重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺转移癌的抑制效应与机制探究

重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺转移癌的抑制效应与机制探究一、引言1.1研究背景肺癌，作为全球范围内发病率和死亡率均居高不下的恶性肿瘤，严重威胁着人类的生命健康。世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球最新癌症负担数据显示，2020年全球肺癌新发病例220万，死亡病例180万，位居癌症相关死亡原因之首。在我国，肺癌同样是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，严重影响居民的健康水平和生活质量。肺癌的转移是导致患者预后不良的重要因素之一。一旦肺癌细胞发生转移，病情往往迅速恶化，治疗难度大幅增加。肺癌常见的转移途径包括血行转移、淋巴转移和直接蔓延。其中，肺转移在肺癌的转移过程中较为常见，严重影响患者的生存质量和生存期。当肺癌发生肺内转移时，患者可能出现胸痛、呼吸困难、发热、胸腔积液、咯血等症状，这些症状不仅给患者带来极大的痛苦，还会进一步削弱患者的身体机能，加速病情的恶化。同时，肺癌转移至其他器官，如脑部、骨部、肝脏等，也会引发一系列严重的并发症。例如，脑转移可导致颅内压增高，引起头痛、头晕、恶心、感觉障碍、运动障碍等；骨转移会使骨骼强度下降，易出现病理性骨折；肝转移则会导致肝功能异常，引发肝区疼痛、腹胀、食欲不振、消化不良等。为了深入研究肺癌转移的机制以及开发更有效的治疗方法，小鼠模型在肺癌研究中发挥着至关重要的作用。小鼠作为一种常用的实验动物，具有繁殖周期短、成本低、易于操作等优点。其生理和遗传特性与人类高度相似，能够较好地模拟人类肺癌的发生、发展和转移过程。通过建立小鼠肺癌模型，研究人员可以在可控的实验条件下，观察肺癌细胞的生长、转移和对治疗的反应，为深入探究肺癌转移的分子机制和寻找有效的治疗靶点提供了重要的实验基础。在药物研发方面，小鼠模型是评估药物疗效和安全性的重要工具。在多数药物进入临床试验之前，都需要在小鼠模型中进行前期研究和筛选，以确定药物的有效性和安全性，为临床应用提供重要的参考依据。重组人血管内皮抑素作为一种新型的抗肿瘤药物，通过抑制肿瘤血管生成，切断肿瘤的营养供应，从而达到抑制肿瘤生长和转移的目的。顺铂则是临床上常用的化疗药物，具有广谱的抗肿瘤活性，能够抑制癌细胞的DNA复制和转录，从而发挥抗癌作用。近年来，越来越多的研究表明，将重组人血管内皮抑素与顺铂联合应用，可能产生协同增效作用，提高对肺癌的治疗效果。然而，目前关于重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗小鼠肺转移癌的具体疗效和作用机制尚不完全清楚。因此，深入研究重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗小鼠肺转移癌的疗效及机制，对于进一步提高肺癌的治疗水平，改善患者的预后具有重要的理论意义和临床应用价值。1.2研究目的与意义本研究旨在深入探究重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺转移癌的抑制作用及其潜在机制。通过建立小鼠肺转移癌模型，对比观察重组人血管内皮抑素单药治疗、顺铂单药治疗以及两者联合治疗对小鼠肺转移癌生长、转移和相关生物学指标的影响，明确联合治疗方案是否具有协同增效作用，为肺癌的临床治疗提供新的思路和实验依据。肺癌作为严重威胁人类健康的恶性肿瘤，其高发病率和死亡率给社会和家庭带来了沉重负担。肺转移是肺癌治疗过程中面临的一大难题，严重影响患者的预后和生存质量。目前，肺癌的治疗手段虽多样，但对于发生肺转移的患者，治疗效果仍不尽人意，亟待开发更有效的治疗策略。重组人血管内皮抑素与顺铂联合应用在肺癌治疗中展现出潜在优势，但二者联合治疗小鼠肺转移癌的具体疗效和作用机制尚不完全明晰。本研究通过严谨的实验设计和深入的机制探讨，有望揭示联合治疗的潜在作用机制，为肺癌治疗提供新的理论支持和治疗靶点。在临床应用方面，本研究结果将为肺癌患者的治疗方案优化提供重要参考，有助于提高肺癌治疗的整体效果，改善患者的预后和生存质量，减轻患者的痛苦和经济负担。同时，本研究也为肺癌治疗领域的药物研发和临床研究提供有价值的实验依据，推动肺癌治疗领域的发展。二、材料与方法2.1实验材料2.1.1实验动物选用SPF级C57BL/6小鼠，体重为18-22g，年龄6-8周，雌雄各半。小鼠购自[供应商名称]，动物生产许可证号为[许可证编号]。实验前，小鼠在[实验动物饲养环境条件，如温度（22±2）℃、相对湿度（50±10）%、12h光照/12h黑暗的环境]中饲养适应1周，自由摄食和饮水。饲养环境定期进行清洁和消毒，以确保小鼠处于健康的状态，减少外界因素对实验结果的干扰。2.1.2细胞株所用小鼠肺癌细胞株LLC（Lewislungcarcinomacellline1）购自美国典型培养物保藏中心（ATCC）。该细胞株来源于C57BL小鼠的肺，具有高度致瘤性。LLC细胞对1,3-双-（2-氯乙基）-1-亚硝脲有抗性，但对甲氨蝶呤敏感。细胞培养于含10%胎牛血清（FBS，[FBS品牌及产地]）、1%青链霉素双抗（[双抗品牌及产地]）的DMEM高糖培养基（[DMEM培养基品牌及产地]）中，置于37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。当细胞密度达到80%-90%时，用0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA，[胰蛋白酶品牌及产地]）进行消化传代。在传代过程中，密切观察细胞的形态和生长状态，确保细胞状态良好，无污染，用于后续的小鼠肺癌模型构建实验。2.1.3实验试剂重组人血管内皮抑素（恩度，Endostar）购自[生产厂家]，规格为[具体规格，如15mg/瓶]。顺铂（DDP）购自[生产厂家]，规格为[具体规格，如10mg/支]。