菊花的组织培养(市公开课)

课题1菊花的组织培养学习目标

掌握植物组织培养相关理论知识。熟悉植物组织培养的基本过程。理解细胞分化概念及脱分化，再分化。课题重点与难点课题重点：植物组织培养的基本过程。课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术，细胞分化，脱分化，再分化。活动一：1.什么是细胞分化？原因和结果？2.什么是脱分化、再分化？3.愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？4.组织培养的过程？以及组织培养的理论基础？活动二：1.影响组织培养的因素？2.菊花组织培养应注意的问题？活动三：用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来?（提示：怎样配制MS培养基?外植体消毒应如何进行?接种、培养、移栽时应注意什么问题?）活动一：什么是细胞分化？原因和结果？什么是脱分化、再分化？愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？组织培养的过程？以及组织培养的理论基础？基础知识----相关概念细胞分化：在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果形成各种组织器官结果：原因：2.脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，又叫去分化。概念：

脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官。3.再分化：愈伤组织是外植体通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。4.愈伤组织5.外植体：由活体植物体上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。6.植物组织培养的基本过程

离体条件下利用人工培养条件在无菌情况下培养、生长、发育再生出完整植株的过程。7.植物组织培养的理论基础：细胞全能性：具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。细胞全能性表达条件：

离体、一定的营养物质、激素和其他外界条件活动二：影响组织培养的因素？菊花组织培养应注意的问题？影响植物组织培养的因素：

不同植物的组织培养难度不同同一种植物的不同组织培养难度不同

菊花的组织培养：一般选择未开化植株的茎上部新萌生的侧枝（1）、外植体的选取

（2）、培养基的配制(MS培养基)

大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S

微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co

有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。

①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）细胞分裂素类：激动素（KT）、6－苄基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素类：赤霉酸（GA3）（3）植物激素的影响②生长素和细胞分裂素作用植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率高生长素细胞分裂素：>有利于根的分化生长素细胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生长素细胞分裂素：＝促进愈伤组织生长③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响（4）、消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境

（5）、pH、温度、光照菊花：pH=5.8温度控制在18—22℃每日光照12h用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来?（提示：怎样配制MS培养基?外植体消毒应如何进行?接种、培养、移栽时应注意什么问题?）活动三：制备MS固体培养基外植体消毒

接种

培养栽培实验操作

移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒：流水冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上（三）接种用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟1、接种室消毒2、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3、材料的切取和接种4、接种注意事项①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分思考：你打算做几组重复？打算设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。（四）培养（五）移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日1、打开封口膜2、清洗转移用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培3、移栽幼苗长壮后，移栽到土壤中（六）栽培幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花思考？

在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作