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文档简介
2017-01-30实施2017-01-30实施工2缩略语下列缩略语适用于本文件。PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)3.5冰箱(-20℃;-80℃)。3.7分析天平(准确度0.01g以上)。4试剂和材料工4.131%琼脂糖凝胶，见附录A中的A.3。15mL离心管、1.5mL离心管、剪刀、镊子和研钵，经121(±2)℃,15min高压灭菌并烘干。5.2.1肠内容物的采集与处理5.2.1肠内容物的采集与处理采取病死或剖杀猪的小肠丙容物1g左石，按1:5倍体积加入PBS,研磨冻融3次，装入15mL细胞培养物冻融3次，转入1.5mL离心管中，-80℃保存备用。3s,室温静置5min。6.1.412000g4℃离心15min,吸取上清液移入新的离心管中(注意不要吸出中间层),加入等体6.1.512000g4℃离心10min,小心弃去上清液，加入75%乙醇1mL(DEPC水配制)。6.2.2水浴锅或PCR仪中，65℃作用5min,冰上急冷2min。6.2.4PCR仪中，42℃作用60min,再70℃作用15min,-20℃保存备用。45A.10.01mol/LpH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)的配制A.1.10.2mol/L磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)71.6g,先加适量灭菌去离子水溶解，最后定容至1000mL,混匀。A.1.20.2mol/L磷酸二氢钠溶液：称取磷酸二氢钠(NaH₂PO₄H₂O)27.6g,先加适量灭菌去离子水溶解，最后定容至1000mL,混匀。A.1.3量取0.2moL/L磷酸氢二钠溶液36mL,0.2mol/L磷酸二氢钠溶液14mL,称取氯化钠8.5g,加灭菌去离子水800mL,调pH值至7.2,最后定容至1000mL,4℃保存。A.2电泳缓冲液(50倍)二水乙二铵四乙酸二钠(分析纯)氢氧化钠(分析纯)A.2.2TAE电泳缓冲液(50×)羟基甲基氨基甲烷
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