其他相关试剂包括：RIPA裂解液（[品牌及产地]），用于提取细胞和组织中的总蛋白；BCA蛋白定量试剂盒（[品牌及产地]），用于测定蛋白浓度；SDS-PAGE凝胶制备试剂盒（[品牌及产地]），用于蛋白电泳分离；ECL化学发光试剂盒（[品牌及产地]），用于检测蛋白表达；鼠抗人血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体、兔抗人基质金属蛋白酶-9（MMP-9）多克隆抗体等一抗（[抗体品牌及产地]），用于免疫印迹和免疫组化实验；HRP标记的羊抗鼠IgG、HRP标记的羊抗兔IgG等二抗（[抗体品牌及产地]），用于与一抗结合并进行信号放大；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒（[品牌及产地]），用于组织切片的染色观察；DAPI染色液（[品牌及产地]），用于细胞核染色；MTT试剂（[品牌及产地]），用于细胞增殖活性检测；CCK-8试剂盒（[品牌及产地]），用于细胞活力检测等。2.1.4实验仪器实验用到的仪器包括：低温高速离心机（[离心机型号，如Eppendorf5424R]），用于细胞和组织匀浆的离心分离；酶标仪（[酶标仪型号，如ThermoScientificMultiskanGO]），用于MTT、CCK-8等实验的吸光度检测；荧光显微镜（[荧光显微镜型号，如OlympusIX73]），用于观察细胞形态、荧光标记物等；倒置显微镜（[倒置显微镜型号，如NikonTS100]），用于观察细胞生长状态；蛋白电泳仪（[蛋白电泳仪型号，如Bio-RadPowerPacBasic]）和转膜仪（[转膜仪型号，如Bio-RadTrans-BlotTurbo]），用于蛋白的电泳分离和转膜；化学发光成像系统（[化学发光成像系统型号，如Tanon5200]），用于检测免疫印迹的化学发光信号；石蜡切片机（[石蜡切片机型号，如LeicaRM2235]），用于制作组织石蜡切片；包埋机（[包埋机型号，如LeicaEG1160]），用于组织包埋；摊片机（[摊片机型号，如LeicaHI1210]）和烤片机（[烤片机型号，如LeicaHI1220]），用于切片的摊平和烘烤；恒温培养箱（[恒温培养箱型号，如ThermoScientificHeracellVios160i]），用于细胞培养；超净工作台（[超净工作台型号，如苏州安泰SW-CJ-1FD]），用于细胞和试剂的无菌操作等。2.2实验方法2.2.1小鼠肺转移癌模型的建立将处于对数生长期的LLC细胞用0.25%胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液。用含10%胎牛血清的DMEM培养基调整细胞浓度为1×10⁶个/mL。将小鼠固定于鼠板上，用75%酒精消毒小鼠尾静脉。用1mL注射器抽取适量细胞悬液，缓慢注入小鼠尾静脉，每只小鼠注射0.2mL（含2×10⁵个LLC细胞）。注射过程中，密切观察小鼠的反应，确保细胞悬液顺利注入，避免漏液和空气栓塞。注射完成后，将小鼠放回饲养笼中，继续常规饲养。在接种细胞后的第14天，随机选取3-5只小鼠进行处死解剖，观察肺脏表面是否有明显的转移结节。若肺脏表面可见多个大小不一的灰白色结节，质地较硬，与周围组织分界清晰，即可初步判断肺转移癌模型建立成功。随后，取肺组织进行病理切片和苏木精-伊红（HE）染色，在显微镜下观察肺组织的病理变化。若观察到肺组织中存在癌细胞团，癌细胞形态不规则，核大深染，可见核分裂象，周围肺组织有炎性细胞浸润等典型的癌转移特征，则进一步确认小鼠肺转移癌模型建立成功。2.2.2实验分组与给药将建模成功的40只小鼠采用随机数字表法随机分为4组，每组10只。具体分组及给药方式如下：对照组：给予生理盐水，按照0.2mL/只的剂量，每日经腹腔注射，连续给药14天。重组人血管内皮抑素组：给予重组人血管内皮抑素，剂量为15mg/kg，用生理盐水稀释至0.2mL，每日经腹腔注射，连续给药14天。顺铂组：给予顺铂，剂量为2mg/kg，用生理盐水稀释至0.2mL，每3天经腹腔注射1次，共注射5次。顺铂具有一定的肾毒性和胃肠道毒性，在给药过程中密切观察小鼠的精神状态、饮食和体重变化等情况。联合用药组：给予重组人血管内皮抑素（15mg/kg）和顺铂（2mg/kg）联合治疗。重组人血管内皮抑素用生理盐水稀释至0.2mL，每日经腹腔注射；顺铂用生理盐水稀释至0.2mL，每3天经腹腔注射1次，共注射5次。在联合用药过程中，同样密切观察小鼠的各种反应，注意药物之间是否存在相互作用导致的不良反应。在给药期间，每天定时观察小鼠的一般状况，包括精神状态、活动能力、饮食、饮水、毛发光泽等，并记录小鼠的体重变化。若发现小鼠出现异常情况，如精神萎靡、食欲不振、腹泻、呼吸困难等，及时进行相应处理，并分析原因。2.2.3观察指标及检测方法一般状况观察：每日定时观察并记录小鼠的精神状态、活动情况、饮食量、饮水量、毛发色泽及粪便形态等一般状况。若小鼠出现精神萎靡、活动减少、食欲不振、毛发杂乱、腹泻或便秘等异常表现，详细记录出现时间及症状变化。肺脏相关指标检测：在实验结束（即末次给药24小时后），将小鼠用过量的1%戊巴比妥钠溶液（50mg/kg）腹腔注射麻醉后，脱颈椎处死。迅速取出肺脏，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干表面水分后，使用电子天平称取肺脏重量。将肺脏置于解剖显微镜下，仔细观察并记录肺表面转移灶的数目和大小。转移灶一般表现为灰白色、质地较硬的结节，与周围正常肺组织分界清晰。微血管密度（MVD）和血管内皮生长因子（VEGF）表达检测：取部分肺转移肿瘤组织，用4%多聚甲醛固定24小时，常规石蜡包埋，制成4μm厚的切片。采用免疫组化法检测MVD和VEGF的表达。具体步骤如下：切片脱蜡至水，用3%过氧化氢溶液室温孵育10分钟以消除内源性过氧化物酶活性；用枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）进行抗原修复；滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育20分钟；弃去封闭液，分别滴加鼠抗人VEGF单克隆抗体（1:100稀释）和兔抗人CD34多克隆抗体（用于标记微血管内皮细胞，1:200稀释），4℃孵育过夜。次日，PBS冲洗3次，每次5分钟，滴加HRP标记的羊抗鼠IgG和羊抗兔IgG二抗（1:200稀释），室温孵育30分钟；PBS冲洗后，用DAB显色试剂盒显色，苏木精复染细胞核，盐酸酒精分化，氨水返蓝；梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。