ISOTS 7552-32024 分子体外诊断检查 静脉全血中循环肿瘤细胞的预检查方法规范 第3部分CTC分析染色的准备标准立项发展报告

分子体外诊断检查静脉全血中循环肿瘤细胞的预检查方法规范第3部分:CTC分析染色的准备标准立项发展报告EnglishTitle:StandardizationDevelopmentReport:Molecularinvitrodiagnosticexaminations—Specificationsforpre-examinationprocessesforcirculatingtumourcells(CTCs)invenouswholeblood—Part3:PreparationsforanalyticalCTCstaining摘要循环肿瘤细胞（CTC）检测作为一种“液体活检”技术，在肿瘤早期筛查、疗效监测、复发风险评估及精准医疗中展现出巨大潜力。然而，CTC的稀有性和异质性对其检测流程的标准化提出了极高要求，尤其是分析前环节，如样本采集、运输、富集及染色准备等，直接决定了后续分析结果的准确性与可重复性。本报告聚焦于国际标准化组织（ISO）于2024年11月4日发布的《分子体外诊断检查静脉全血中循环肿瘤细胞的预检查方法规范第3部分：CTC分析染色的准备》（ISO/TS7552-3:2024）技术规范。报告系统介绍了该标准发布的行业背景、核心内容及其对全球体外诊断（IVD）领域的深远影响。重点阐述了该标准如何通过规定从样本接收至染色分析的标准化操作流程、试剂要求及质控措施，为实验室提供统一的操作指引，以消除因操作不当导致的结果偏差，从而提升CTC检测的临床可信度。报告同时对该标准的起草单位——国际标准化组织临床实验室检验和体外诊断系统技术委员会（ISO/TC212）的背景与工作进行了深入介绍。结论部分，报告展望了该标准作为系列标准的关键一环，将推动CTC从科研工具向临床常规检测的全面转化，并预测其将与人工智能、微流控等新兴技术深度融合，构建更加精准、高效的肿瘤精准诊疗体系。关键词循环肿瘤细胞（CTC）；分子体外诊断；预检查过程；分析前变量；染色准备；标准化；ISO/TS7552-3:2024；液体活检Keywords:CirculatingTumorCells(CTCs);MolecularInVitroDiagnostics;Pre-examinationProcess;Pre-analyticalVariables;StainingPreparation;Standardization;ISO/TS7552-3:2024;LiquidBiopsy正文一、引言随着精准医疗理念的深入人心，液体活检技术因其非侵入性、可重复性强及能实时反映肿瘤动态等优势，已成为肿瘤诊疗领域的研究热点。循环肿瘤细胞（CirculatingTumorCells,CTCs），作为从原发或转移性肿瘤病灶脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，是液体活检的核心标志物之一。通过对CTCs的计数、分型及分子特征分析，可实现肿瘤的早期检测、预后判断、治疗靶点发现及耐药机制探索。然而，CTC检测从实验室研究走向大规模临床应用面临着一项关键挑战——标准化。CTCs在外周血中的丰度极低（通常每毫升血液仅含数个至数十个），且形态和表型异质性强。因此，从静脉全血采集、保存、转运、富集到后续的分析检测，每一个微小的操作偏差都可能导致细胞丢失、损伤或污染，最终造成检测结果的错误或不可重复。这种因“分析前环节”引入的变异性，严重阻碍了不同实验室之间、不同研究之间以及不同临床中心之间数据的可比性。ISO/TS7552系列标准旨在系统地解决这一瓶颈问题，其核心目标是为静脉全血中CTC的预检查过程提供一套国际公认的、统一的技术规范。作为该系列的第三部分，ISO/TS7552-3:2024《分子体外诊断检查静脉全血中循环肿瘤细胞的预检查方法规范第3部分：CTC分析染色的准备》的发布，标志着对CTC分析前流程的标准化工作迈入了纵深领域，专注于为“分析性染色”这一关键步骤的准备工作建立行业准则。二、标准核心内容与技术规范解读ISO/TS7552-3:2024由国际标准化组织临床实验室检验和体外诊断系统技术委员会（ISO/TC212）制定，于2024年11月4日正式发布。该标准并非孤立存在，而是与ISO/TS7552-1（关于样本采集、转运与处理的一般要求）及ISO/TS7552-2（关于CTC的富集方法）共同构成一个完整的标准化体系。本部分聚焦于为“分子”层面的分析染色做前置准备，其核心内容涵盖了以下几个关键方面：1.适用范围的精准界定：标准明确规定其适用范围为静脉全血样本。规定了从样本经过富集步骤后，到进行正式分析性染色（例如免疫荧光染色、FISH、免疫组化等）之前的准备工作。它涵盖了细胞的固定、透化、封片、抗体制备及标记等环节。值得注意的是，标准明确排除了对染色过程本身的具体操作规范，而是专注于使样本达到“可供分析染色”的状态。2.细胞固定与保存的规范化：固定是保持CTC形态、抗原性及核酸完整性的关键。标准对不同固定剂（如多聚甲醛、甲醛、甲醇/丙酮等）的使用条件、浓度、作用温度和时间进行了指导性规定。例如，针对后续的RNA分析，可能推荐使用交联型固定剂；而对于单纯的形态学或蛋白分析，非交联型固定剂可能更优。标准还规定了固定后细胞的保存条件（如温度、pH值、保存液成分）及最长保存期限，以避免因储存不当导致细胞降解或抗原丢失。3.