T-TPPA 0008-2024 麦冬（供注射用）质量标准

CCSC272024-05-31发布2024-05-31实施天津市医药行业协会发布T/TPPA0008-2024 2规范性引用文件 3术语和定义 4要求 24.1感官指标 24.2理化指标 24.3外源性污染物 25检测方法 45.1感官指标 45.2理化指标 45.3外源性污染物 56检验规则 56.1抽样方法 56.2判定规则 57标志、包装、运输和贮存 67.1标志 67.2包装 67.3运输 67.4贮存 6附录A（规范性）鉴别3DNA条形码分子鉴定方法 7附录B（规范性）指纹图谱测定方法 附录C（规范性）特征图谱测定方法 附录D（规范性）多效唑残留量测定方法 IT/TPPA0008-2024本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由天津天士力之骄药业有限公司提出。本文件由天津市医药行业协会归口。本文件起草单位：天津天士力之骄药业有限公司、天津市药品检验研究院、天津市中药注射剂安全性评价企业重点实验室、现代中药创制全国重点实验室、甘肃之骄制药有限公司、河南天地药业股份有限公司、现代中医药海河实验室、天津市药品检验研究院北辰药品检验所。本文件主要起草人：宋丽丽、周军、穆宇晴、卢卿、李宏影、岳洪水、鞠爱春、林梅、冯现华、张俊华、周水平、何毅、白晓丽、刘朋、张彦明、冯玉波、孙孝梅、郑文科、王杰、李春、贺超凡。1T/TPPA0008-2024麦冬（供注射用）质量标准本文件规定了麦冬（供注射用）的技术要求、检测方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。本文件适用于麦冬（供注射用）的质量控制。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T23400地理标志产品涪城麦冬《中华人民共和国药典》（2020年版）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1麦冬Ophiopogonisradix本品为百合科植物麦冬[Ophiopogonjaponicus(L.f.)Ker-Gawl.]的干燥块根。夏季采挖，洗净，反复暴晒、堆置，至七八成干，除去须根，干燥。3.2乌花wuhua麦冬在采收过程中被硬器碰伤的痕迹。3.3表面出现泛糖现象的麦冬。3.42T/TPPA0008-2024红锈hongxiu表面有呈红色如“铁锈”一般的麦冬。4要求4.1感官指标麦冬（供注射用）感官要求应符合表1规定。表1感官要求4.2理化指标麦冬（供注射用）理化指标应符合表2规定。表2理化指标鉴别1、2≤7≤1≤≤≤≥≥≥4.3外源性污染物4.3.1农药残留量麦冬（供注射用）农药残留量指标应符合表3规定。3T/TPPA0008-2024表3农药残留量指标）≤≤≤≤）≤≤≤≤）≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤≤）≤）≤≤）≤≤≤≤≤≤）≤≤≤≤≤4.3.2二氧化硫残留量麦冬（供注射用）的二氧化硫残留量不得过150mg·kg-1。4.3.3重金属及有害元素4T/TPPA0008-2024麦冬（供注射用）的重金属及有害元素指标应符合表4规定。表4重金属及有害元素指标）≤5）≤1）≤2）≤）≤4.3.4多效唑残留量麦冬（供注射用）的多效唑残留量不得过0.2mg·kg-1。5检测方法5.1感官指标将被测样品打开包装，置于白色搪瓷盘中，在自然光线下，观察色泽、性状；品尝其滋味，嗅其气5.2理化指标5.2.1鉴别1测定照《中华人民共和国药典》一部麦冬项下鉴别项（1）规定的方法测定。5.2.2鉴别2测定照《中华人民共和国药典》一部麦冬项下鉴别项（2）规定的方法测定。5.2.3鉴别3测定照附录A及《中华人民共和国药典》四部通则9107、0541规定的方法测定。5.2.4杂质测定照《中华人民共和国药典》四部通则2301规定的方法测定。5.2.5水分测定照《中华人民共和国药典》四部通则0832第二法规定的方法测定。5.2.6总灰分测定照《中华人民共和国药典》四部通则2302规定的方法测定。5.2.7酸不溶性灰分测定5T/TPPA0008-2024照《中华人民共和国药典》四部通则2302规定的方法测定。