控藻剂对浮游藻田间药效试验准则征求意见稿

ICS65.100.01T/ZNX004—2021农药田间药效试验准则控藻剂防治浮游藻类田间药效试验准则AlgaecideagainstplanktonicGuidelinesforfieldefficacytrial(征求意见稿)2021-01-07发布浙江省农药工业协会  发布2021-01-15实施T/ZNX004-2021范围本文件规定了控藻剂防治田间蓝藻等为代表的浮游藻药效小区试验的试验条件、试验设计、调查方法、结果。本文件适用于控藻剂防治田间浮游藻的田间药效小区试验及药效评价，适用于稻田、池塘、水库、水产养殖场、湖泊等浮游藻易爆发的静态水体。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T17980.138-2004农药田间药效试验准则(二)第138部分:除草剂防治水生杂草GB/T12763.6-2007海洋调查规范第6部分：海洋生物调查GB/T17378.7-2007海洋监测规范第7部分：近海污染生态调查和生物监测NY/T1464.1～1464.67农药田间药效试验准则DB32/T4005-2020淡水浮游藻类监测技术规范术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1控藻剂Algaecides用于控制藻类种群数量的生物和化学用品。3.2浮游藻Planktonic水中营浮游生活方式的藻类植物，易于在风和水流的作用下作被动运动，不包括细菌(蓝藻除外)和其他植物，淡水中常见浮游藻类主要包括蓝藻(Cyanophyta)、绿藻(Chlorophyta)、硅藻(Bacillariophyta)、裸藻(Euglenophyta)、甲藻(Pyrrophyta)、金藻(Chrysophyta)、黄藻(Xanthophyta)和隐藻(Cryptophyta)等门类。3.3非靶标生物Non-targetOrganism与靶标生物共存的生物种群。3.4种群数量PopulationSize指生活在某一特定区的同种生物数量的总和。试验条件试验对象的选择包括蓝藻(Cyanophyta)、绿藻(Chlorophyta)、硅藻(Bacillariophyta)、裸藻(Euglenophyta)、甲藻(Pyrrophyta)、金藻(Chrysophyta)、黄藻(Xanthophyta)和隐藻(Cryptophyta)等在水体中可形成水华危害的浮游藻藻类。试验区域应有有代表性的浮游藻群落，密度应符合试验要求，且分布均匀，浮游藻处于水华爆发期前期。试验设计和安排处理试验药剂注明试验药剂的商品名／代号、中文名、通用名、剂型、含量和生产厂家。试验药剂处理设高、中、低及中量的倍量四个剂量（设倍量是为了评价试验药剂对水生植物、水生动物的安全性），或依据协议（试验委托方和试验承担方签订的协议）规定的用药量。对照药剂对照药剂应是已登记注册，并在生产中证明有较好药效的产品，一般情况下其剂型和作用方式应与试验药剂相近。特殊情况可视目的而定。设空白对照。如果试验药剂为混剂时，还应设混剂中的各单剂作对照。小区安排小区排列试验药剂的不同剂量、不同处理时间、对照药剂、空白对照等小区应随机排列。特殊情况下可以邻近对照排列。小区划分和重复次数小区划分：农田、池塘、水库、湖泊、水产养殖场等封闭场所，整块水体作为一个处理小区，或将水体进行物理隔离，每个隔离区域作为一个小区。每个小区水的平均水深≥20cm。重复次数：至少4次重复。施药方式施药方法施药应与科学的农业实践相一致，通常按标签要求或合同规定进行，常用喷雾、药土（沙、肥）、定量点滴、甩施等方法。施药器械类型应选择生产常用器械，保证药量准确均匀分布，或准确定向喷到应该受药的地方。影响药效、安全性、持效期和选择性的因素（如机具、工作压力、喷头类型）都应记录下来，同时还应记录造成剂量偏差超过±10％的因素。施药的时间和次数按标签或协议要求进行，用药时间与浮游藻、水生植物、水生动物等的生育阶段有关，用药时，浮游藻、水生植物、水生动物的生长状态（萌芽、生育期等）都应记录下来。用药时间，如果在标签或协议上没有特别注明，应根据试验目的和试验药剂的特点进行，同一药剂可一次施用或分次用药，但应记录用药次数和具体时间。药剂用量和用水量按标签上的用药量和用水量进行试验。用水量在标签或协议上没有说明时，可根据机具类型、作用方式，并结合当地经验进行。药剂用量以有效成分g/m3表示，用水量以L/m3表示。特殊情况视试验目的而定。防治病虫和非靶标所用农药/兽药的资料要求如有需要使用其他农药/兽药时，应与试验药剂、对照农药分开使用。