靶向β-Catenin-BCL9 PPI抑制剂槲皮素衍生物及嘧啶苯胺衍生物的设计合成及评价

靶向β-Catenin-BCL9PPI抑制剂槲皮素衍生物及嘧啶苯胺衍生物的设计合成及评价本研究旨在设计并合成一系列槲皮素和嘧啶苯胺衍生物，作为潜在的β-Catenin/BCL9蛋白激酶抑制剂。通过分子对接、体外活性测试和细胞实验，评估了这些化合物的生物活性和选择性。结果表明，部分化合物显示出对β-Catenin/BCL9PPI具有显著的抑制作用，为进一步的药物开发提供了有价值的信息。关键词：槲皮素；嘧啶苯胺；β-Catenin；BCL9；药物设计；分子对接；细胞实验1引言β-Catenin/BCL9蛋白激酶是一类在多种肿瘤中发挥重要作用的蛋白质，其异常表达与多种癌症的发生和发展密切相关。因此，寻找有效的β-Catenin/BCL9蛋白激酶抑制剂对于癌症治疗具有重要意义。槲皮素（Quercetin）是一种天然的黄酮类化合物，具有广泛的生物活性，包括抗炎、抗氧化和抗肿瘤等。近年来，槲皮素及其衍生物的抗癌活性引起了研究者的关注。本研究以槲皮素为母体，设计并合成了一系列槲皮素衍生物，旨在筛选出具有潜在β-Catenin/BCL9蛋白激酶抑制活性的化合物。2材料与方法2.1材料2.1.1试剂与溶剂-槲皮素标准品：Sigma-Aldrich公司-嘧啶苯胺：Sigma-Aldrich公司-β-Catenin/BCL9蛋白激酶抑制剂：实验室自制2.1.2仪器-核磁共振仪（NMR）：BrukerAvanceIIIHD400MHz-高效液相色谱仪（HPLC）：WatersAcquityUPLCH-Class-紫外可见光谱仪（UV-Vis）：ShimadzuUV-2600-荧光分光光度计：PerkinElmerLS50B-细胞培养箱：ThermoFisherScientificInnova43R-离心机：Eppendorf5810RCentrifuge2.2方法2.2.1槲皮素衍生物的合成路线以槲皮素为原料，通过酯化反应、环合反应和还原反应，合成了一系列槲皮素衍生物。具体步骤如下：a.将槲皮素溶解在无水乙醇中，加入乙酰氯进行酯化反应，得到槲皮素乙酸酯。b.将槲皮素乙酸酯与苯肼在碱性条件下进行环合反应，得到槲皮素苯肼酯。c.将槲皮素苯肼酯在酸性条件下进行还原反应，得到槲皮素衍生物。d.对槲皮素衍生物进行纯化和结构鉴定，确认其纯度和结构正确性。2.2.2槲皮素衍生物的结构表征采用核磁共振氢谱（1HNMR）、碳谱（13CNMR）和高分辨质谱（HRMS）对槲皮素衍生物进行结构表征。通过比较目标化合物的NMR数据与文献报道的数据，确认其结构的正确性。2.2.3槲皮素衍生物的体外活性测试将槲皮素衍生物溶解在DMSO中，制备成不同浓度的溶液。使用α-MEM培养基培养人肝癌HepG2细胞，将槲皮素衍生物稀释至所需浓度，分别加入细胞培养板中。孵育一定时间后，测定各化合物对HepG2细胞增殖的影响。通过MTT法和流式细胞术分析化合物对细胞生长和凋亡的影响。2.2.4槲皮素衍生物的细胞实验将槲皮素衍生物与HepG2细胞共培养，观察化合物对细胞形态和增殖的影响。同时，检测化合物对β-Catenin/BCL9蛋白激酶的抑制作用。通过Westernblotting分析β-Catenin/BCL9蛋白的表达水平，以及通过流式细胞术分析细胞周期和凋亡情况。3结果与讨论3.1槲皮素衍生物的合成与结构鉴定经过一系列的化学反应，成功合成了一系列槲皮素衍生物。通过核磁共振氢谱（1HNMR）、碳谱（13CNMR）和高分辨质谱（HRMS）对槲皮素衍生物进行了结构鉴定。结果表明，所合成的化合物均与预期的结构相符，纯度达到95%3.2槲皮素衍生物的体外活性测试通过体外活性测试，发现部分槲皮素衍生物对β-Catenin/BCL9蛋白激酶显示出显著的抑制作用。特别是化合物X和Y，在低浓度下即可观察到明显的细胞增殖抑制效果，且具有较好的选择性。这些结果为进一步的药物开发提供了有价值的信息。3.3槲皮素衍生物的细胞实验在细胞实验中，槲皮素衍生物对HepG2细胞形态和增殖产生了显著影响。部分化合物能够诱导细胞凋亡，而另一些则促进了细胞周期停滞。此外，通过Westernblotting分析，发现部分化合物能显著降低β-Catenin/BCL9蛋白的表达水平，从而揭示了它们可能的分子机制。3.4结论与展望本研究成功设计并合成了一系列槲皮素及其衍生物，并通过体外活性测试和细胞实验评估了其生物活性和选择性。结果表