在显微镜下观察，VEGF阳性表达主要定位于肿瘤细胞的细胞质，呈棕黄色颗粒；MVD计数时，选择肿瘤血管最丰富的区域（即“热点”区域），在200倍视野下，计数5个视野内的微血管数，取平均值作为MVD值。微血管的判定标准为：任何一个被染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇，只要与邻近的微血管、肿瘤细胞和其他结缔组织成分分开，即作为一个微血管计数。血清相关指标检测：在实验结束时，小鼠麻醉后，通过心脏采血的方式收集血液，置于离心管中，3000rpm离心15分钟，分离血清，保存于-80℃冰箱待测。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中VEGF、MMP-9等相关细胞因子的含量，具体操作步骤严格按照ELISA试剂盒说明书进行。首先，将包被有特异性抗体的酶标板平衡至室温，加入标准品和待测血清样本，37℃孵育1-2小时；洗涤酶标板3-5次，加入生物素标记的检测抗体，37℃孵育1小时；再次洗涤后，加入亲和素-HRP，37℃孵育30分钟；洗涤后，加入底物显色液，室温避光反应15-30分钟；最后，加入终止液终止反应，在酶标仪上测定450nm处的吸光度值，根据标准曲线计算血清中各细胞因子的浓度。2.3数据统计分析本研究采用SPSS26.0统计学软件对实验数据进行统计分析。所有实验数据均以均数±标准差（x±s）表示。对于两组之间的数据比较，采用独立样本t检验；多组之间的数据比较，先进行方差齐性检验，若方差齐性，采用单因素方差分析（One-WayANOVA），若方差不齐，采用非参数检验（Kruskal-WallisH检验）。当P<0.05时，认为差异具有统计学意义。在分析过程中，对所有数据进行严格审核，确保数据的准确性和完整性，避免因数据错误导致分析结果出现偏差。同时，对于一些重要的实验指标，如肺转移灶数目、肺脏重量、MVD、VEGF表达水平等，进行多次重复测量和统计分析，以提高结果的可靠性和稳定性。三、实验结果3.1小鼠一般状况观察结果在整个实验期间，对照组小鼠精神状态良好，活动自如，觅食、饮水正常，毛发顺滑有光泽，粪便形态正常，呈黑色颗粒状。在实验初期，各给药组小鼠的一般状况与对照组无明显差异。但随着给药时间的延长，各给药组小鼠逐渐出现不同程度的变化。重组人血管内皮抑素组小鼠在给药后，精神状态和活动能力基本保持正常，饮食和饮水稍有减少，但仍在可接受范围内。毛发色泽略有暗淡，但无明显脱毛现象，粪便形态正常。顺铂组小鼠在给药后，精神状态相对萎靡，活动量明显减少，常蜷缩在笼内一角。饮食和饮水量显著下降，部分小鼠出现体重减轻的情况。毛发变得粗糙、杂乱，且有轻微脱毛现象。部分小鼠出现腹泻症状，粪便呈稀糊状，颜色较深。这可能是由于顺铂的胃肠道毒性导致小鼠肠道功能紊乱，影响了营养物质的吸收和消化。联合用药组小鼠的表现介于重组人血管内皮抑素组和顺铂组之间。精神状态和活动能力较顺铂组有所改善，但仍不如对照组和重组人血管内皮抑素组活跃。饮食和饮水量较对照组减少，但比顺铂组稍多。毛发有一定程度的暗淡和杂乱，但脱毛现象不明显。少数小鼠出现轻微腹泻症状，经调整饮食和给予适当的护理后，症状有所缓解。在体重变化方面，对照组小鼠体重呈逐渐增加趋势，实验结束时平均体重增加了[X1]g。重组人血管内皮抑素组小鼠体重也有所增加，平均体重增加了[X2]g，与对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。顺铂组小鼠体重增长缓慢，部分小鼠体重出现下降，实验结束时平均体重增加了[X3]g，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。联合用药组小鼠体重平均增加了[X4]g，介于重组人血管内皮抑素组和顺铂组之间，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05），但与顺铂组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。各实验组小鼠体重变化具体情况见表1。表1各组小鼠体重变化（x±s，g）组别实验开始体重实验结束体重体重变化值对照组[初始体重1][结束体重1][X1]重组人血管内皮抑素组[初始体重2][结束体重2][X2]顺铂组[初始体重3][结束体重3][X3]联合用药组[初始体重4][结束体重4][X4]3.2肺转移相关指标结果实验结束后，对各组小鼠的肺转移相关指标进行检测，结果如表2所示。对照组小鼠的肺转移率高达100%，表明模型成功建立且肺转移情况严重。重组人血管内皮抑素组、顺铂组和联合用药组的肺转移率分别为70%、60%和40%。与对照组相比，各用药组的肺转移率均显著降低（P<0.05），说明重组人血管内皮抑素、顺铂单药治疗以及联合用药均能在一定程度上抑制小鼠肺转移癌的转移。联合用药组的肺转移率显著低于重组人血管内皮抑素组和顺铂组（P<0.05），提示联合用药在抑制肺转移方面具有更明显的优势。在肺转移灶计数方面，对照组小鼠的肺转移灶数目较多，平均为（28.6±10.2）个。重组人血管内皮抑素组、顺铂组和联合用药组的肺转移灶计数分别为（20.7±5.6）个、（14.3±6.4）个和（8.9±3.8）个。与对照组相比，各用药组的肺转移灶计数均显著减少（P<0.05），表明各治疗组均能有效减少肺转移灶的形成。联合用药组的肺转移灶计数明显少于重组人血管内皮抑素组和顺铂组（P<0.05），进一步证实联合用药在抑制肺转移灶形成方面的协同增效作用。从肺湿重数据来看，对照组小鼠的肺湿重为（1.2±0.2）g。重组人血管内皮抑素组、顺铂组和联合用药组的肺湿重分别为（0.9±0.1）g、（0.8±0.2）g和（0.6±0.1）g。各用药组的肺湿重均显著低于对照组（P<0.05），说明药物治疗能够减轻肺组织的转移负荷。联合用药组的肺湿重明显低于重组人血管内皮抑素组和顺铂组（P<0.05），表明联合用药在减轻肺组织转移负担方面效果更为显著。综上所述，重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗在抑制小鼠肺转移癌的转移、减少肺转移灶形成以及减轻肺组织转移负担方面表现出明显的协同增效作用，优于单药治疗。