应对所有小区进行均匀处理，尽可能减少对试验的干扰，给出准确的使用数据（如药剂名称、用药时间、用药量等）。调查、记录和测量方法气象、水体资料气象资料整个试验期间的气象资料应从试验地或最近的气象站获得，如降雨（降雨类型、降雨量以mm表示）、温度（日平均、最高和最低温度，以℃表示）、风力、阴晴、光照和相对湿度等资料，特别是施药当日及前后10天的气象资料。整个试验时期影响试验结果的恶劣气候因素，如严重或长期干旱、大雨、冰雹等均须记录。水体资料在每个小区设置3-4个监测点，分投药期间及停止投药后两个阶段，对水域进行水质监测，监测项目包括水温、总磷、总氮、氨氮、叶绿素、水温、浊度、pH、硬度等指标。水域管理记录试验水域、水体交换、开沟、肥水、喂饲等管理资料。调查方法、时间和次数浮游藻调查采样记录小区的靶标浮游藻种群量，药后1、3、5、7、15天采用五点取样法对每小区进行调查，采集浮游藻类样品时，需根据采样点位的水深设置采样层次。水深<5m或混合均匀的水体，不分层，在水面下0.5m处采集；水深为5m～10m时，分别在水面下0.5m处和透光层(深度以3倍透明度计)底部采集；水深>10m时，分别在水面下0.5m处、1/2透光层和透光层底部采集。分层采样按照由浅到深的顺序，使用采水器采集1L～5L水样。样品处理将各层次采集的样品倒入事先准备的清洁水桶，充分混匀后，取1L～5L水样装入样品瓶。调查计数取样后通过血球计数板记录各个取样点靶标浮游藻细胞数，每个点至少重复计数2次。数据计算种群数量防效的计算公式如下：…………..公式1式中：E——防效，单位为%；CK——对照区种群数量，单位为个/mL；Pt——处理区种群数量，单位为个/mL。叶绿素a含量调查试剂配制a）丙酮溶液（9+1）：量取900mL丙酮（CH3COCH3）与100mL水混合，保存于棕色试剂瓶中。b）碳酸镁悬浮液（10g/L）：称取1g碳酸镁（MgCO3），加水至100mL，搅匀，盛试剂瓶中待用。仪器设备a）分光光度计：波长必须准确，波带宽度≤2nm，消光值可读到0.001；b）玻璃纤维滤膜：直径为47mm的WhatmanGF/C或孔径为0.45μm的纤维素酯微孔滤膜；c）抽滤装置；d）贮养干燥器、离心机、具塞离心管、冰箱。采样同；样品制备量取200ml~500mL水样，加2mL碳酸镁悬浮液(见)，混匀，用玻璃纤维滤膜(WhatmanGF/C，直径25mm)或孔径为0.45um的纤维素酯微孔滤膜过滤，过滤负压不得超过50kPa。样品提取将过滤了样品的滤膜放入具塞离心管，加入10ml.丙酮溶液(见)，摇荡，放置冰箱冷藏室中14h~24h，提取叶绿素a。若滤得的样品不能及时提取,应将该滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸，置于含硅胶的干燥器内，贮存在低于1℃的冰箱中。样品离心离心速度：（3000～4000）r/min；离心时间10min。样品测定小心将离心的上清液注入测定池。用丙酮溶液(见)作参比，分别在750nm、664nm、647nm、630nm波长处测定吸光值。其中750nm处的测定，用以校正提取液的浊度,当1cm测定池光程的吸光值超过0.005时，提取液应重新离心。数据计算分别把在波长664nm、647nm、630nm上测得的吸光值减去750nm下的吸光值,得到校正后吸光值E664、E647、E630。再按公式2计算叶绿素a含量。叶绿素a含量的计算公式如下：…公式2式中：Ca——藻类叶绿素a含量，单位为µg/L；E664、E647、E630——各波长下吸光度校正值；v——抽提后定容体积，单位为mL；V——抽滤的样品体积，单位为mL；L——比色皿光程，单位cm。防效公式如下：公式3式中:E——抑制率，单位为%；Ca1——对照的叶绿素a含量，单位为µg/L；Ca2——处理的叶绿素a含量，单位为µg/L。生物调查药后1、3、5、7、15、30天对药效试验小区中水稻等农作物、水生植物、水生动物药害类型、损失程度也应记载，以提供有益的补充资料。药害记载如下：a）如果药害可以计数或测量时，则用绝对值表示。b）其他情况下，则记录药害频率和程度。可以用两种方法估算：1）参照一个分级标准，对每个处理小区的药害分级打分；2）处理小区同不施药区相比较，估算药害相对百分率。在所有情况下，农作物、水生植物、水生动物所出现的药害都应准确描述（抑制生长、褪绿、死亡、畸形等）。如需更详细的资料，可参考水生植物药害评价准则。水生植物药害不仅与试验药剂有关，还与其他因素影响有关，而且最终要取决于对照小区的情况。重要的是还要考虑引起药害的逆境条件之间可能的相互作用。这些逆境条件包括不适当的栽培方法、饲养方法、倒伏、虫害、病害、持续高温和冻害、环境污染等。如果试验水体能