重组蛋白药物研发工程师考试试卷及答案

重组蛋白药物研发工程师考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.重组蛋白常用原核表达系统是______。2.His标签蛋白常用的亲和层析配体是______。3.真核表达系统中，常用于单抗的是______细胞。4.CHO细胞特有的翻译后修饰是______糖基化。5.按分子大小分离蛋白的方法是______层析。6.限制酶切割产生的末端包括粘性末端和______末端。7.重组蛋白活性检测常用细胞实验是______法。8.细胞培养溶氧控制范围通常是______%。9.重组蛋白QC中检测内毒素的试剂是______。10.冻干工艺主要提高蛋白的______。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.不能进行真核蛋白糖基化的表达系统是：A.大肠杆菌B.毕赤酵母C.CHO细胞D.昆虫细胞2.载体构建第一步是：A.酶切载体B.连接目的基因C.转化感受态D.测序验证3.洗脱His标签蛋白常用试剂是：A.咪唑B.EDTAC.SDSD.尿素4.重组蛋白表达量低的常见原因不包括：A.密码子偏好B.启动子弱C.目的基因无突变D.宿主不兼容5.蛋白复性常用方法是：A.稀释法B.离心法C.过滤法D.沉淀法6.QC中检测蛋白纯度首选：A.SEC-HPLCB.考马斯亮蓝染色C.质谱D.电泳7.CHO细胞常用培养基是：A.DMEM/F12B.LBC.TBD.YPD8.药物上市前需完成的临床试验阶段是：A.I期B.II期C.III期D.生物等效性9.基因定点整合工具是：A.CRISPR+同源重组B.限制酶C.DNA连接酶D.逆转录酶10.重组蛋白药物不用于：A.治疗B.诊断C.疫苗D.细胞培养三、多项选择题（共10题，每题2分，多选/少选不得分）1.重组蛋白表达系统包括：A.大肠杆菌B.毕赤酵母C.CHO细胞D.昆虫细胞2.蛋白纯化常用层析方法：A.亲和层析B.离子交换C.凝胶过滤D.疏水层析3.蛋白翻译后修饰类型：A.糖基化B.磷酸化C.泛素化D.乙酰化4.载体必需元件：A.启动子B.终止子C.筛选标记D.复制原点5.细胞培养控制参数：A.温度B.pHC.溶氧D.搅拌速度6.重组蛋白QC检测项目：A.纯度B.活性C.内毒素D.宿主蛋白残留7.影响蛋白折叠的因素：A.温度B.pHC.离子强度D.分子伴侣8.药物研发阶段包括：A.靶标发现B.先导优化C.临床前研究D.临床试验9.限制酶特点：A.识别特定序列B.切割磷酸二酯键C.产生粘性/平末端D.只切原核DNA10.冻干工艺作用：A.提高稳定性B.延长保质期C.便于运输D.增加活性四、判断题（共10题，每题2分，√/×）1.大肠杆菌可进行复杂糖基化。（）2.His标签用Ni-NTA层析纯化。（）3.蛋白活性与纯度无关。（）4.CHO细胞只能贴壁培养。（）5.CRISPR仅用于基因敲除。（）6.复性是去除变性剂恢复天然构象。（）7.内毒素用鲎试剂检测。（）8.临床I期评价疗效。（）9.启动子决定表达水平。（）10.重组蛋白可用于诊断治疗。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述2种重组蛋白表达系统的优缺点。2.简述2种蛋白纯度检测方法及原理。3.简述载体构建的基本步骤。4.简述CHO细胞常见污染及防控措施。六、讨论题（共2题，每题5分）1.如何提高重组蛋白的表达量？2.临床前研究中如何评价重组蛋白的安全性？---答案部分一、填空题答案1.大肠杆菌2.Ni-NTA3.CHO4.复杂（N-连接）5.凝胶过滤（分子筛）6.平7.MTT（细胞增殖抑制）8.40-609.鲎试剂10.稳定性二、单项选择题答案1.A2.A3.A4.C5.A6.A7.A8.C9.A10.D三、多项选择题答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABC10.ABC四、判断题答案1.×2.√3.×4.×5.×6.√7.√8.×9.√10.√五、简答题答案1.大肠杆菌：优点→生长快、成本低；缺点→无真核修饰、易形成包涵体。CHO细胞：优点→能复杂糖基化、表达量高；缺点→培养复杂、成本高。2.SEC-HPLC：基于分子大小分离，通过保留时间判断纯度；RP-HPLC：基于疏水性差异，乙腈梯度洗脱分离。3.①获取目的基因（PCR/合成）；②酶切载体+目的基因；③连接（T4酶）；④转化感受态；⑤筛选阳性克隆（抗性+测序）。4.污染→细菌、真菌、支原体；防控→无菌操作、培养基灭菌、定期支原体检测（PCR）、加抗生素、环境消毒。六、讨论题答案1.①优化表达系统：选合适宿主（如CHO对复杂蛋白）、调整密码子偏好；②优化载体：增强启动子（CMV）、加增强子；③优化培养：调整温度/pH/溶氧、补料培养；④融合标签：His/SUMO标签提高溶解度；⑤基因编辑：过表达分子伴侣（