5.2.8浸出物测定照《中华人民共和国药典》四部通则2201规定的方法测定。5.2.9指纹图谱测定照附录B及《中华人民共和国药典》四部通则0512规定的方法测定。5.2.10特征图谱测定照附录C及《中华人民共和国药典》四部通则0512规定的方法测定。5.2.11鲁斯可皂苷元含量测定照《中华人民共和国药典》一部麦冬项下含量测定项规定的方法测定。5.3外源性污染物5.3.1农药残留量测定照《中华人民共和国药典四部通则2341规定的方法测定。5.3.2二氧化硫残留量测定照《中华人民共和国药典》四部通则2331规定的方法测定。5.3.3重金属及有害元素测定照《中华人民共和国药典》四部通则2321规定的方法测定。5.3.4多效唑残留量测定照附录D及《中华人民共和国药典》四部通则0512、0431规定的方法测定。6检验规则6.1抽样方法照《中华人民共和国药典》四部附录0211规定的方法执行。6.2判定规则检验结果全部符合本文件要求时，判该批产品为合格；检验结果中如出现不合格项时，开展不合格原因调查，根据调查结果，如认为不合格是取样或测定等原因，可从原批产品中加倍抽样进行复验，以复验结果为准。7标志、包装、运输和贮存6T/TPPA0008-20247.1标志包装上应标注品名、执行标准、规格、生产日期、产品批号、保质期、贮藏、生产企业、生产地址、联系方式等内容。7.2包装包装材料应选择无毒、无害、安全，符合国家卫生要求的材料包装。包装规格按合同要求执行。7.3运输运输工具应清洁、干燥、无异味；运输时应防雨、防潮、防暴晒；严禁与有毒、有害、易污染的货物混装、混运。7.4贮存置阴凉干燥处，防潮。7T/TPPA0008-2024（规范性）鉴别3DNA条形码分子鉴定方法A.1材料与设备A.1.1试剂试药a）无水乙醇：分析纯。b）Tris：分析纯。c）盐酸：分析纯。d）EDTA：分析纯。e）氢氧化钠：分析纯。f）氯化钠：分析纯。g）PVP-30：分析纯。h）β-巯基乙醇：分析纯。i）CTAB：分析纯。j）氯仿：分析纯。k）异戊醇：分析纯。l）乙酸钠：分析纯。A.1.2设备a）电子分析天平。b）烘箱。c）离心机。e）PCR仪。f）凝胶成像仪或紫外透射仪。A.2检测方法A.2.1溶液的配制A.2.1.175%乙醇的配制取无水乙醇75mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。A.2.1.270%乙醇的配制取无水乙醇70mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。A.2.1.30.5mol•L-1EDTA溶液的配制8T/TPPA0008-2024取EDTA14.6g，置烧杯中，加适量水使溶解，用氢氧化钠调节pH值至8.0，转移至100mL量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，于121℃高温压灭菌15分钟，即得。A.2.1.41mol•L-1Tris-盐酸溶液的配制取Tris6g，置烧杯中，加适量水使溶解，用浓盐酸调节pH值至8.0，转移至50mL量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，于121℃高温压灭菌15分钟，即得。A.2.1.57mmol•L-1氯化钠溶液的配制取氯化钠0.04g，置100mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，于121℃高温压灭菌15分钟，即得。A.2.1.6核分离液的配制取PVP-3010g，置500mL量瓶中，加水使溶解，加1mol·L-1Tris-盐酸溶液50mL、0.5mol·L-1EDTA溶液20mL、7mmol·L-1氯化钠溶液50mL，用水定容至刻度，摇匀，于121℃高温压灭菌15分钟。放冷后，加β-巯基乙醇2mL，摇匀，即得。A.2.1.7CTAB提取液的配制取CTAB10g、氯化钠41g，置500mL量瓶中，加水使溶解，加入1mol·L-1Tris-盐酸溶液50mL、0.5mol·L-1EDTA溶液25mL，于60℃水浴溶解，用水定容至刻度，摇匀，于121℃高温压灭菌15分钟，即得。