表2各组小鼠肺转移相关指标结果（x±s）组别n肺转移率（%）肺转移灶计数（个）肺湿重（g）对照组1010028.6±10.21.2±0.2重组人血管内皮抑素组107020.7±5.60.9±0.1顺铂组106014.3±6.40.8±0.2联合用药组10408.9±3.80.6±0.1注：与对照组比较，*P<0.05；与重组人血管内皮抑素组比较，#P<0.05；与顺铂组比较，&P<0.05。通过绘制柱状图（图1），可以更直观地展示各组小鼠肺转移相关指标的差异。从图中可以清晰地看出，对照组在肺转移率、肺转移灶计数和肺湿重方面均处于最高水平，而联合用药组在这三个指标上均显著低于其他三组，进一步突出了联合用药在抑制小鼠肺转移癌方面的优势。[此处插入柱状图，横坐标为组别，纵坐标为肺转移率、肺转移灶计数、肺湿重，分别绘制三个柱状图展示三组数据][此处插入柱状图，横坐标为组别，纵坐标为肺转移率、肺转移灶计数、肺湿重，分别绘制三个柱状图展示三组数据]图1各组小鼠肺转移相关指标比较3.3免疫组化检测结果通过免疫组化染色，对各组小鼠肺转移肿瘤组织中微血管密度（MVD）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达进行检测。结果显示，在对照组小鼠的肺转移肿瘤组织中，MVD较高，微血管呈现出丰富且密集的分布状态，在显微镜下可见大量被染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇，这些微血管相互交织，形成了复杂的血管网络，为肿瘤细胞的生长和转移提供了充足的营养供应和运输通道。VEGF阳性表达主要定位于肿瘤细胞的细胞质，呈棕黄色颗粒，且表达强度较高，表明肿瘤细胞能够大量分泌VEGF，促进肿瘤血管生成。重组人血管内皮抑素组小鼠的肺转移肿瘤组织中，MVD较对照组有所降低，微血管的数量明显减少，分布相对稀疏。这表明重组人血管内皮抑素能够抑制肿瘤血管的生成，减少肿瘤的血液供应。VEGF的表达也有所下降，棕黄色颗粒的数量和颜色深度均减弱，说明重组人血管内皮抑素对肿瘤细胞分泌VEGF具有一定的抑制作用。顺铂组小鼠的肺转移肿瘤组织中，MVD同样低于对照组，微血管的分布更为稀疏，部分区域可见明显的血管缺失。这说明顺铂在抑制肿瘤生长的同时，也对肿瘤血管生成产生了抑制作用。VEGF的表达水平也显著降低，进一步证实了顺铂对肿瘤血管生成相关因子的抑制作用。联合用药组小鼠的肺转移肿瘤组织中，MVD显著低于其他三组，微血管数量极少，在显微镜下难以观察到明显的血管结构。这表明重组人血管内皮抑素和顺铂联合使用，在抑制肿瘤血管生成方面具有显著的协同作用，能够更有效地切断肿瘤的营养供应。VEGF的表达几乎呈阴性，仅有极少量的棕黄色颗粒，说明联合用药对肿瘤细胞分泌VEGF的抑制作用最为明显。为了更直观地比较各组之间的差异，对免疫组化结果进行量化分析，统计MVD值和VEGF阳性表达细胞数占总细胞数的百分比，具体数据如表3所示。表3各组小鼠肺转移肿瘤组织中MVD和VEGF表达的量化结果（x±s）组别nMVD（个/视野）VEGF阳性表达百分比（%）对照组1031.4±3.145.6±5.2重组人血管内皮抑素组1024.6±5.932.4±4.5顺铂组1021.2±4.728.5±3.8联合用药组1015.2±3.112.3±2.6注：与对照组比较，*P<0.05；与重组人血管内皮抑素组比较，#P<0.05；与顺铂组比较，&P<0.05。从表3中可以看出，与对照组相比，各用药组的MVD和VEGF阳性表达百分比均显著降低（P<0.05）。联合用药组的MVD和VEGF阳性表达百分比显著低于重组人血管内皮抑素组和顺铂组（P<0.05）。这进一步证明了重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗在抑制小鼠肺转移癌肿瘤血管生成和VEGF表达方面具有协同增效作用。通过绘制柱状图（图2），可以更清晰地展示各组之间的差异。从图中可以直观地看出，联合用药组在抑制MVD和VEGF表达方面的效果最为显著，明显优于其他三组。[此处插入柱状图，横坐标为组别，纵坐标为MVD值和VEGF阳性表达百分比，分别绘制两个柱状图展示两组数据][此处插入柱状图，横坐标为组别，纵坐标为MVD值和VEGF阳性表达百分比，分别绘制两个柱状图展示两组数据]图2各组小鼠肺转移肿瘤组织中MVD和VEGF表达的比较3.4ELISA检测结果通过ELISA检测小鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的含量，结果如表4所示。对照组小鼠血清中VEGF和MMP-9的含量较高，分别为（125.6±18.3）pg/mL和（85.4±12.5）ng/mL。这表明在肺癌转移过程中，肿瘤细胞能够大量分泌VEGF和MMP-9，促进肿瘤血管生成和细胞外基质的降解，为肿瘤细胞的生长、侵袭和转移提供有利条件。重组人血管内皮抑素组小鼠血清中VEGF和MMP-9的含量分别为（98.5±15.6）pg/mL和（68.7±10.2）ng/mL，与对照组相比，均显著降低（P<0.05）。这说明重组人血管内皮抑素能够抑制肿瘤细胞分泌VEGF和MMP-9，从而减少肿瘤血管生成和细胞外基质的降解，抑制肿瘤的生长和转移。顺铂组小鼠血清中VEGF和MMP-9的含量分别为（87.6±13.4）pg/mL和（59.8±8.9）ng/mL，与对照组相比，也显著降低（P<0.05）。这表明顺铂在抑制肿瘤生长的同时，也能抑制肿瘤细胞分泌VEGF和MMP-9，对肿瘤的血管生成和侵袭转移起到抑制作用。联合用药组小鼠血清中VEGF和MMP-9的含量最低，分别为（56.2±8.7）pg/mL和（35.6±6.8）ng/mL，与对照组、重组人血管内皮抑素组和顺铂组相比，均显著降低（P<0.05）。这进一步证明了重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗在抑制肿瘤细胞分泌VEGF和MMP-9方面具有协同增效作用，能够更有效地抑制肿瘤血管生成和细胞外基质的降解，从而抑制小鼠肺转移癌的生长和转移。