DB37T-饲料中大环内酯类药物的测定 高效液相色谱-串联质谱法编制说明

《饲料中违禁物质检测第3部分：大环内酯类》地方标准编制说明一、工作简况任务来源本标准为《关于印发《2019年度标准化综合改革暨“山东标准”建设项目计划》的通知》（鲁标改办发[2019]6号）确定的任务之一，原标准名称为《饲料中大环内酯类药物残留的测定高效液相色谱-串联质谱法》。起草单位、起草人及任务分工1.主要起草单位山东商业职业技术学院、山东省畜产品质量安全中心2.主要起草人杜国辉、焦燕、李斌、杨智国、张辰冬、徐少梅、张应龙、姜海芳。3.任务分工杜国辉：标准起草负责人，组织标准起草工作，制定标准实验进度，组织协调标准制定所需资源。焦燕：参与组织确定标准制定方案，组织推进标准制定程序和进度，进行方法开发及实验验证。李斌：讨论确定标准框架、编写思路，进行方法开发及实验验证。杨智国：讨论确定标准框架、编写思路，进行方法开发及实验验证。张辰冬：协助组织讨论确定标准框架、编写思路，进行方法开发及实验验证。徐少梅：组织起草组人员进行调研、收集素材，组织起草人员编写标准，参与标准编写，整理标准相关技术文档，组织召开标准研讨会，组织征求意见等。张应龙：提供标准编写所需的资料、素材，参与标准编写，协助征求意见，组织标准审查、报批等工作等。姜海芳：参与标准调研、标准编写、标准讨论，协助整理标准相关技术文档，参与办理征求意见，办理标准研讨会、标准专家审查会等具体事务等。起草过程1.成立标准起草工作组2019年9月，标准立项后，由山东商业职业技术学院、山东省畜产品质量安全中心等单位成立了地方标准起草工作组，讨论确定标准工作方案和计划。2.标准调研和标准起草标准起草工作组依照计划开始文献调研、实验材料购置、样品采集等筹备工作。依次开展前处理方法和仪器方法的建立和优化，并对标准中涉及的各重要技术参数和实验关键控制点进行逐项研究和确认。2020年6月完成了实验室内部验证、标准草案的撰写。3.形成标准征求意见稿邀请相关监管部门及检测实验室领域专家召开标准研讨会，对标准实验方案及参数详细研讨。标准起草工作组根据各方意见和建议，对标准草案不断修改完善，于2020年9月形成标准征求意见稿。4.形成标准送审稿标准起草工作组定向7家单位征求意见，涵盖使用、科研、大专院校、检验、管理等各类型单位，并得到22条反馈建议。并对反馈意见进行了分析判断，大部分意见予以采纳形成标准送审稿。5.形成报批稿2020年12月12日，经山东省市场监督管理局和山东省畜牧兽医局批准，山东省畜牧业标准化技术委员会组织有关专家组成审查委员会，对本标准进行了审查。来自山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、济南市畜产品质量安全监测中心、山东省食品药品检验研究院、山东农业大学、山东省产品质量检验研究院、山东省畜产品质量检测中心等6家单位的7位审查专家对标准内容逐条进行审核，进一步明确了标准相关技术要求，共提出修改意见11条。标准工作组进一步汇总审查专家意见，根据专家建议将标准名称改为《饲料中大环内酯类药物的测定高效液相色谱-串联质谱法》并对标准内容进行了修改和完善，形成报批稿。根据山东省畜牧业标准化技术委员会《关于规范畜牧业地方标准名称的意见》，改为系列标准《饲料中违禁物质检测第3部分：大环内酯类》二、地方标准制定目的和意义大环内酯类药物(macrolides,MALs)是一个庞大和重要的抗生素类群。1957年,Woodward首次使用“大环内酯”这一名称来描述这类化合物。绝大多数MALs由链霉菌属产生,少数由小单孢菌属产生,本类药物中,红霉素是第一个在临床上取得广泛应用的药物,目前已发现的MALs达100多种,这类抗生素的结构、理化性质和生物学效应很相似,其共有的特征是抗革兰氏阳性菌活性、抗支原体活性和低毒性；结构中含有十二元、十四元或十六元内酯环母核,并通过苷键连接有1～3个中性或碱性糖链。属十四元大环的有红霉素、竹桃霉素:属十六元大环的有泰乐菌素、吉他霉素和螺旋霉素。替米考星是泰乐菌素的半合成衍生物,相比于其他MALs有相似或更强的抗菌活性。在20世纪50年代后期MALs开始应用于兽医临床,当时红霉素仅作为青霉素的替代品。随着更多MALs的出现和商品化,MALs已经广泛用于畜禽细菌性和支原体感染的化学治疗。