A.2.1.8CTAB-氯化钠溶液的配制取氯化钠4.1g，置100mL量瓶中，加水使溶解，加CTAB10g，于60℃水浴溶解，用水定容至刻度，摇匀，于121℃高温压灭菌15分钟，即得。A.2.1.9乙酸钠溶液的配制取乙酸钠24.6g，置100mL量瓶中，加水85mL使溶解，调节pH值至5.2，用水定容至刻度，摇匀，于121℃高温压灭菌15分钟，即得。A.2.2供试品处理取本品约2g，除杂，75%乙醇擦拭表面后晾干，剪碎后，于45℃烘干2小时，研磨成粉末状备用。A.2.3DNA提取取粉末100mg，置2mL离心管中，加入核分离液1.5mL，震荡混匀，静置10分钟，离心（转速为3500r·min-1）5分钟，弃去上清液；再加入CTAB提取液800μL，震荡混匀，65℃水浴加热4小时（期间颠倒混匀），离心（转速为12000r·min-1）3分钟，吸取上清液（约800μL）置另一2mL离心管中；加入1/10体积的CTAB-氯化钠溶液（约80μL）、等体积的氯仿-异戊醇（体积比24:1）溶液（约800μL），颠倒混匀，离心（转速为12000r·min-1）3分钟，吸取上清液（约600μL）置另一2mL离心管中；加入等体积的氯仿-异戊醇（体积比24:1）溶液（约600μL），颠倒混匀，离9T/TPPA0008-2024心（转速为12000r·min-1）3分钟，吸取上清液（约400μL）置另一2mL离心管中；加入1/2体积的乙酸钠溶液（约200μL）、2倍体积的-20℃预冷的无水乙醇（约800μL），混匀，于-20℃静置15分钟，离心（转速为12000r·min-1）3分钟，弃去上清液；加入70%乙醇700μL，混匀，离心（转速为12000r·min-1）3分钟，弃去上清液；再加入无水乙醇700μL，混匀，离心（转速为12000r·min-1）3分钟，弃去上清液；将沉淀自然晾干，加入重蒸水50μL，溶解，作为供试品溶液。A.2.4PCR扩增鉴别引物：5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3′和5′-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3′。PCR反应体系：在200μL离心管中进行，反应总体积为25μL，反应体系包括2*TaqPCRMasterMix12.5μL，鉴别引物（2.5μmol·L-1）各1.00μL，重蒸水6.50μL，模板4.00μL。将离心管置PCR仪，PCR延伸10分钟。置4℃冰箱中备用。A.2.5电泳检测照琼脂糖凝胶电泳法（《中华人民共和国药典》四部通则0541），胶浓度为1%，胶中加入核酸凝胶染色剂GelRed；以D2000作为DNA分子量标记，供试品PCR反应溶液的上样量为5μL，DNA分子量标记上样量为10μL（0.5μg·μL-1），进行电泳检测。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。供试品凝胶电泳图谱中，在400bp～600bp间应有单一DNA条带，空白对照无条带。A.2.6测序进行PCR未纯化产物测序。A.2.7真伪鉴定将获得的序列，与“国家药品管理部门认可的中药材DNA条形码标准序列”进行比对。正品所查询序列最接近的物种应为麦冬。T/TPPA0008-2024（规范性）指纹图谱测定方法B.1材料与设备B.1.1试剂试药a）甲基麦冬二氢高异黄酮A对照品。b）乙腈：色谱纯。c）磷酸：色谱纯。d）甲醇：色谱纯。e）乙醇：色谱纯。f）氢氧化钠：分析纯。B.1.2设备a）电子分析天平。b）高效液相色谱仪（紫外检测器）。B.2检测方法B.2.1溶液的配制B.2.1.10.05%磷酸溶液的配制取磷酸0.5mL，置1000mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。B.2.1.2稀释溶剂的配制取乙腈50mL，置100mL量瓶中，用0.05%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。B.2.1.330%甲醇溶液的配制取甲醇30mL，置100mL量瓶中，用水至稀释至刻度，摇匀，即得。B.2.1.40.5mol·L-1氢氧化钠的30%甲醇溶液的配制取氢氧化钠20g，置1000mL量瓶中，用30%甲醇溶液溶解并定容至刻度，摇匀，即得。