细胞透化与抗体内源性活性抑制：为允许染色抗体或探针进入细胞内部，必须对富集后的CTC进行透化处理。标准详细阐述了不同透化方法（如TritonX-100、皂素、Saponin、甲醇处理等）的适用场景及其对细胞膜完整性的影响。同时，针对全血来源的CTC，标准特别强调了抑制内源性过氧化物酶、碱性磷酸酶及生物素等活性物质的必要性，以消除非特异性背景染色。这包括推荐使用商品化封闭液、过氧化氢处理等具体操作步骤。4.染色用试剂的质控与管理：尽管标准不规定最终的染色方案，但对用于染色的试剂（如抗体、荧光染料、探针）提出了严格的质控要求。这包括对批间差异的最小化要求、对试剂效价的验证方法，以及对荧光分子光稳定性保护的建议。标准鼓励使用经过验证的商品化试剂盒，并明确了自行配制试剂的验证流程与记录要求。5.制片与封片技术的标准化：将富集并处理后的CTC细胞转移至载玻片或微流控芯片上，并进行封片，是确保后续成像与分析质量的关键。标准对玻片材质（如I类或II类载玻片）、细胞分散均匀度、封片剂的选择（如甘油、Mowiol、DABCO等抗淬灭封片剂）以及封片固化时间进行了指导。6.质量控制与文档记录：贯穿全文的是对质量控制的要求。标准明确要求实验室应建立并执行一套内部质量控制方案，例如：*使用已知阳性和阴性的细胞株作为对照，以验证整个染色准备流程的有效性。*在每批次实验中加入空白对照和同型对照。*记录所有关键参数（如固定时间、温度、试剂批号）以确保过程的可追溯性。三、标准的重要价值与行业影响ISO/TS7552-3:2024的发布，具有里程碑式的行业意义：1.显著提升数据可比性与可重复性：通过统一染色准备流程，消除了过去因固定、透化等操作差异导致的染色结果偏差。这直接提升了跨实验室、跨设备及跨时间点的CTC检测数据的一致性和可靠性，为多中心临床试验和大型队列研究提供了技术基础。2.加速CTC检测的临床转化：目前，许多CTC检测技术仍停留在科研或单中心验证阶段。缺乏统一的、国际公认的预分析标准是其难以被监管机构（如FDA、NMPA）批准为临床诊断方法的主要原因之一。该标准的发布，为企业开发符合法规要求的商品化试剂盒和检测系统提供了明确的蓝本，为CTC检测的注册上市铺平了道路。3.降低实验室运营门槛与操作误差：标准提供了一个清晰、可执行的“最佳实践”框架。无论是高级实验室还是新兴的基层检验机构，只需遵循该标准，即可将自身操作环节的变异控制在最小范围内，从而保证检测质量。这对于推广CTC检测技术在全球范围内的普及应用至关重要。四、起草与修订单位：国际标准化组织临床实验室检验和体外诊断系统技术委员会（ISO/TC212）ISO/TS7552-3:2024由国际标准化组织临床实验室检验和体外诊断系统技术委员会（ISO/TC212）负责起草和制定。ISO/TC212是ISO下专门负责临床实验室检测和体外诊断系统领域的标准化技术机构，其工作范围涵盖了从基础的实验室质量管理到最前沿的分子诊断技术的全链条标准制定。关键作用与贡献：该委员会以其高度专业性著称，已经发布了数十项对全球IVD行业产生深远影响的国际标准，如：*ISO15189：《医学实验室——质量和能力的要求》，它是全球医学实验室质量管理体系的标杆。*ISO15197：《体外诊断检测系统——糖尿病管理用自测血糖监测系统的要求》。*ISO20395：《生物技术——核酸定量方法学要求和评估》。*ISO20418系列：关于测血中循环游离DNA的标准。在制定ISO/TS7552系列标准的过程中，ISO/TC212召集了来自全球液体活检领域的顶尖科学家、临床医生及产业界技术专家。他们基于对现有各类CTC富集技术（如膜过滤、免疫磁珠、微流控芯片）的深入理解，识别出上述技术中共同存在的、影响染色质量的共性预分析问题，并通过广泛征求成员国意见和严格的技术论证，最终形成了这份技术规范。鉴于CTC领域技术迭代迅速，ISO/TC212选择以技术规范（TechnicalSpecification，TS）而不是国际标准（InternationalStandard，IS）的形式发布本文件，体现了其灵活性和前瞻性，旨在为快速发展的技术提供指导，同时又为未来根据技术进步进行修订留出空间。中国作为ISO/TC212的积极成员，在该标准的讨论和制定过程中也贡献了重要的技术意见和临床数据。五、结论与展望ISO/TS7552-3:2024《分子体外诊断检查静脉全血中循环肿瘤细胞的预检查方法规范第3部分：CTC分析染色的准备》的核心价值在于，它将分散的、基于经验的操作流程，系统性地转化为了可执行、可溯源、可复现的国际技术规范。该标准与ISO/TS7552的其他部分共同构建了一个完整的预分析标准化生态，为CTC检测从“艺术”向“科学”的转变提供了关键框架。展望未来，随着微流控芯片、单细胞测序、多组学整合及人工智能等新技术的飞速发展，CTCs的检测维度将从单一的“计数”向深度的“分子表型”和“功能分析”全面拓展。届时，对染色准备的精度和复杂性要求将达到新的高度。我们预期，ISO/TC212将持续关注技术前沿，在以下方面对该系列标准进行迭代和补充：1.多模态染色标准的制定：针对同时进行DNA、RNA、蛋白质及代谢物等多模态成像分析的需求，制定更复杂的多通道染色标准化流程。2.自动化系统的兼容性：现有标准以人工操作为主。未来版本将更侧重于指导如何将其与全自动染色平台、高通量成像系统进行集成与验证。3.与人工智能分析的无缝对接：明确对图像格式、细胞定位信息及质量控制标记的要求，以便于AI算法直接用于后续的细胞分类和特征提取。4.