《人心脏类器官》

ICS07.080

CCSA40

团体标准

T/CSCBXXXX-2025

仅作意见征求使用，严禁复制传播！

人心脏类器官

HumanCardiacOrganoid

(征求意见稿)

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国细胞生物学学会发布

T/CSCBXXXX-2025

人心脏类器官

1范围

本文件规定了人心脏类器官的一般要求、技术要求、检测方法、检验规则、使用说明、

标签、运输和储存。

本文件适用于人多能干细胞来源的人心脏类器官的体外制备和检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期

的引用文件，仅该日期的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有

的修改单）适用于本文件。

中华人民共和国药典（2020年版三部）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1类器官organoid

由干细胞或前体细胞体外培养形成的，包含组织器官特异性的多种细胞，能自我更新，

具有特定器官关键结构和功能特性的三维（3D）立体培养物。

[来源：T/CSCB0023-2024,3.1]

3.2人心脏类器官humancardiacorganoid

由人多能干细胞体外分化组装获得的，具有心肌细胞和其它至少一种心脏非心肌细胞的

类器官，具有收缩和舒张功能。

3.3人心肌细胞humancardiomyocyte

含有丰富的肌原纤维、横纹和线粒体，具有兴奋性、传导性、自律性和收缩性的人类肌

性细胞，是组成心脏肌肉的主要细胞类群。

[来源：T/CSCB0007-2021,3.1,有修改]

3.4心脏非心肌细胞cardiacnonmyocyte

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心脏中除心肌细胞外的其他细胞类型，包括内皮细胞、成纤维细胞和平滑肌细胞等。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件（按字母顺序排列）。

cTnT：心肌肌钙蛋白T（CardiacTroponinT）

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

HBV：乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）

HCV：丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus）

HIV：人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）

HTLV：人类嗜T细胞病毒（HumanT-lymphotropicVirus）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

STR：短串联重复序列（ShortTandemRepeat）

TP：梅毒螺旋体（TreponemaPallidum）

5一般要求

5.1原材料

5.1.1原材料的获取及其在研究中的使用应符合国内认可的伦理和当地的法律法规。

5.1.2根据使用目的，人心脏类器官研究和生产组织应建立相应的供者评估标准。

5.2过程和信息管理

5.2.1应对人心脏类器官的原材料获取、制备、检测、运输和储存等过程中影响产品质量的关

键因素进行记录，并建立唯一标识，确保能够对过程进行溯源。

5.2.2应明确记录的最短保留时间，确保记录完整性和记录存储的安全性。

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6技术要求

6.1形态

应为三维立体囊球状培养物，可收缩和舒张，或内有空腔。

6.2染色体核型

应与供体核型一致。

6.3细胞组成

应包含cTnT阳性的心肌细胞和其它心脏非心肌细胞，且心肌细胞的数量占比应不低于

25%。

6.4功能指标

应自发或诱发有节律的收缩和舒张；应具有成周期性变化的钙离子信号。

6.5微生物

真菌、细菌、支原体、HBV、HCV、HIV、外源病毒因子等应为阴性。

6.6STR

应与供体STR一致。

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7检验方法

7.1形态

使用光学显微镜观察，同时利用组织切片进行H&E染色，参照附录A检验。

7.2染色体核型

按照《中华人民共和国药典（2020年版三部）》中“生物制品生产检定用动物细胞基质

制备及指令控制”检测。

7.3细胞组成

参照附录B检验。

7.4功能指标

使用光学显微镜观察收缩和舒张情况；参照附录C检验钙瞬变情况。

7.5微生物

7.5.1真菌及细菌

按照《中华人民共和国药典（2020年版三部）》中“1101无菌检查法”检测。

7.5.2支原体

按照《中华人民共和国药典（2020年版三部）》中“3301支原体检查法”检测。

7.5.3外源病毒因子

按照《中华人民共和国药典（2020年版三部）》中“3302外源病毒因子检查法”检测。

7.6STR

参照附录D检验。

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8使用说明

应至少包括以下内容：

a)产品名称；

b)细胞代次；

c)细胞数量；

d)生产日期；

e)生产批号；

f)生产组织；

g)储存条件；

h)运输条件；

i)联系方式；

j)使用方法；

k)执行标准号；

l)生产地址；

m)邮政编码；

n)注意事项。

注：根据用户需求，提供内毒素结果。

9标签

应至少包括以下内容：

a)名称；

b)代次；

c)数量；

d)生产批号；

e)生产组织；

f)生产日期。

10运输

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10.1根据人心脏类器官的使用要求，选择合适的运输方式和运输条件，保证人心脏类器官生

