CN114901806B 细胞群以及其取得方法 （学校法人顺天堂）

2022.06.23PCT/JP2020/0390032020.10.08WO2021/131261JA2021.07.01JP2011160661A,201WO2016068217A1,2016.05WO2019146131A1,2019.0以及血管内皮细胞生长因子的4种以下的因子、2生成素以及5～500ng/mL的血管内皮细胞生长血清以0.5容量％以上10容量％以下的浓度而被包含在培养CD206(+)中属于CXCR4(+)的CD206(+)中属于CXCR4(+)的在包含血清以及因子且所述因子选自：10～1000ng/mL的干细胞因子于CCR2()的细胞为95％以上，血清以0.5容量％以上10容量％以下的浓度而被包含在培养~6中任一项所述的细胞群。13.权利要求1～6中任一项所述的细胞群在制备缺血性疾病、炎症性疾病或难治疗性34分化动态解析方法，明确了内皮细胞样大群落(2)。且已公开了从骨髓单个核细胞高效地扩增CD34和/或CD133阳性细胞的方法(专利文献管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor；VEGF)的5种因子的无血清5[0012]本发明以提供一种细胞群为目的。本发明的细胞群是通过在包含选自干细胞因子的4种以下的因子、以及血清的培养基中培养来源于骨髓、脐带血或外周血的单个核细6[0033][方式17]根据方式14～16中任一项所述的治疗用组合物，其促进血管新生和/或[0034][图1]图1表示关于通过健康人的外周血而制备的RE_01的构成细胞成分的、基于[0035][图2]图2表示关于通过与图1不同的其他健康人的外周血而制备的RE_01的构成[0036][图3]图3表示关于通过53岁糖尿病女性患者的外周血而制备的RE_01的构成细胞[0038][图5]图5表示关于通过重症下肢缺血(criticallimbischemia)的患者的外周7[0045]干细胞因子(SCF)是由248个氨基酸构成的分子量约为30000的糖蛋白。由于选择性剪接而存在可溶型和膜结合型，用于取得所述细胞群的SCF只要对单个核细胞的培养有[0046]白细胞介素6(IL_6)是作为诱导B细胞向抗体产生细胞的最终分化的因子而被分[0047]FMS样酪氨酸激酶3配体(FL)作为在初期造血控制中起到重要作用的受体型酪氨[0048]血小板生成素(TPO)是造血系细胞因子的一种，已知其在由造血干细胞形成巨核个核细胞的培养有用就无特别限定，在人类重组TPO的情况下，不受限定地，例如为1~[0049]血管内皮细胞生长因子(VEGF)是对血管内皮祖细胞(EPC)发挥特异性作用的生长8使用的VEGF的种类而不同，只要对单个核细胞的培养有用就无特别限定。在人类重组[0050]就单个核细胞的培养中使用的培养培养基中添加的各种[0055]单个核细胞培养通过将含有单个核细胞的细胞悬浮液添加至包含所述因子以及29样酪氨酸激酶3配体、血小板生成素以及血管内皮细胞生长因子的因子中的4种以下的因血小板生成素以及约40～60ng/ml的血管内皮细胞生长因血小板生成素以及血管内皮细胞生长因子的4种以下的因子、以及血清的培养基中培养来新生和/或创伤治愈进行治疗的疾病。作为“能够通过血管新生和/或创伤治愈治疗的疾激光多普勒成像分析的值来进行。此外，坏死改善率可以以保肢分数(Limbsalvage[0084]所述治疗用组合物的使用方式无特别限定。可以为作为标)采血管内的凝胶屏障上方的部分回收至离心管中，以少量的EDTA_PBS清洗凝胶屏障上而言，为了除去混入的红细胞而在ACK溶血缓冲液(15mLEDTA.Na22O[0101]将(1)中回收的单个核细胞悬浮至1mL的增殖培养基(添加有50ng/mLVEGF165，20ng/mLTPO，100ng/mLFlt_3配体，100单位/mL青霉素，100μg/stemline(注册商标)IIHematopoieticStemCellExpansionMedium(Sigma_Aldrich公BDFACSAria(商标)III细胞分选器(B3种因子以及血清的培养基的培养而得到的RE_01的流式细胞术解析的结果示于图2。在不CD3(+)的细胞的合计为86.57并且，CCR2(+)为0.33因此为CCR2(_)的细胞为册商标)IIHematopoieticStemCellExpansionMedium(Sigma_Aldrich公司制，Cat为培养后新形成的细胞群的C区域的细胞的比例更多，特别是作为承担细胞群的有效性的可以看出RE_01与MNC_QQ的细胞群在其细胞组[0122]使用在实施例1中通过糖尿病患者的外周血单个核细胞而制备的、通过使用了包了包含5种因子的无血清培养基的培养而得到的细胞群(MNC_QQ)，对其acLDL(乙酰化低密[0123]将回收至1.5mL管中的RE_01或MNC_QQ(1×105个)悬浮至基础培养基(Stemline将具有管腔形成能力的人类脐带静脉内皮细胞[0133]使用以与实施例1同样的方法培养从健康人的血液中采集的单个核细胞而得的细用了通过使用了包含5种因子的无血清培养基[0135]使用以与实施例1同样的方法培养从健康人的血液中采集的单个核细胞而得的细用了通过使用了包含5种因子的无血清培养基[0139]从重症下肢缺血的患者的外周血中分离单个核细胞。分离以与实施例1同样的方EDTA.Na22O例1不同之处在于：作为基本培养基，使用了Iscove’sModifiedDulbecco’sMedium[0143]具体而言，将(1)中回收的单个核细胞悬浮至1mL的增殖培养基(添加了50ng/mLVEGF165细胞通过使用了包含3种因子以及血清的培养基的培养而得到的细胞群(以与实施例1同样BDFACSAria(商标)III细胞分选器(BDCD34(+)或CD3(+)的细胞的合计