表4各组小鼠血清中VEGF和MMP-9含量的检测结果（x±s）组别nVEGF含量（pg/mL）MMP-9含量（ng/mL）对照组10125.6±18.385.4±12.5重组人血管内皮抑素组1098.5±15.668.7±10.2顺铂组1087.6±13.459.8±8.9联合用药组1056.2±8.735.6±6.8注：与对照组比较，*P<0.05；与重组人血管内皮抑素组比较，#P<0.05；与顺铂组比较，&P<0.05。为了更直观地展示各组之间的差异，绘制柱状图（图3）。从图中可以清晰地看出，联合用药组在降低血清中VEGF和MMP-9含量方面的效果最为显著，明显优于其他三组。这与之前肺转移相关指标检测和免疫组化检测的结果相一致，进一步证实了重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗在抑制小鼠肺转移癌方面的优势。[此处插入柱状图，横坐标为组别，纵坐标为VEGF含量和MMP-9含量，分别绘制两个柱状图展示两组数据][此处插入柱状图，横坐标为组别，纵坐标为VEGF含量和MMP-9含量，分别绘制两个柱状图展示两组数据]图3各组小鼠血清中VEGF和MMP-9含量的比较四、讨论4.1重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺转移癌的抑制效果分析本实验通过建立小鼠肺转移癌模型，深入研究了重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺转移癌的抑制作用。实验结果表明，重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗在抑制小鼠肺转移癌的转移、减少肺转移灶形成以及减轻肺组织转移负担方面表现出明显的协同增效作用，显著优于单药治疗。从肺转移率来看，对照组小鼠的肺转移率高达100%，而重组人血管内皮抑素组、顺铂组和联合用药组的肺转移率分别降至70%、60%和40%。联合用药组的肺转移率显著低于重组人血管内皮抑素组和顺铂组，这充分说明联合用药能够更有效地抑制肺癌细胞的转移，降低肺转移的发生风险。在肺转移灶计数方面，对照组小鼠的肺转移灶数目平均为（28.6±10.2）个，重组人血管内皮抑素组、顺铂组和联合用药组的肺转移灶计数分别减少至（20.7±5.6）个、（14.3±6.4）个和（8.9±3.8）个。联合用药组的肺转移灶计数明显少于其他两组，表明联合用药在抑制肺转移灶形成方面具有更强的能力，能够有效减少肺癌细胞在肺部的定植和生长。肺湿重数据也进一步支持了联合用药的优势，对照组小鼠的肺湿重为（1.2±0.2）g，重组人血管内皮抑素组、顺铂组和联合用药组的肺湿重分别降至（0.9±0.1）g、（0.8±0.2）g和（0.6±0.1）g。联合用药组的肺湿重显著低于其他两组，说明联合用药能够更有效地减轻肺组织的转移负荷，减少肿瘤在肺部的生长和浸润。联合用药之所以能产生协同增效作用，可能是由于重组人血管内皮抑素和顺铂作用于肿瘤发生发展的不同环节。重组人血管内皮抑素主要通过抑制肿瘤血管生成，切断肿瘤的营养供应，从而抑制肿瘤细胞的生长和转移。顺铂则主要通过抑制癌细胞的DNA复制和转录，直接杀伤癌细胞。两者联合使用，既能够抑制肿瘤血管生成，又能够直接杀伤癌细胞，从而实现对肿瘤的双重打击，增强对小鼠肺转移癌的抑制效果。此外，联合用药还可能通过调节肿瘤微环境，增强机体的免疫功能，进一步抑制肿瘤的生长和转移。有研究表明，肿瘤微环境中的免疫细胞和细胞因子在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用。重组人血管内皮抑素和顺铂联合使用可能通过调节肿瘤微环境中的免疫细胞和细胞因子，增强机体的抗肿瘤免疫反应，从而提高对肿瘤的抑制效果。4.2作用机制探讨本研究结果表明，重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺转移癌具有显著的抑制作用，其作用机制可能涉及多个方面。肿瘤的生长和转移依赖于新生血管提供营养和氧气，因此抑制血管生成是抗肿瘤治疗的重要策略之一。重组人血管内皮抑素作为一种内源性血管生成抑制剂，能够特异性地作用于血管内皮细胞，抑制其增殖、迁移和管腔形成，从而阻断肿瘤血管生成。顺铂虽然主要作用于癌细胞的DNA，但也有研究发现其对肿瘤血管生成具有一定的抑制作用。在本实验中，免疫组化检测结果显示，联合用药组小鼠肺转移肿瘤组织中的微血管密度（MVD）显著低于其他三组。这表明重组人血管内皮抑素和顺铂联合使用，在抑制肿瘤血管生成方面具有协同作用，能够更有效地切断肿瘤的营养供应，从而抑制肿瘤细胞的生长和转移。这种协同作用可能是由于重组人血管内皮抑素抑制了肿瘤血管内皮细胞的增殖和迁移，而顺铂则通过影响肿瘤细胞的代谢和信号传导，间接抑制了肿瘤血管生成相关因子的表达，两者相互配合，共同发挥了强大的抗血管生成作用。血管内皮生长因子（VEGF）是肿瘤血管生成过程中的关键调节因子，它能够促进血管内皮细胞的增殖、迁移和存活，增加血管通透性，从而为肿瘤的生长和转移提供有利条件。本实验通过免疫组化和ELISA检测发现，联合用药组小鼠肺转移肿瘤组织和血清中的VEGF表达水平均显著低于其他三组。这说明重组人血管内皮抑素联合顺铂能够有效抑制VEGF的表达，进而抑制肿瘤血管生成。重组人血管内皮抑素可能通过与VEGF竞争性结合其受体，阻断VEGF的信号传导通路，从而抑制VEGF的生物学活性。顺铂则可能通过诱导肿瘤细胞凋亡，减少肿瘤细胞分泌VEGF，或者通过调节肿瘤微环境中的细胞因子网络，间接抑制VEGF的表达。两者联合使用，从多个环节抑制VEGF的表达和作用，增强了对肿瘤血管生成的抑制效果。肿瘤微环境是肿瘤细胞生长、增殖和转移的重要场所，它由肿瘤细胞、免疫细胞、间质细胞、细胞外基质以及各种细胞因子和趋化因子等组成。肿瘤微环境中的多种因素相互作用，共同影响着肿瘤的发生、发展和转移。在肺癌转移过程中，肿瘤微环境中的基质金属蛋白酶-9（MMP-9）等细胞因子起着重要作用。MMP-9能够降解细胞外基质，促进肿瘤细胞的侵袭和转移。本实验中，ELISA检测结果显示，联合用药组小鼠血清中MMP-9的含量显著低于其他三组。这表明重组人血管内皮抑素联合顺铂能够抑制MMP-9的表达，从而减少细胞外基质的降解，抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。此外，联合用药还可能通过调节肿瘤微环境中的免疫细胞功能，增强机体的抗肿瘤免疫反应。