医院消毒灭菌效果监测实施方案

吐哈石油医院2015年消毒灭菌效果监测

实施方案

医院消毒是预防医院内感染的重要措施之一，消毒效果的监测是评价其消毒

设备运转是否正常、消毒药剂是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否达标

的唯一手段。为规范消毒效果监测，依据卫计委《医院感染管理办法》、《医院感

染监测规范》、《医院消毒技术规范规范（2012版）》特制定哈密地区中心医院消

毒灭菌效果监测实施方案。

一、监测项目：

1.空气消毒效果的监测；

2.手和物体表面的消毒效果监测；

3.牙科用水的监测；

4.内镜消毒及灭菌效果的监测；

5.使用中消毒剂及灭菌剂的监测；

6.压力蒸汽灭菌效果监测；

7.血液透析用水和透析液的监测

8.灭菌物品监测

二、监测单的填写：

1.空气监测：采样地点、样品名称（空气）、采样时间、采样人，检验项目：

细菌总数、致病菌（如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等）。

2.物表监测：采样地点、物表名称（注明所采物品的名称和部位）、采样人、

采样时间、检验项目、细菌总数、致病菌（如金黄色葡萄球菌等）。

3.手监测：采样地点、被监测人姓名、采样人、采样时间、检验项目：细菌

总数、致病菌（如金黄色葡萄球菌等）。

4.其他物品的监测：采样地点、样品名称、检验项目、采样人、采样时间等。

（一）空气消毒效果的监测

1.监测科室：非洁净手术室、产房、血透室、消毒供应室等。

2.监测频次：重点科室每季度一次，如有疑似感染发生随时采样。

3.采样（沉降法）

⑴采样时间：空气消毒后4小时内、操作前。

⑵平板暴露法：（非洁净手术室）暴露前先检查平板是否污染，是否有气泡

及霉点。将普通营养琼脂平板（直径为9cm）放在室内各采样点处，采样高度为

距地面0.8m—1.5m,采样时将平板盖打开，斜扣放于平板旁，暴露15min,在

放置、收取平皿时，手不能在暴露平皿的正上方移动。

（3）布点方法：室内面积《30而，设内、中、外对角线上的3点，内、外点布

点部位距墙1M处；室内面积＞30而，设4角及中央共5点，4角的布点部位距

墙壁1m处。

图1室内面积W30m2布点图图2室内面积＞30布的布点图

4.注意事项

⑴采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止lOmin进行采样。

⑵平板摆放如取一条对角线，避免离门近的一条。

⑶工作人员不要靠近自动门，以免影响监测结果。

5.结果计算及报告

⑴结果计算：空气中菌落总数=©八（皿、暴露时间）

⑵监测结果的判定及结果报告格式（见表1）

表1非洁净空气监测（II类、III类环境）的结果报告

出口々加52.在抽上检验结果标准

样用名称采样地点细菌总数致病菌细菌总数

致病菌

II类环境某某空气cfu/15min.90皿未检出W4cfu/15min.90皿不得检出

III类环境某某空气cfu/5min.90UH未检出W4cfu/5min.90皿不得检出

⑶注意事项

检测结果为“0"时:细菌菌落总数应报告为Ocfu/分钟数.皿

（二）手、物体表面消毒效果监测

1、监测重点科室：手术室、产房、导管室、重症监护病房、新生儿室、母婴

空，血液透析病房，感染疾病科，口腔科.消毒供应中心等。

2、监测频次

⑴重点科室物表每月监测，工作人员手每季度监测。

⑵有医院感染流行，怀疑与手卫生或医院环境卫生学因素有关时，应及时进

行监测。

3、手消毒效果的监测

⑴采样时间：在接触患者、进行诊疗活动前采样。

⑵采样方法：被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子

在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30cm2）,并随之

转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无

菌洗脱液试管内，立即送检。

⑶检测方法：将采样管用力振打80次，用无菌吸管吸取待检样品接种于灭菌

平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入已溶化的45c-48c的营养琼脂

15ml-18nil,边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36c±1℃温箱培养48h,计数菌落数。