物学特性、安全性、稳定性和有效性。

10.2人心脏类器官的运输宜考虑但不限于人心脏类器官特性、承载人心脏类器官的容器、运

输路线、运输时间、运输条件、运输设备、运输方式、运输风险和保障措施等因素。

10.3运输条件的控制应包括但不限于温度范围、振荡、无污染、设备性能和适当的包装等。

10.4应根据用户要求提供相应的随行检验文件和技术指导文件。

10.5应在必要时检查运输中的包裹，保持适宜的运输温度。

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附录A

（资料性）

类器官组织结构检测（H&E染色法）

A.1仪器和设备

A.1.1石蜡包埋仪。

A.1.2石蜡切片机。

A.1.3光学显微镜。

A.2试剂

本方法所用试剂均为分析纯，除特别说明外，实验用水均为GB/T6682规定的一级水。

A.2.1石蜡切片制备试剂：按照相应要求配置石蜡包埋所需试剂，包括固定液、脱水液、石

蜡、脱蜡液、复水液、乙醇、二甲苯、中性树脂。

A.2.2H&E染色试剂：苏木精、伊红。

A.3检测步骤

A.3.1样品准备

用巴氏吸管吸取类器官，转移至离心管内，弃上清，用4%多聚甲醛固定，经脱水、透明

和包埋等步骤制成石蜡块。

A.3.2石蜡切片制作

经石蜡切片机切割成标准厚度，制成石蜡切片。

A.3.3H&E染色

经脱蜡和复水后，用苏木精染色，分化后冲水。再用伊红复染，经乙醇脱水和二甲苯透

明后，用中性树脂封片。

A.4结果分析

显微镜下观察细胞结构及是否有空腔。

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附录B

（资料性）

标志蛋白检测（流式细胞分析法）

B.1仪器和设备

B.1.1流式细胞仪。

B.1.2水平离心机。

B.1.3制冰机。

B.1.4电子天平。

B.2试剂

本方法所用试剂均为分析纯，除特别说明外，实验用水均为GB/T6682规定的一级水。

B.2.1磷酸盐缓冲液：pH7.4。

B.2.2多聚甲醛（PFA）：纯度95%以上。

B.2.3牛血清白蛋白（BSA）：纯度98%以上。

B.2.4聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX-100）。

B.2.5抗体。

B.2.6按照相应要求配制流式检测所需的液体：洗涤液、固定液、封闭通透液、抗体稀释液。

B.3样品保存

洗涤液和固定后的样品于2~8℃保存。固定液放入分装容器中，密封并标记，于﹣20℃

以下保存。相关抗体按说明书保存。

B.4检测步骤

B.4.1样品准备和固定

消化类器官，收集单细胞，250g，离心3min。弃上清，加适量固定液冰上放置10

min，然后用适量洗涤液洗涤3~5次，每次3~5min。

B.4.2封闭和通透

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用封闭通透液重悬细胞并把细胞分成两等份，分别作为实验组和同型对照组，冰上孵育