特别是在低剂量下MALs具有良好的促生长作用,因此亦是重要的饲料药物添加剂,有些已经成为畜禽专用抗生素,如秦乐菌素、替米考星、吉他霉素等。大环内酯类药物的基本结构见表1。表1大环内酯类药物的基本结构名称CAS号分子式PKa结构式红霉素114-07-8C37H67O13N8.8罗红霉素80214-83-1C41H76N2O159.27竹桃霉素7060-74-4C35H61O12N8.6泰乐菌素1401-69-0C46H77O17N7.73替米考星108050-54-0C46H80O13N27.4/8.5交沙霉素16846-24-5C42H69O15N7.1近年来，作为饲料添加剂的MALs成为我国乃至世界范围内需求量和销售速度增长最快的抗生素之一。但长期使用这类抗生素不仅在动物体内造成残留，还会随粪便排出体外进而污染环境，导致微生物菌群的失调和革兰氏阳性菌耐药性的增加，对动物及人类健康产生危害。考虑到MALs抗药性在动物之间以及动物和人类间的传递性，欧盟委员会规定所有成员国禁止使用泰乐菌素、螺旋霉素、杆菌肽等抗生素饲料添加剂，规定在猪的肝、肾，家禽的肌肉、皮、脂肪、肝及肾中均不得检出泰乐菌素。我国最新发布的GB31650－2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》规定替米考星在动物组织和奶中的最大残留限量(MＲL)为50～1500μg/kg，泰乐菌素在动物组织、奶和蛋中的MＲL为50～300μg/kg。我国相继出台《遏制细菌耐药国家行动计划(2016－2020年)》(国卫医发［2016］43号，简称行动计划)和药物饲料添加剂推出计划(中华人民共和国农业农村部公告第194号)等政策，规定自2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂的商品饲料。但一些兽药饲料生产厂家和养殖户为了提高经济效益，违禁在饲料中添加此类药物。大环内酯类抗生素的分析领域越来越广泛，分析手段也逐渐复杂，分析的种类也趋于多样化。目前对MALs残留检测的主要方法有微生物法、薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等。如《SN/T1777.2-2007动物源性食品中大环内酯类抗生素残留测定方法第2部分：高效液相色谱串联质谱法》主要适用于猪肉、禽肉、肝脏、肾脏和蜂蜜；《SN/T1777.3-2008进出口动物源食品中大环内酯类抗生素残留检测方法微生物抑制法》主要适用于肉类、水产品、动物内脏、鸡蛋和牛奶中大环内酯类兽药筛选检测；《SN/T4747.3-2017进出口食用动物大环内酯类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》主要适用于牛、羊、猪、鸡血清和牛、猪、羊尿液；《GB31660.1-2019食品安全国家标准水产品中大环内酯类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》主要适用于水产品中鱼、虾、蟹、贝类等的可食组织；《SN/T2062-2008进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留量的检测方法液相色谱串联质谱法》主要适用于蜂王浆；目前还没有针对饲料中大环内酯类药物残留检测的方法标准。因此，饲料中红霉素、罗红霉素、竹桃霉素、泰乐菌素、替米考星、交沙霉素留限量及其检测技术的研究，对于控制动物源性食品药物残留，保证食品质量安全和消直接费者食用安全有着重要的意义。三、地方标准编制原则、主要技术内容和确定依据（一）标准编制原则按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求和规定编写本标准内容，并符合以下原则：1.科学性原则本标准综合分析我国现行的兽药残留相关的国家标准、行业标准、地方标准及相关文献资料等，在进行系统的标准需求调研的基础上，充分考虑现阶段饲料行业发展现状和实际需求，制定合理的标准流程，对样品制备、前处理过程、仪器参数进行描述，并给出了方法的检出限、定量限、精密度等相关要求。2.实用性原则本标准结合兽药残留检测现状，全面分析饲料中兽药残留的检测特点，在充分实验和调研的基础上，制定了前处理、仪器参数等各环节要求，具备较强的实用性。