⑷结果判定及报告

①细菌菌落总数计算方法：

细菌菌落总数（cfu/cmD=平板上菌落数义稀释倍数/采样面积（co?）

采样液的稀释倍数为10

②判定标准及报告格式：

一般医护人员手不得检出大肠杆菌、金黄色葡萄球菌；【类、II类区域工作

人员手不得检出铜绿假单胞菌；母婴同室、新生儿室及儿科病房工作人员手不得

检出沙门氏菌，溶血性链球菌。结果报告及判定标准见表2。

表2手卫生的结果报告及判定标准

检验结果标准

样品名称采样地点•

细菌总数致病菌细菌总数致病菌

卫生手消毒WIOcfu/cm2不得检出

手（张三）某某科cfu/cur未检出

外科手消毒W5cfu/cm"不得检出

检测结果为“0”或细菌菌落总数不足“1”时：应报告为Vlcfu/cm2；当

细菌菌落总数■小数时，按四舍五入计数。如cnf报lcfu/cn?,cn?报2cfu/cm'。

⑸注意事项：

①洗手后不要接触未消毒的物品。

②用消毒巾擦干，或控干手上的水分。

4.物体表面消毒效果的监测

（1）物体表面的采样：用5cmX5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，采样

面积2100cm：',连续采样4个，用浸有含相应中和剂或生理盐水采样液的棉拭

子1支，在规格板内横竖往返涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部

位后，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内。

门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。

⑵注意事项

①被采样本表面积V100cm'取全部表面；被采样本表面积2100cmi取lOOcnT；

②不规则物体表面的采样，尽量准确估算实际面积。

③小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示，（国家现无评价标准，可估计面

积计算菌落总数，参照一般物表的标准进行评价）。

④若消毒因子为化学消毒剂，采样液中应加入相应中和剂。

⑶结果判定及报告

①结果计算：

物体表面细菌菌落总数（cfu/cm2）平皿上菌落的平均数x采样液稀释倍数

采样面积（cn?）

采样液的稀释倍数为10；物体表面面积2100cm,的物表，按照lOOcni，计算。

②判定标准及报告格式：

一般的物体表面不得检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌；母婴同室、早产

儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。结果报告及判定标

准见表3。

表3物体表面的结果报告及判定标准

检验结果标准

样4V品口名I称采样地点

细菌总数致病菌细菌总数致病菌

I类环境W5cfu/cm2

II类环境W5cfu/cm2不得检出

治疗台面某某科cfu/cnf未检出

HI类环境W10cfu/cm2

N类环境W15cfu/cm2

检测结果为“0”或细菌菌落总数不足“1”时：应报告为Vlcfu/cm2；当

细菌菌落总数有小数时，按四舍五入计数。如cnf报Icfu/cnf,cm?报2cfu/cm\

（三）灭菌物品的监测

1、灭菌物品不做常规监测，如怀疑医院感染与灭菌物品有关时，可按下列方

法进行监测。

2、采样：

⑴采样时间：在灭菌处理后，存放有效期内采样。

⑵采样方法：用无菌操作打开器械包（敷料包），用沾有无菌洗脱液的棉拭子

反复涂抹手术钳、镜子等医疗器械（手术敷料），将棉拭子投入10ml无菌洗脱

液中，将采样液混匀。

⑶检验方法：吸取被检样液接种151nL需一厌氧培养管（共6管，其中1管作阳

性对照），接种量为1ml/管，30℃-35c培养5天。再取接种15mL霉菌培养管［共4

管，其中1管作阳性对照）25。。培养7天0

⑷结果判定：阳性对照在24h内应有菌生长，阴性对照在培养期间应无菌生

长，如需-厌氧菌及霉菌培养管内均为澄清或虽显混浊但经证明并非有菌生长，

判为灭菌合格；如需-厌氧菌及霉菌培养管中任何1管显混浊并证实有菌生长，应

重新取样，分别同法复试2次，除阳性对照外，其他各管均不得有菌生长，否

则判为灭菌不合格。

⑸注意事项：

①送检时间不得超过6h,若样品保存于0℃〜4℃,则不得超过24鼠

②灭菌物品采样，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染。

③无菌检验应该在洁净度为100级单向流空气区域内进行采样，对单向流向空

气区域及工作台面，必须进行洁净度验证。

4.检测结果判定及报告可参考以下格式

检验结果标准________

样品名称采样地点

需一厌氧菌霉菌需一厌氧菌霉菌