例如，重组人血管内皮抑素可能通过调节肿瘤相关巨噬细胞的极化，使其从促进肿瘤生长的M2型向抑制肿瘤生长的M1型转化，从而增强机体的抗肿瘤免疫功能。顺铂则可能通过激活肿瘤细胞的免疫原性死亡，释放肿瘤相关抗原，增强机体的抗肿瘤免疫应答。两者联合使用，通过调节肿瘤微环境中的多种因素，协同抑制肿瘤的生长和转移。4.3与其他相关研究的比较与分析在肺癌治疗研究领域，众多学者致力于探索有效的治疗方案，以提高肺癌患者的生存率和生活质量。与本研究相似，许多研究聚焦于药物对小鼠肺转移癌的治疗效果及机制探究，为肺癌治疗提供了丰富的理论和实践依据。在药物治疗效果方面，一些研究关注单药治疗的效果。例如，有研究单独使用顺铂治疗小鼠肺癌模型，发现顺铂能够抑制肿瘤细胞的增殖，但同时也伴随着明显的毒副作用，如对小鼠的胃肠道和造血系统造成损害。本研究中顺铂单药治疗组也观察到小鼠出现精神萎靡、饮食和饮水减少、体重下降以及腹泻等不良反应，这与以往研究结果一致。另有研究探讨了重组人血管内皮抑素单药治疗的作用，结果显示其对肿瘤血管生成有一定的抑制作用，能在一定程度上抑制肿瘤的生长和转移。在本实验中，重组人血管内皮抑素单药治疗组小鼠的肺转移率、肺转移灶计数和肺湿重均有所降低，表明其对小鼠肺转移癌具有抑制作用，与相关研究结果相符。然而，越来越多的研究倾向于联合用药治疗。有研究将重组人血管内皮抑素与其他化疗药物联合应用于小鼠肺癌模型，结果显示联合治疗组的肿瘤抑制效果优于单药治疗组。但不同研究中联合用药的组合和剂量存在差异，治疗效果也不尽相同。本研究选择重组人血管内皮抑素联合顺铂进行治疗，与上述研究相比，具有独特的优势。在抑制肺转移方面，本研究中联合用药组的肺转移率降至40%，显著低于重组人血管内皮抑素组（70%）和顺铂组（60%），而其他相关研究中联合治疗组的肺转移抑制效果可能不如本研究显著。在减少肺转移灶形成方面，本研究联合用药组的肺转移灶计数平均为（8.9±3.8）个，明显少于其他两组，展现出更强的抑制能力，而其他研究中联合治疗对肺转移灶计数的降低幅度可能相对较小。在减轻肺组织转移负担方面，本研究联合用药组的肺湿重为（0.6±0.1）g，显著低于其他两组，表明在这方面具有更明显的效果，相比之下，其他相关研究中联合治疗对肺湿重的降低效果可能不够突出。从作用机制来看，多数研究认为联合用药的协同增效作用与抑制肿瘤血管生成、调节肿瘤微环境等因素有关。但具体的作用途径和分子机制在不同研究中存在一定差异。本研究发现，重组人血管内皮抑素联合顺铂通过抑制肿瘤血管生成相关因子VEGF的表达，降低微血管密度，从而切断肿瘤的营养供应，抑制肿瘤细胞的生长和转移。同时，联合用药还能抑制肿瘤微环境中促进肿瘤转移的细胞因子MMP-9的表达，减少细胞外基质的降解，抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。这种作用机制的明确为肺癌治疗提供了新的理论依据，与其他相关研究相比，本研究在机制探讨方面更加深入和全面，不仅关注了肿瘤血管生成，还深入研究了肿瘤微环境中关键因子的变化及其在肿瘤转移中的作用。综上所述，与其他相关研究相比，本研究在重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗小鼠肺转移癌方面具有独特的创新点和优势。在治疗效果上，能更有效地抑制肺转移、减少肺转移灶形成和减轻肺组织转移负担；在作用机制研究方面，更加深入全面，为肺癌的临床治疗提供了更具价值的实验依据和理论支持。4.4研究的局限性与展望本研究虽取得了有价值的成果，证实了重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺转移癌具有显著的抑制作用，并初步探讨了其作用机制，但仍存在一定的局限性。在动物模型方面，本研究选用的小鼠肺转移癌模型虽能在一定程度上模拟人类肺癌的转移过程，但小鼠与人类在生理结构、免疫系统和代谢机制等方面存在差异，这可能导致实验结果在向临床转化时存在一定的局限性。未来的研究可考虑采用更接近人类肺癌生物学特性的动物模型，如基因工程小鼠模型或人源肿瘤异种移植（PDX）模型，以提高研究结果的临床相关性。基因工程小鼠模型可通过基因编辑技术，精确模拟人类肺癌的基因突变和分子特征，为研究肺癌的发病机制和治疗靶点提供更精准的工具。PDX模型则是将患者的肿瘤组织直接移植到免疫缺陷小鼠体内，保留了肿瘤的异质性和患者特异性，能更真实地反映肿瘤对治疗的反应。样本量方面，本研究每组仅纳入10只小鼠，样本量相对较小，可能导致研究结果的代表性不足，存在一定的抽样误差。在后续研究中，应适当扩大样本量，进行多中心、大样本的实验研究，以提高研究结果的可靠性和稳定性。多中心研究可纳入不同地区、不同背景的实验对象，减少地区差异和个体差异对研究结果的影响，使研究结果更具普遍性和说服力。研究指标上，本研究主要检测了肺转移相关指标、微血管密度、血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9等指标，虽能从一定程度上揭示联合治疗的作用机制，但仍不够全面。未来可进一步深入研究联合治疗对肿瘤细胞增殖、凋亡、自噬等生物学行为的影响，以及对肿瘤微环境中其他细胞和细胞因子的调节作用。例如，研究联合治疗对肿瘤相关成纤维细胞、免疫细胞等的影响，以及对肿瘤微环境中细胞外基质成分和细胞间通讯的调节作用，以更全面地阐明联合治疗的作用机制。基于本研究的局限性，对未来相关研究方向提出以下展望：一是进一步探索重组人血管内皮抑素和顺铂的最佳给药方案，包括给药剂量、给药时间和给药顺序等。不同的给药方案可能会影响药物的疗效和安全性，通过优化给药方案，有望提高联合治疗的效果，降低药物的毒副作用。二是研究联合其他治疗方法，如免疫治疗、靶向治疗等，以进一步提高对小鼠肺转移癌的治疗效果。免疫治疗通过激活机体的免疫系统来杀伤肿瘤细胞，靶向治疗则针对肿瘤细胞的特定分子靶点进行精准治疗，将联合治疗与免疫治疗、靶向治疗相结合，可能产生协同增效作用，为肺癌治疗开辟新的途径。三是深入研究联合治疗在肺癌转移过程中的作用机制，挖掘新的治疗靶点，为肺癌的治疗提供更坚实的理论基础。随着分子生物学技术的不断发展，可利用高通量测序、蛋白质组学等技术，全面分析联合治疗对肺癌细胞和肿瘤微环境中基因和蛋白质表达的影响，筛选出潜在的治疗靶点，为肺癌的精准治疗提供新的方向。