3.规范性原则本标准根据实际情况制定，标准的适用范围满足饲料中大环内酯类药物检测需求。本标准依据《GB/T23182-2008饲料中兽药及其他化学物检测试验规程》分别进行检出限、定量限、线性范围、回收率及精密度等相关研究，其指标均符合方法学相关要求。（二）确定标准主要内容的依据目前MALs的检测方法主要包括微生物法、毛细管电泳法、紫外分光光度法、液相色谱法(LC)、液相色谱－串联质谱法(LC-MS/MS)等。其中，微生物法、毛细管电泳法、紫外分光光度法由于具有前处理复杂、灵敏度低、准确度低、检测种类受限等缺点，应用较少。饲料检测的常用方法为电化学法、LC法、LC-MS/MS法，近年来LC-MS/MS法因灵敏度高、检出限低、具有确证性等特点被广泛用于饲料中添加剂的测定。目前采用LC-MS/MS法测定MALs的研究主要针对畜禽肉制品、水产品、牛奶、蜂蜜等动物源性食品，而以饲料为分析对象的相关研究较少，其主要困难是源于饲料基质的复杂性和多样性，以及待测化合物的含量低。我国目前尚未制定测定饲料中MALs的标准方法，因此亟待建立饲料中该类抗生素的测定方法。本方法采用HLB固相萃取(SPE)净化，高效液相色谱串联质谱法测定饲料中红霉素、罗红霉素、竹桃霉素、泰乐菌素、替米考星、交沙霉素6种MALs的残留量。该方法准确、实用、杂质干扰小、基质效应低，能够检测多种饲料(配合饲料、浓缩饲料)中目标化合物的含量，提高了检测范围和灵敏度，可为我国饲料质量安全检测和监管提供有力的技术支撑。1.质谱条件的优化本实验依据大环内酯类分子的结构特征，分别选择在正离子模式下进行全扫描，确定母离子；在碎片离子扫描模式下，通关改变碰撞电压条件，确定每种物质的特征碎片离子峰，最后优化MRM定量分析质谱参数，以获得更高的灵敏度。在ESI+扫描模式下，分别对100ng/mL的6种药物标准溶液进行母离子全扫描，确定母离子的锥孔电压，对其子离子进行扫描，选择丰度较高、干扰较小的两个子离子为定性离子，丰度最高的离子作为定量离子，并优化其碰撞能量。实验发现红霉素、罗红霉素、竹桃霉素、泰乐菌素、替米考星、交沙霉素均能形成［M+H］+的母离子。本实验使用的质谱仪器为Waters公司的TQS，最后确定的质谱条件如下：电离模式：电喷雾正离子；毛细管电压：3.0kV；离子源温度：150℃；脱溶剂温度：350℃；脱溶剂氮气流速：800L/h;检测方式：多反应监测（MRM）表2六种大环内酯类药物MS/MS条件药物名称定量离子定性离子（m/z）锥孔电压(V)碰撞能量(eV)替米考星869.5＞174.4869.5＞174.4869.5＞156.635355040泰乐菌素916.5＞174.2916.5＞174.2916.5＞772.720201515红霉素734.6＞158.5734.6＞158.5734.6＞576.518181317罗红霉素837.6＞679.6837.6＞679.6837.6＞158.420201422交沙霉素828.8＞174.3828.8＞174.3828.8＞229.330301414竹桃霉素688.6＞158.4688.6＞158.4688.6＞544.6252513192.色谱条件的选择大环内酯类药物属于弱极性化合物，实验采用C18反相色谱柱进行分离。考察了分别以乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-5mmol/L乙酸铵和甲醇-5mmol/L乙酸铵作为流动相时大环内酯类药物的分离情况，结果表明:0.1%甲酸水作为水相比5mmol/L乙酸铵溶液更能明显改善目标物的峰形，有助于碱性物质的分离，并使目标化合物的保留时间提前。进一步以0.1%甲酸水作为水相，发现当乙腈为有机相时，6个目标物峰形较好，无拖尾现象，且泰乐菌素的响应值能明显提高。采用梯度洗脱，可实现饲料中杂质与目标分析物的良好分离，同时缩短分离分析时间。因此，本实验以0.1%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，保证良好的峰形和分离度，这与文献研究结果一致。具体色谱条件如下：色谱柱：BEHC18柱，2.1×50mm，1.7μm；柱温：40℃；进样量：1μL；流动相：A：0.1%甲酸水溶液；B：乙腈；流速：0.30mL/min；梯度洗脱程序参见表3。