CN114778839B 基于eATRP信号放大策略的CEA电化学检测试剂盒及检测方法 （河南中医药大学）

PhotoelectrochemicalAptasensingforCancerBiomarkerBasedonNaYF4:Yb,Tm@TiO2UpconverssupportedAgNPsforsensitibiofluids.JMolRecognit.202基于eATRP信号放大策略的CEA电化学检测本发明公开了基于eATRP信号放大策略的CEA电化学检测试剂盒及检测方法，该试剂盒主发明以FMMA为电化学信号单元，采用eATRP作为信号放大策略，与大分子聚合物PEI实现级联信过适配体-抗原的特异性识别逐步形成Apt1-CEA-Apt2的三明治夹心结构。PEI预先通过酰胺键与Apt2连接，PEI上的氨基为eATRP引发剂BMP引发剂BMP上的溴基在电极表面诱导eATRP反应21DNA.BiosensorsandBioelectronics.2019,31.基于eATRP信号放大策略的CEA电化学检测试剂盒，其特征在于，包括以下原料：62)6-ATACCAGCTTATTCAATT-3’2SO4溶液浓度为2mM，PEI溶液浓度为2mg/mL，BMP溶液浓度为2mM，KPF6溶液浓度为04.一种权利要求1-3任一项所述的试剂盒在制备检测CEA产4子转移自由基聚合(ATRP)、开环聚合(ROP)、可逆加成-断裂链转移聚合(RAFT)、点击5[0008]基于eATRP信号放大策略的CEA电化学检测试剂盒，包括以下原料：Apt1、Apt2、6SO4)6‑ATACCAGCTTATTCAATT‑3’电极在新配制的水虎鱼酸溶液中浸泡15min，并重复上述清洗步骤，清洗结束后取出，在6电化学方法i-t下进行电催化聚合，信号单元二茂铁甲醇异丁烯酸脂(FMMA)被聚合到电极然后R·与FMMA反应生成链自由基R-FMMA。R-FMMA与CuIIBr/Me6TREN+反应生成目标产物R-通过适配体-抗原的特异性识别逐步形成Apt1-CEA-Apt2的三明治夹心结构。PEI预先通过应溶液中，引发剂BMP上的溴基在电极表面诱导eATRP反应发生，大量的电化学活性物质7[0045]癌胚抗原(CEA)和所有合成的寡核苷酸，包括CEA1(Apt1：5’‑SH‑(CH2)6‑IDNO.2)均由生工生物工程(上海)股份有限公巯基‑1‑己醇(MCH)、聚乙烯亚胺(PEI)、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)、2‑溴‑2‑甲基丙酸(BMP)、三(2‑二甲氨基乙基)胺2SO4[0055]③将10μL待检测溶液(含CEA)滴加至步骤②的电极上，在37℃条件下反应1h，洗[0056]④将10μL配制好的Apt2‑PEI溶液(1μM)滴加到步骤③的电极上，在37℃条件下反8(2μM)；然后加入等体积的PEI溶液(2mg/mL)混合，放置于37℃恒温摇床中反应1h，得到[0065]②将1.8mLDMSO、0.1mLCuBr2/Me6TREN溶液、0.1mLFMMA溶液(10[0069]在1.0MKNO3溶液中用CV对新制备的电极用不同扫描速率进行表征，扫描速率为[0070]EIS能够对电极构建过程中电极表面的改性情况进行表征，在含有0.1MKNO3的5mM[Fe(CN)6]3‑/4‑电解质溶液中，逐步收集同一电极在连续制备过程中的EIS谱图。在从图2C中可以看出，在阻抗谱中裸金电极(曲线a)的Rct只有281Ω,说明电极表面是干净9[0072]通过原子力显微镜(AFM)和水接触角(WCA)对电极表面进行[0073]由于在电极表面修饰材料后的亲水性会发生改变，WCA可以用来研究修饰后金电由Apt1上的亲水性基团引起的。用MCH封闭表面未结合位点后，WCA变化不大，仅下降到合物链接枝到电极上，由于聚合物中含有亲水性的甲基丙烯酸酯，电极的接触角下降到电流强度呈现良好的线性关系，线性回归方程为：I(μA)＝1.1165lgCCEA+4.8054(R2=其它酶和蛋白质产生的信号存在明显差异，CY、CTnI、ALP的电流强度分别只占CEA的[0086]为了研究本发明在人血清中的抗干扰能力，分别检测不同浓度CEA在10％人血清