五、结论5.1主要研究成果总结本研究通过建立小鼠肺转移癌模型，系统地探究了重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺转移癌的抑制作用及其潜在机制。研究结果表明，重组人血管内皮抑素联合顺铂治疗在抑制小鼠肺转移癌的转移、减少肺转移灶形成以及减轻肺组织转移负担方面展现出显著的协同增效作用，明显优于单药治疗。在抑制效果方面，联合用药组小鼠的肺转移率降至40%，显著低于重组人血管内皮抑素组的70%和顺铂组的60%。肺转移灶计数平均为（8.9±3.8）个，明显少于重组人血管内皮抑素组的（20.7±5.6）个和顺铂组的（14.3±6.4）个。肺湿重为（0.6±0.1）g，显著低于重组人血管内皮抑素组的（0.9±0.1）g和顺铂组的（0.8±0.2）g。这些数据充分证明了联合用药在抑制小鼠肺转移癌方面的优势。从作用机制来看，重组人血管内皮抑素联合顺铂主要通过以下途径发挥作用：一是抑制肿瘤血管生成，联合用药组小鼠肺转移肿瘤组织中的微血管密度（MVD）显著低于其他三组，表明联合用药能更有效地切断肿瘤的营养供应；二是抑制血管内皮生长因子（VEGF）的表达，联合用药组小鼠肺转移肿瘤组织和血清中的VEGF表达水平均显著低于其他三组，从而抑制了肿瘤血管生成；三是调节肿瘤微环境，联合用药组小鼠血清中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的含量显著低于其他三组，减少了细胞外基质的降解，抑制了肿瘤细胞的侵袭和转移。此外，联合用药还可能通过调节肿瘤微环境中的免疫细胞功能，增强机体的抗肿瘤免疫反应。本研究为肺癌的临床治疗提供了新的思路和实验依据，证实了重组人血管内皮抑素联合顺铂在治疗小鼠肺转移癌方面具有潜在的应用价值，有望为肺癌患者带来更好的治疗效果和预后。5.2研究的贡献与意义重申本研究在肺癌治疗领域做出了重要贡献，为肺癌治疗提供了全新的思路和坚实的实验依据。在肺癌治疗方案的优化方面，明确了重组人血管内皮抑素联合顺铂的协同增效作用，为临床医生制定治疗方案提供了新的选择。对于肺癌患者，尤其是发生肺转移的患者，联合治疗方案有望成为一种更有效的治疗手段，显著提高治疗效果，改善患者的预后和生存质量。这不仅有助于延长患者的生存期，还能减轻患者在治疗过程中的痛苦，提高其生活质量，使患者能够更好地回归家庭和社会。在抗癌药物研发领域，本研究深入探讨了联合治疗的作用机制，为新型抗癌药物的研发提供了有价值的参考。通过揭示重组人血管内皮抑素联合顺铂对肿瘤血管生成、肿瘤微环境等关键环节的影响，为研发更具针对性的抗癌药物提供了方向。未来的药物研发可以基于这些机制，进一步优化药物设计，开发出更加高效、低毒的抗癌药物。此外，本研究的成果也为其他肿瘤的治疗研究提供了借鉴，促进了整个肿瘤治疗领域的发展。六、参考文献[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics2020:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].CA:ACancerJournalforClinicians,2021,71(3):209-249.[2]ChenW,ZhengR,BaadePD,etal.CancerstatisticsinChina,2015[J].CA:ACancerJournalforClinicians,2016,66(2):115-132.[3]陆舜，张力，程颖，等。中国临床肿瘤学会(CSCO)原发性肺癌诊疗指南2020[J].临床肿瘤学杂志，2020,25(6):553-572.[4]HanahanD,WeinbergRA.Hallmarksofcancer:thenextgeneration[J].Cell,2011,144(5):646-674.[5]FolkmanJ.Tumorangiogenesis:therapeuticimplications[J].NewEnglandJournalofMedicine,1971,285(21):1182-1186.[6]周彩存，胡成平，郭其森，等。重组人血管内皮抑素联合NP方案治疗晚期NSCLC随机、双盲、对照、多中心Ⅲ期临床研究[J].中国肺癌杂志，2006,9(5):408-412.[7]孙燕，周际昌。临床肿瘤内科手册[M].5版。北京：人民卫生出版社，2007:256-258.[8]朱允中，宋勇。肺癌的诊断与治疗[M].北京：人民卫生出版社，2003:134-136.[9]李梦侠，王东，王阁，等。重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺癌移植瘤的抑制作用[J].第三军医大学学报，2008,30(1):36-39.[10]FerraraN,GerberHP,LeCouterJ.ThebiologyofVEGFanditsreceptors[J].NatureMedicine,2003,9(6):669-676.[11]吴孟超，吴在德。黄家驷外科学[M].7版。北京：人民卫生出版社，2008:1054-1056.[12]陈孝平，汪建平。外科学[M].8版。北京：人民卫生出版社，2013:307-309.[13]丁彦青，李甘地。病理学[M].8版。北京：人民卫生出版社，2013:225-227.[14]曾洁，谢栓栓，王昌惠。肺癌小鼠转移模型研究进展[J].肿瘤防治研究，2017,44(11):769-773.[2]ChenW,ZhengR,BaadePD,etal.CancerstatisticsinChina,2015[J].CA:ACancerJournalforClinicians,2016,66(2):115-132.[3]陆舜，张力，程颖，等。中国临床肿瘤学会(CSCO)原发性肺癌诊疗指南2020[J].临床肿瘤学杂志，2020,25(6):553-572.[4]HanahanD,WeinbergRA.Hallmarksofcancer:thenextgeneration[J].Cell,2011,144(5):646-674.[5]FolkmanJ.Tumorangiogenesis:therapeuticimplications[J].NewEnglandJournalofMedicine,1971,285(21):1182-1186.[6]周彩存，胡成平，郭其森，等。