表3梯度洗脱程序表时间（min）流速（ml/min）A（%）乙腈（%）00.380204.00.320805.00.320805.10.380206.00.380203.称样量的确定由于饲料样品基质复杂，有些饲料密度较小，不易提取，及考虑到样品均匀性的问题，参照《农业部1486号公告-5-2010饲料中阿维菌素类药物的测定液相色谱-质谱法》、《农业农村部公告第197号-6-2019饲料中利巴韦林等7种抗病毒类药物的测定液相色谱-串联质谱法》等相关饲料检测方法，将饲料样品的称样量确定为2g。4.提取液的确定MALs为无色碱性化合物，分子量较高。MALs易溶于有一定极性的有机溶剂，如甲醇、乙腈、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等，在水和极性溶剂中微溶。在水溶液状态下一般易被分解,尤其在酸性条件下更不稳定。国家标准及行业标准中有关大环内酯类药物的提取方法见表4。表4标准中采用提取溶剂方法基质提取溶剂GB31660.1-2019水产品中鱼、虾、蟹、贝类乙腈GB/T20762-2006牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉乙腈农业部1025号公告-10-2008猪肝脏、猪肌肉、鸡肝脏和鸡肌肉磷酸二氢钾+乙腈GB/T22941-2008蜂蜜Tris缓冲液（pH=9.0）GB/T22964-2008河豚鱼和鳗鱼Tris缓冲液（pH=9.0）SN/T1777.2-2007猪肉、禽肉、肝脏、肾脏和蜂蜜乙腈目前国家标准及行业标准中大环内酯类药物的主要提取溶液有乙腈、Tris缓冲液（pH=9.0）、磷酸二氢钾乙腈溶液提取溶剂。MALs的性质由其整体结构决定，其易溶于有一定极性的有机溶剂，如甲醇、乙腈、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等，在水和弱极性溶剂中微溶。由于氨基糖结构中叔胺基可以被离子化，因此在酸性水溶液中也有相当的溶解度。其在酸性条件下（pH＜4）下，苷键易发生水解，氨基糖苷结构中中性糖苷稳定的多，正常水解碱性糖苷的条件往往导致大环结构分解；碱性条件（pH＞9）能使内酯环开裂。因此本实验选取甲醇、乙腈、乙酸乙酯进行了提取，对此行了对比实验，实验结果见表5。表5不同提取溶液的提取效果提取液红霉素罗红霉素竹桃霉素泰乐菌素替米考星交沙霉素甲醇（%）302060655010乙腈（%）90981029610493乙酸乙酯（%）463045554020从表5中数据可以看出，当使用甲醇作为提取液时，红霉素、罗红霉素、替米考星以及交沙霉素的回收率小于50%；乙酸乙酯的回收率最低，其回收率均低50%，可能是由于乙酸乙酯极性太小，提取脂溶性成分太多，干扰测定。乙腈与提取时，6种药物的回收率为90%～104%，且乙腈可以沉淀饲料中的蛋白，明显减少其他杂质的干扰，所以选定乙腈作为提取溶剂。5.净化方法的确定饲料的常用净化方法有液液萃取法和固相萃取法，部分文献及标准采用正己烷液液萃取法进行净化，但只能去除部分脂类，对饲料中色素、其他脂类和小肽等杂质的去除效果较差，本实验采用正己烷直接净化后质谱基线抬高，仪器检测灵敏度降低。大环内酯类药物的脂溶性较强，HLB固相萃取柱的填料为亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合而成的大孔共聚物，能够保留多种极性差异较大的化合物，与C18填料相比，具有小柱干涸不影响回收率、吸附容量大等优点。因此最终采用HLB固相萃取柱作为净化方法。提取溶剂为乙腈，直接过固相萃取柱洗脱能力较强，容易造成大环内酯类药物的不保留。因此上样之前应该转换溶剂或将其稀释。考虑到过固相萃取柱时，不同溶液对回收率的影响较大。实验了将提取液氮吹至近干纯水溶解、提取液氮吹至近干纯磷酸盐溶液溶解（pH=8.0）、2mL提取液加入10mL水稀释、2mL提取液加入10mL磷酸盐溶液（（pH=8.0））对回收率的影响，对比结果见表6。