20min，然后用洗涤液清洗一遍。

B.4.3抗体孵育

按照抗体说明书进行稀释使用。

B.4.4过滤上机

用洗涤液重悬细胞，然后通过40μm滤网转移到流式管中，按流式细胞仪应用手册上机

检测。

B.4.5圈门设定原则

首先根据颗粒度和透光性设门圈出目标细胞分群1，排除死细胞和其他杂细胞，然后根

据同型对照组荧光强度，在分群1的基础上画出阳性细胞群2，排除没有被荧光抗体标记的

阴性细胞。抗体同型对照作为阴性对照。

B.5结果分析

得到的检测结果用软件综合分析，具体参考其软件使用说明。

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附录C

（资料性）

钙瞬变检测（钙离子染色法）

C.1仪器和设备

C.1.1离心机。

C.1.2细胞培养箱。

C.1.3激光共聚焦显微镜。

C.2试剂

本方法所用试剂均为分析纯，除特别说明外，实验用水均为GB/T6682规定的一级水。

C.2.1Fluo-4AM（钙离子荧光探针）。

C.2.2Hank's平衡盐溶液（HBSS）。

C.3检测步骤

C.3.1类器官样品的准备

将人心脏类器官预培养于玻底皿中。

C.3.2Fluo-4AM与类器官孵育

按照Fluo-4AM说明书进行。

C.3.3类器官检测

用激光共聚焦显微镜检测类器官，激发波长488nm左右，发射波长512~520nm。

C.4结果分析

用ΔF/F0评价钙瞬变相对荧光变化，得到的检测结果用软件综合分析，具体参考其软件

使用说明。

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附录D

（资料性）

STR鉴定

D.1仪器和设备

D.1.1离心机。

D.1.2PCR仪。

D.1.3毛细管电泳仪。

D.1.4微量紫外分光光度计。

D.2试剂

D.2.1细胞DNA抽提试剂盒。

D.2.2STR细胞鉴定试剂盒。

D.3样品保存

样品制备好后，于-80℃以下保存。

D.4检测步骤

D.4.1样品制备

离心收集类器官，弃上清。

D.4.2DNA提取

D.4.2.1按细胞DNA抽提试剂盒说明书对类器官和原干细胞DNA进行提取。

D.4.2.2微量紫外分光光度计检测提取后的DNA吸光度A260/A280的比值在1.8~2.0之间。

D.4.2.3DNA样本要求：DNA体积≥20μL，浓度≥50ng/μL。

D.4.3PCR扩增

D.4.3.1使用STR细胞鉴定试剂盒说明书对STR位点进行扩增。

D.4.3.2设置阴性对照组、样本检测组和阳性对照组。阴性对照组采用无菌水位模板进行

PCR扩增，样本检测组以类器官和原始干细胞样本提取的DNA为模板进行PCR扩增，阳性

对照组采用DNA模板进行扩增。

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D.4.3.3采用琼脂糖凝胶电泳确认PCR扩增产物、阴性对照组和阳性对照组。阴性对照组

无目的条带，阳性对照组有清晰的目的条带。

D.4.4STR基因分型检测

使用毛细管电泳基因分析仪对PCR扩增产物进行检测，并得到STR遗传图谱数据。阳性

对照组有清晰的目的条带。类器官与原始干细胞的扩增条带应该一致。

D.5结果分析

D.5.1当STR位点的等位基因含有相同重复次数时，图谱仅出现1个等位基因峰；当含有

不同重复次数时，图谱会出现2个等位基因峰。且当阴性对照组无等位基因峰出现，阳性对

照组检测结果与其标准基因分型数据一致时视为有效检测。

D.5.2检测有效的前提下，若受检样本STR位点出现2个以上的等位基因峰，经过重复实

验排除引物结合区突变等干扰因素后，判定受检样本存在交叉污染。

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》

的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任，

本文件由中国细胞生物学学会标准工作委员会提出。

本文件由中国细胞生物学学会归口。

本文件起草单位：苏州大学、苏州大学、中国科学院动物研究所、北京大学、深圳湾实

验室、复旦大学、北京阜外医院

本文件主要起草人：

仅作意见征求使用，严禁复制传播！

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人心脏类器官

1范围

本文件规定了人心脏类器官的一般要求、技术要求、检测方法、检验规则、使用说明、

标签、运输和储存。

本文件适用于人多能干细胞来源的人心脏类器官的体外制备和检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期

的引用文件，仅该日期的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有

的修改单）适用于本文件。

中华人民共和国药典（2020年版三部）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1类器官organoid

由干细胞或前体细胞体外培养形成的，包含组织器官特异性的多种细胞，能自我更新，

具有特定器官关键结构和功能特性的三维（3D）立体培养物。

[来源：T/CSCB0023-2024,3.1]

3.2人心脏类器官humancardiac