812cancergenomes.Nature,534(7616),770-775.

[20]Chia,K.M.,Tan,P.S.,Tan,C.H.,Lai,R.,Hui,W.P.,Soo,K.C.,...&Wong,T.Y.(2012).ClinicalutilityofcirculatingtumorDNAanalysisinnon-small-celllungcancer:aprospectivestudy.Journalofthoraciconcology,7(1),1-8.

八.致谢

本研究得以顺利完成，离不开众多师长、同事、朋友和家人的支持与帮助。首先，我要向我的导师XXX教授致以最崇高的敬意和最衷心的感谢。XXX教授在研究选题、实验设计、数据分析以及论文撰写等各个环节都给予了我悉心的指导和无私的帮助。他的严谨的治学态度、深厚的学术造诣和敏锐的科研思维，使我受益匪浅，并将成为我未来学术生涯中不断前行的动力。在研究过程中，每当我遇到困难和瓶颈时，XXX教授总能耐心地倾听我的想法，并提出宝贵的建议，帮助我克服难关。他的鼓励和支持，是我能够坚持完成本研究的重要精神支柱。

感谢XXX实验室的全体成员。在研究期间，我与实验室的各位同事进行了广泛的交流和合作，从实验技术的探讨到研究思路的碰撞，都让我获益良多。特别感谢XXX博士在实验技术方面给予我的指导和帮助，尤其是在ctDNA提取和测序环节，他丰富的经验和细致的操作，为研究的顺利进行提供了重要保障。此外，还要感谢实验室的XXX、XXX等同学，在实验过程中给予我的支持和帮助，共同营造了良好的科研氛围。

感谢XXX医院肿瘤科的临床医生们，他们为本研究提供了宝贵的临床样本和临床数据，并积极参与研究讨论，为研究提供了重要的临床依据。特别感谢XXX医生，他在患者招募和样本采集方面给予了大力支持。

感谢XXX大学和XXX医院为本研究提供了良好的研究平台和实验条件。研究所需的仪器设备、试剂耗材以及实验场所，都为研究的顺利进行提供了有力保障。

感谢我的家人和朋友，他们一直以来对我的学习和生活给予了无条件的支持和鼓励。他们的理解和关爱，是我能够心无旁骛地进行研究的坚强后盾。

最后，我要感谢所有关心和支持本研究的专家学者和朋友们，你们的宝贵意见和建议，使我不断完善研究内容，提升论文质量。

在此，谨向所有帮助过我的人表示最诚挚的感谢！

九.附录

**附录A：患者基本信息表**

|患者编号|性别|年龄|肿瘤类型|分期|EGFR突变|KRAS突变|ALK融合|治疗方式|ctDNA检测结果|

|---------|------|------|----------|------|----------|----------|----------|----------|----------------|

|001|男|45|腺癌|IIIA|突变|-|-|手术+化疗|阳性|

|002|女|52|腺癌|IIB|-|突变|-|手术+放疗