表6缓冲溶液对回收率的影响化合物吹近干水稀释(%)2mL提取液+10mL水稀释(%)吹近干磷酸盐缓冲液稀释(%)2mL提取液+10mL磷酸盐稀释(%)红霉素52987092罗红霉素4010662100竹桃霉素50927095泰乐菌素20905994替米考星491036896交沙霉素40956295表6中数据可以看出，当吹至近干，用水和磷酸盐缓冲溶液重新溶解后，回收率均较低。可能为大环内酯类药物的水溶性较低，水溶液将其溶解不完全所致。而取2mL提取液直接加水及磷酸盐稀释后，回收率较好，纯水稀释的效果与磷酸盐缓冲溶液相比并无显著性差异。使用2mL提取液加入10mL纯水和10mL磷酸盐稀释过固相萃取柱时，6种大环内酯的回收率均在90%～110%之间。不同饲料组成不同，pH可能存在较大的差异，因此最终实验选择具有缓冲能力的磷酸盐缓冲溶液作为稀释液，以减少饲料组成不同，对pH造成的影响。本方法选择2mL提取液加入10mL磷酸盐缓冲液作为固相萃取柱的溶液。6.基质效应基质效应是指由于基质成分和目标化合物在电喷雾离子源进行离子化时相互竞争而导致目标化合物的信号强度有不同程度的增强或减弱。基质效应包括基质增强效应和基质抑制效应。尽管样品经过乙腈沉淀蛋白、分散固相萃取后取得了良好的净化效果，但仍无法完全消除基质效应，而基质效应的存在会对测定结果的准确性产生影响。因此，在建立LC-MS/MS检测方法时应对基质效应进行评价，并采取措施进行消除，以保证结果的准确可靠。基质效应（matrixeffects，ME）可采用以下公式进行评价ME表7配合饲料大环内酯类药物基质效应化合物标准曲线基质标准曲线ME(%)红霉素y=8858.47x+832.124y=11060.2x-2429.724.9罗红霉素y=17967.5x+1962.26y=24114.5x+4176.7434.2竹桃霉素y=23087.1x-2295.72y=22884.4x-4167.66-0.9泰乐菌素y=5659.12x+1779.52y=6611.16x+5896.0116.8替米考星y=2639.37x+439.658y=4211.97x+11545.259.6交沙霉素y=11465.1x+277.758y=14252.3x+937.73724.3表8浓缩饲料大环内酯类药物基质效应化合物标准曲线基质标准曲线ME(%)红霉素y=8858.47x+832.124y=6227.06x+1135.3-29.7罗红霉素y=17967.5x+1962.26y=19887.3x+2385.1910.7竹桃霉素y=23087.1x-2295.72y=12178.6x+6054.82-47.2泰乐菌素y=5659.12x+1779.52y=6345.63x+3833.4412.1替米考星y=2639.37x+439.658y=3072.01x+1426.8516.4交沙霉素y=11465.1x+277.758y=9679.11x+13162.3-15.6负值表示存在基质抑制效应，正值表示存在基质增强效应，绝对值越大则基质效应越强。本实验对红霉素、罗红霉素、竹桃霉素、泰乐菌素、替米考星、交沙霉素六种大环内酯类药物的基质效应进行了评价，从表7、表8中可以看出，配合饲料、浓缩饲料对红霉素、罗红霉素、竹桃霉素、泰乐菌素、替米考星、交沙霉素存在一定的基质效应，既存在基质抑制效应，也存在基质增强效应，但以基质增强效应为主，尤其是替米考星在配合饲料中的基质效应达到59.6%。基质效应的消除可使用同位素内标(理化性质与目标物几乎一致)或配制基质匹配标准溶液(为标准溶液提供与样品溶液相似的离子化环境)的方法消除基质效应的影响。同位素内标一般都很昂贵，且商品化的大环内酯类同位素内标种类也非常有限，在已报道的使用LC-MS/MS的多组分残留测定方法中，大多采用基质匹配标准溶液进行定量。本方法采用配制基质匹配标准溶液的方法很好地消除了基质影响，完全能满足测定的要求。7.线性范围和测定低限不同基质对质谱定量有很大影响。本实验在样品前处理过程中充分考查了基质效应，全部采用空白样品添加6个不同浓度目标物混合标准工作液，其中大环内酯类药物的质量浓度分别为1、5、10、50、100和200ng/mL制作工作曲线。按照操作方法制备样品溶液，将不同质量浓度的标准溶液在上述选定的液相-质谱条件下分别进行测定，进样量为1μL，根据质量浓度与色谱峰面积响应绘制标准曲线和计算回归方程及其相关系数。相关药物的基质匹配标准曲线及线性范围见图1、表9和表10。