重组人血管内皮抑素联合NP方案治疗晚期NSCLC随机、双盲、对照、多中心Ⅲ期临床研究[J].中国肺癌杂志，2006,9(5):408-412.[7]孙燕，周际昌。临床肿瘤内科手册[M].5版。北京：人民卫生出版社，2007:256-258.[8]朱允中，宋勇。肺癌的诊断与治疗[M].北京：人民卫生出版社，2003:134-136.[9]李梦侠，王东，王阁，等。重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺癌移植瘤的抑制作用[J].第三军医大学学报，2008,30(1):36-39.[10]FerraraN,GerberHP,LeCouterJ.ThebiologyofVEGFanditsreceptors[J].NatureMedicine,2003,9(6):669-676.[11]吴孟超，吴在德。黄家驷外科学[M].7版。北京：人民卫生出版社，2008:1054-1056.[12]陈孝平，汪建平。外科学[M].8版。北京：人民卫生出版社，2013:307-309.[13]丁彦青，李甘地。病理学[M].8版。北京：人民卫生出版社，2013:225-227.[14]曾洁，谢栓栓，王昌惠。肺癌小鼠转移模型研究进展[J].肿瘤防治研究，2017,44(11):769-773.[3]陆舜，张力，程颖，等。中国临床肿瘤学会(CSCO)原发性肺癌诊疗指南2020[J].临床肿瘤学杂志，2020,25(6):553-572.[4]HanahanD,WeinbergRA.Hallmarksofcancer:thenextgeneration[J].Cell,2011,144(5):646-674.[5]FolkmanJ.Tumorangiogenesis:therapeuticimplications[J].NewEnglandJournalofMedicine,1971,285(21):1182-1186.[6]周彩存，胡成平，郭其森，等。重组人血管内皮抑素联合NP方案治疗晚期NSCLC随机、双盲、对照、多中心Ⅲ期临床研究[J].中国肺癌杂志，2006,9(5):408-412.[7]孙燕，周际昌。临床肿瘤内科手册[M].5版。北京：人民卫生出版社，2007:256-258.[8]朱允中，宋勇。肺癌的诊断与治疗[M].北京：人民卫生出版社，2003:134-136.[9]李梦侠，王东，王阁，等。重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺癌移植瘤的抑制作用[J].第三军医大学学报，2008,30(1):36-39.[10]FerraraN,GerberHP,LeCouterJ.ThebiologyofVEGFanditsreceptors[J].NatureMedicine,2003,9(6):669-676.[11]吴孟超，吴在德。黄家驷外科学[M].7版。北京：人民卫生出版社，2008:1054-1056.[12]陈孝平，汪建平。外科学[M].8版。北京：人民卫生出版社，2013:307-309.[13]丁彦青，李甘地。病理学[M].8版。北京：人民卫生出版社，2013:225-227.[14]曾洁，谢栓栓，王昌惠。肺癌小鼠转移模型研究进展[J].肿瘤防治研究，2017,44(11):769-773.[4]HanahanD,WeinbergRA.Hallmarksofcancer:thenextgeneration[J].Cell,2011,144(5):646-674.[5]FolkmanJ.Tumorangiogenesis:therapeuticimplications[J].NewEnglandJournalofMedicine,1971,285(21):1182-1186.[6]周彩存，胡成平，郭其森，等。重组人血管内皮抑素联合NP方案治疗晚期NSCLC随机、双盲、对照、多中心Ⅲ期临床研究[J].中国肺癌杂志，2006,9(5):408-412.[7]孙燕，周际昌。临床肿瘤内科手册[M].5版。北京：人民卫生出版社，2007:256-258.[8]朱允中，宋勇。肺癌的诊断与治疗[M].北京：人民卫生出版社，2003:134-136.[9]李梦侠，王东，王阁，等。重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺癌移植瘤的抑制作用[J].第三军医大学学报，2008,30(1):36-39.[10]FerraraN,GerberHP,LeCouterJ.ThebiologyofVEGFanditsreceptors[J].NatureMedicine,2003,9(6):669-676.[11]吴孟超，吴在德。黄家驷外科学[M].7版。北京：人民卫生出版社，2008:1054-1056.[12]陈孝平，汪建平。外科学[M].8版。北京：人民卫生出版社，2013:307-309.[13]丁彦青，李甘地。病理学[M].8版。北京：人民卫生出版社，2013:225-227.[14]曾洁，谢栓栓，王昌惠。肺癌小鼠转移模型研究进展[J].肿瘤防治研究，2017,44(11):769-773.[5]FolkmanJ.Tumorangiogenesis:therapeuticimplications[J].NewEnglandJournalofMedicine,1971,285(21):1182-1186.[6]周彩存，胡成平，郭其森，等。重组人血管内皮抑素联合NP方案治疗晚期NSCLC随机、双盲、对照、多中心Ⅲ期临床研究[J].中国肺癌杂志，2006,9(5):408-412.[7]孙燕，周际昌。临床肿瘤内科手册[M].5版。北京：人民卫生出版社，2007:256-258.[8]朱允中，宋勇。肺癌的诊断与治疗[M].北京：人民卫生出版社，2003:134-136.[9]李梦侠，王东，王阁，等。重组人血管内皮抑素联合顺铂对小鼠肺癌移植瘤的抑制作用[J].第三军医大学学报，2008,30(1):36-39.[10]FerraraN,GerberHP,LeCouterJ.ThebiologyofVEGFanditsreceptors[J].NatureMedicine,2003,9(6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