敷料包百级手术间未检出未检出无菌生长无菌生长

器械包百级净化台未检出未检出无菌生长无菌生长

表4敷料包、器械包的监测报告

（四）内镜消毒、灭菌效果的监测

1.监测时间：每季度进行

2.采样

⑴采样时间；在消毒灭菌后、使用前进行采样。

⑵采样方法：

消毒后内镜内腔面：取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50nli含相应中

和剂的洗脱液，从内镜活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集进行检验。

3.检验方法：

吸取被检样液接种平皿；将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜（微米）过滤

浓缩，将滤膜接种于营养琼脂平板上。

4.结果判定及报告

菌落数/镜二2个平皿菌落数的平均值X20

⑴消毒后的内镜：细菌总数W20cfu/件，并未检出致病菌为合格。

表5消毒后内镜的检验结果及报告

检验结果标准

样品名称采样地点

细菌总数致病菌细菌总数致病菌

胃镜内腔面内镜室cfu/件未检出<20cfu/件不得检出

注：致病菌指金黄色葡萄球菌、沙门氏菌，并不得检出大肠杆菌。

⑵平板菌落数为“0”时，细菌菌落总数应也告为VlOcfu/件。

⑶灭菌后内镜：未检出任何微生物为合格。

（五）使用中消毒、灭菌剂的监测

1.监测时间

⑴化学监测：根据消毒、灭菌剂的性能设定监测时间，如含氯消毒剂、过

氧乙酸等易挥发产品每日监测；戊二醛监测每周不少于一次。

⑵生物监测：消毒剂与灭菌剂每季度一次。

2.结果的报告可参考以下格式：

表6戊二醛有效含量的结果报告

样品名称采样地点检验项目检验结果魏）

2%戊二醛口腔科有效含量

3.使用中消毒液染菌量测定

⑴监测样品：碘代、安尔碘、戊二醛、含氯消毒液等。

⑵采样方法；

①用无菌吸管吸取消毒液，加入含有相应中和剂混匀。醇类与酚类消毒剂

用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含%硫代硫

酸钠中和剂，醛类消毒剂用%甘氨酸中和剂。

②用无菌吸管吸取一定稀释比例的中和后混合液接种平皿，将冷至40c〜

45c的熔化营养琼脂培养基每皿,倾注15nli〜20mL36℃±恒温箱培养72h,计

数菌落数。

⑶结果计算及报告：

结果的计算：消毒液染菌量（cfu/ml）=平均每皿菌落数X10X稀释倍数

表7消毒液的监测结果报告及判定标准

标准

样品名称采样地点细菌染菌量-

消毒液染菌量致病菌

灭菌用消毒液某某科无菌生长无菌生长

使用中皮肤黏膜消毒液染菌量某某科cfu/mLW10cfu/mL

其他使用中消毒液染菌量某某科cfu/mL<100cfu/mL

（七）压力蒸汽灭菌效果监测

1、监测频次

⑴物理监测：每锅进行，并详细记录：灭菌压力、温度（波动范围在+3℃内）、

时间、锅号、锅次、灭菌操作者签名等项。

⑵化学监测：每包进行外用化学指示物监测，高度危险性物品包内应放置包

内化学指示物。

⑶生物监测：每周进行，对新灭菌器使用前或拟采用新包装容器、摆放方式、

排气方式及特殊灭菌工艺，都必须进行生物监测，合格后才能采用。灭菌植入型

器械应每批次进行生物监测。

（4）B-D试验：预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器，每日进行一次B-D试验。

⑸可选择具有代表性的PCD进行消毒灭菌效果监测。

2、化学监测法

⑴化学指示卡：高危险性物品包内应放置化学指示卡，置于最难灭菌的舒位;

⑵化学指示胶带：将化学指示胶带粘贴于每一待灭菌物品包外，如果透过包

装材料可直接观察包内化学指示卡颜色变化，则包外不必贴化学指示胶带：

⑶B-D试纸：预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器，每天灭菌前进行；

⑷结果判定：通过观察化学指示物颜色变化，判断是否达到灭菌合格要求。

3、生物监测法

⑴指示菌株：耐热的嗜热脂肪杆菌芽抱（ATCC7953）制备的压力蒸汽灭菌生

物指示剂。

⑵检测方法：将1支生物指示剂管，置于标准试验包中心部位。

①下排气压力蒸汽灭菌器的监测：在下排气压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气

口上方放置一个标准试验包（由3件平纹长袖手术衣4块小手术巾，2块中手术

巾，1块大毛巾，30块10cmX10cm8假布敷料包裹成25cmX30cmX30cm大小）；

②预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器的监测：预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌

器灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准测试包〔由16条41cmX66cm全棉手术巾

制成，将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层然后叠放，制成23cmX23cni

X15cm大小的测试包）；

③小型压力蒸汽灭菌器应选择常用的有代表性的灭菌包作为生物测试包，包内

放置1支生物指示管，且灭菌器处于满载状态；

④快速压力蒸汽灭菌器应直接将1支生物指示管置于空载的灭菌器内；

⑤经一个灭菌周期后，取出指示剂管，夹破管内安甑，放于56c培养箱中，同

时放1支未灭菌的指示管，夹破管内安甑，做阳性对照；培养48h,观察结果。

⑶结果报告：每个指示剂管的浪甲酚紫蛋白陈水培养基都不变色，判定为灭

菌合格；若由紫色变为黄色时，则灭菌过程不合格。

（八）血液透析系统的监测

1、监测频次

⑴对入、出透析器的透析液：每月监测一次。

⑵对透析液内毒素：每季度监测一次。

⑶对透析用水化学污染物：每年一次。

⑷疑有透析液污染或有严重感染病例时：应及时进行监测，并增加采样点，

如原水口、软化水出口、反渗水出口、透析液配液口等。

⑸检查结果超标，必须复查。

2、样品采集

⑴对使用中的透析机入口液和出口液进行抽查采样。

⑵单一透析系统：采样点为透析液入口及出口，消毒后用无菌试管接原液5nli

即可。

3、检测方法：

吸取原液标本加入血•琼脂平皿中均匀涂布，置36℃孵育箱培养48h,鉴定细菌

级计算每ml标本中的细菌菌落数。

4、监测结果的判定及结果报告

结果计算：细菌总数（cfu/ml）=平皿上的细菌菌落数X5

表8透析机出、入口液的监测报告

检验结果标准

样品名称采样地点-

细菌总数致病菌细菌总数致病菌

透析用水透析中心cfu/ml未检出W100cfu/ml不得检出

5、注意事项:

平板菌落数为“0”，细菌菌落总数应报告为V100cfu/ml。

（九）洁净手术室空气监测

1.洁净手术室空气沉降菌浓度的测定：

⑴采样前的准备工作

①采样前手术室与人员的准备：净化机组开机时间满30分钟后方可采样；采

样者必须穿着无菌工作服，采样人员不超过2人。

②采样培养皿的准备：用于测定的培养皿必需进行空白对照试验；培养皿测点

数根据手术室的面积与级别而定；采样点可布置在地面上或不高于地面0.8米

的任意高度上。

③采样过程中的控制：采样应在手术室处于清洁、静止、密闭的状态下进行；

培养皿放置妥当后人员迅速离开；采样过程中禁士人员进入，手术室门保持关

闭状态；采样时间严格按照30分钟执行。

④采样点的布置：送风口集中布置的手术间，应对手术区和周边区分别检测,

当送风口分散布置时，全室统一检测，但不应布置在送风口正下方。布点方法

见表9。

表9沉降菌采样布点方法参考（空态或静态）

物空气洁净程度等级布点方法超剧最少皿数布点示意正常值

•••

••

手术区100级均匀布点513•••30min•90皿

•♦

•••

I

•♦••

周边区1000级每边F晒点85♦•30min・90皿

•♦

••

手术区双对角线・

1000级35••30min901111

II

・

长边内2/施ii内1点♦

周边区10000级63••30min,90皿

•♦

■

手术区10000级单对角线33•30min•90HU

*

III

周边区100000级每她1点43••SOmin・90HI1

*

⑵采样注意事项

①布点时应从房间的里面开始，依次向外布放。收取平板时顺序由外向里依次

收取。

②空白对照：每次采样设2次空白对照，第一次用于检测培养皿（不打开平皿）,

第二次每室或每区用一个平皿模拟操作过程（打开平皿，立刻合上），同其它平

皿一起送培养。两次空白对照结果都必须为阴性。

③静态采样可放置在固定设备如手术床上。

④空气洁净级别相同的房间