结果表明：大环内酯类药物的质量浓度在1-200ng/mL浓度范围内，浓度与其峰面积呈良好的线性关系，其相关系数（r）均大于0.99。红霉素罗红霉素竹桃霉素替米考星泰乐菌素交沙霉素图1大环内酯类药物基质匹配标准曲线表9配合饲料大环内酯类药物的基质标准曲线及线性范围名称线性方程相关系数（r）线性范围（ng/ml）红霉素y=11060.2x-2429.70.9991-200罗红霉素y=24114.5x+4176.740.9991-200竹桃霉素y=22884.4x-4167.660.9991-200泰乐菌素y=6611.16x+5896.010.9991-200替米考星y=4211.97x+11545.20.9991-200交沙霉素y=14252.3x+937.7370.9991-200表10浓缩饲料大环内酯类药物的基质标准曲线及线性范围名称线性方程相关系数（r）线性范围（ng/ml）红霉素y=6227.06x+1135.30.9991-200罗红霉素y=19887.3x+2385.190.9991-200竹桃霉素y=12178.6x+6054.820.9981-200泰乐菌素y=6345.63x+3833.440.9991-200替米考星y=3072.01x+1426.850.9991-200交沙霉素y=9679.11x+13162.30.9991-200本方法的仪器检出限以大于3倍噪音量的信号为准，红霉素、罗红霉素、竹桃霉素、泰乐菌素、替米考星、交沙霉素的仪器检出限分别为5µg/kg。根据《GB/T23182-2008饲料中兽药及其他化学物检测试验规程》对色谱法检出限的规定，在实际样品中添加目标物质的标准工作液，经提取净化等样品前处理过程，以大于10倍噪音量的信号为依据，最低添加浓度为方法检出限。方法检出限为10µg/kg。大环内酯类药物基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图见图2。红霉素罗红霉素竹桃霉素替米考星泰乐菌素交沙霉素图2大环内酯类药物基质匹配标准溶液（10ng/mL）特征离子质量色谱图8.方法回收率和精密度在本实验中，在同一实验室，由同一操作者使用相同仪器设备，按相同的前处理方法和测试方法，在短时间内对配合饲料、浓缩饲料中样品中的大环内酯类药物进行了6次测定，回收率及重复性结果见表11、表12。从表表11、表12可以看出在10-100µg/kg范围内，平均回收率为71.2%-95.0%，相对标准偏差RSD在0.7%-11.5%范围内，符合重复性试验对相对标准偏差的要求。表11配合饲料中大环内酯类药物回收率及精密度添加水平（µg/kg）红霉素重复1重复2重复3重复4重复5重复6平均值RSD1086.084.082.088.094.096.088.36.35081.082.088.072.067.071.076.810.510074.674.076.875.875.874.675.31.6罗红霉素1076.078.078.078.090.0100.083.311.55078.083.093.075.075.078.080.38.510074.273.073.274.477.076.674.72.3竹桃霉素1084.086.086.088.094.098.089.36.15080.084.090.072.071.072.078.210.010085.487.486.487.487.487.686.91.3泰乐霉素1068.068.072.070.076.082.072.77.55067.075.084.066.066.069.071.210.010069.874.075.274.278.278.875.04.4替米考星1088.084.086.092.088.094.088.74.25082.085.087.094.094.092.089.05.710081.483.884.282.887.286.484.32.6交沙霉素1088.096.092.088.0100.0106.095.07.55087.093.092.084.082.083.086.85.410081.078.481.281.482.882.881.02.3表12浓缩饲料中大环内酯类药物回收率及精密度添加水平（µg/kg）红霉素（%）重复1重复2重复3