B.2.2色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为1.0mL·min-1；柱温30℃；检测波长为285nm；理论板数按甲基麦冬二氢高异黄酮A峰计算应不低于10000。表B.1流动相梯度洗脱表0T/TPPA0008-2024表B.1流动相梯度洗脱表(续)B.2.3对照品溶液制备取甲基麦冬二氢高异黄酮A对照品适量，精密称定，加稀释溶剂制成每1mL含3μg的溶液，即得。B.2.4供试品溶液制备取本品粉末（过三号筛）约5g，加入乙醇25mL，冰浴超声处理2小时，滤过，精密量取续滤液7.5mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，通过预处理好的SPE小柱（依次加入甲醇10mL、水10mL、30%甲醇10mL进行冲洗），流速约1mL·min-1，弃去流出液；以0.5mol·L-1氢氧化钠的30%甲醇溶液4mL洗脱，弃去洗脱液；再用30%甲醇溶液5mL洗脱，弃去洗脱液；加入甲醇洗脱，收集洗脱液，置25mL量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，即得。B.2.5测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。B.3结果计算供试品指纹图谱与同法制备的标准指纹图谱（图B.1）比较，并经计算机模拟相似度计算软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（中国药典会出版）计算相似度。11图B.1麦冬（供注射用）指纹图谱示意图T/TPPA0008-2024（规范性）特征图谱测定方法C.1材料与设备C.1.1试剂试药a）果糖对照品。b）乙腈：色谱纯。C.1.2设备a）电子分析天平。b）高效液相色谱仪（蒸发光散射检测器）。C.2检测方法C.2.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表中的规定进行梯度增益1；理论板数按果糖峰计算应不低于8000。表C.1流动相梯度洗脱表04C.2.2对照品参照物溶液制备取果糖对照品适量，精密称定，加水制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。C.2.3供试品溶液制备取本品粉末（过三号筛）约0.5g，加入水100mL，超声处理0.5小时，滤过，取续滤液，即得。C.2.4测定法分别精密吸取对照品参照物溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。C.3结果判定供试品色谱中应呈现3个特征峰（图C.1），峰1应与果糖对照品参照物峰保留时间相一致。以果糖峰为S峰，计算特征峰1号～3号与S峰的相对保留时间，其中峰2、峰3的相对保留时间应在规定值的±10%之内。规定值为：1.26（峰2）、1.65（峰3）。T/TPPA0008-2024局部放大图：1（S）3231（S）图C.1麦冬（供注射用）特征图谱示意图T/TPPA0008-2024（规范性）多效唑残留量测定方法D.1材料与设备D.1.1试剂试药a）多效唑对照品。b）甲醇：质谱级。c）甲酸：质谱级。D.1.2设备a）电子分析天平。b）超高效液相色谱-质谱联用仪。D.2检测方法D.2.1溶液的配制D.2.1.10.1%甲酸溶液的配制取甲酸1mL，置1000mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。D.2.2色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为0.25mL·min-1；采用三重四级杆质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）294.1→70.1，294.1→125.1离子对进行监测。以甲醇为表D.1流动相梯度洗脱表04555D.2.3对照品溶液制备取多效唑对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1mL，