2026年液相色谱仪日常维护培训考核试卷附答案

2026年液相色谱仪日常维护培训考核试卷附答案一、单项选择题（每题2分，共20分）1.液相色谱仪日常运行中，流动相经脱气处理后仍出现泵压力波动，最可能的原因是（）A.色谱柱填料流失B.检测器流通池污染C.单向阀密封不良D.进样针堵塞2.反相色谱柱长期不用时，正确的保存溶剂是（）A.纯水B.乙腈-水（90:10）C.10%甲醇水溶液D.0.1mol/L磷酸盐缓冲液3.紫外检测器基线出现规则锯齿状波动，优先排查的部件是（）A.柱温箱温度稳定性B.流动相脱气效果C.检测器灯能量D.色谱柱接口漏液4.二元高压梯度泵的混合比例误差超过允许范围时，应首先检查（）A.柱塞杆密封垫磨损情况B.溶剂瓶内滤头堵塞程度C.比例阀电磁阀响应时间D.废液管是否畅通5.用于蛋白质分离的色谱柱，使用后需用含20%异丙醇的缓冲液冲洗，主要目的是（）A.防止盐结晶堵塞色谱柱B.溶解残留的疏水性蛋白C.中和柱内酸性物质D.维持填料溶胀状态6.流动相配制时，若使用未校准的移液枪量取有机相，可能导致的后果是（）A.保留时间漂移B.检测器灵敏度下降C.泵头密封圈加速老化D.色谱峰拖尾7.示差折光检测器（RID）使用前需预热1小时以上，主要原因是（）A.稳定光源输出能量B.平衡流通池温度C.排除检测器内部空气D.激活电子元件8.更换泵密封垫后，系统压力无法升至设定值，最可能的操作失误是（）A.未完全旋紧排液阀B.密封垫型号不匹配C.柱塞杆未清洁干净D.溶剂瓶内无流动相9.梯度洗脱时，基线在梯度变化阶段出现漂移，排除流动相污染后，应检查（）A.柱温箱温度是否恒定B.检测器参比池是否充满流动相C.进样量是否准确D.色谱柱柱效是否下降10.日常维护中，清洗自动进样器针座时，应选择的溶剂是（）A.丙酮（强挥发性）B.甲醇-水（50:50）C.正己烷（非极性）D.1mol/L氢氧化钠溶液二、多项选择题（每题3分，共30分，多选、少选、错选均不得分）11.液相色谱仪流动相脱气的常用方法包括（）A.超声脱气（20-30分钟）B.氦气吹扫（5-10ml/min）C.真空抽滤（0.22μm滤膜）D.加热煮沸（10分钟后冷却）12.色谱柱出现柱压升高、峰形拖尾的可能原因有（）A.样品中含不溶颗粒污染柱头B.流动相pH超出填料耐受范围（如C18柱pH＞8）C.长期使用后填料流失导致柱床塌陷D.进样量过大超过色谱柱负载13.泵压力突然升高的排查步骤包括（）A.断开色谱柱，观察压力是否恢复正常（判断是否为柱前系统堵塞）B.检查在线过滤器滤芯是否堵塞（用5%硝酸超声清洗或更换）C.拆卸单向阀，用甲醇超声清洗阀球和阀座D.降低流速，观察压力是否随流速线性变化（判断是否为气泡影响）14.紫外检测器流通池污染的表现有（）A.基线噪声显著增大（尤其在低波长区）B.进样后出现负峰或异常峰形C.不同流动相切换时基线漂移时间延长D.检测器信号值整体偏高15.自动进样器常见故障及对应解决方法正确的有（）A.进样重现性差→检查进样针密封性或更换定量环B.进样后无色谱峰→排查针座堵塞或进样针断裂C.进样残留高→增加洗针次数或更换洗针溶剂D.进样器报错“机械位置错误”→重新校准进样针位置16.流动相配制时需注意的事项包括（）A.缓冲盐溶液使用前需用0.45μm滤膜过滤（水相）和0.22μm滤膜过滤（有机相）B.含缓冲盐的流动相使用后，需用高比例水相（如90%水+10%甲醇）冲洗系统30分钟以上C.混合不同pH值的缓冲液时，需先调节pH再混合，避免盐析D.有机溶剂与水混合时，需缓慢加入并搅拌，防止局部过热17.柱温箱维护的关键操作有（）A.定期清洁箱体内灰尘（每月1次）B.检查温度传感器校准状态（每年1次）C.避免在高温（＞80℃）下长时间使用（除非色谱柱耐受）D.色谱柱安装时需确保柱卡固定牢固，避免温度变化导致接口松动18.质谱联用（LC-MS）时，液相系统的特殊维护要求包括（）A.避免使用不挥发性缓冲盐（如磷酸盐），改用乙酸铵或甲酸铵B.定期更换喷雾针（防止堵塞影响离子化效率）C.增加流动相脱气时间（避免气泡进入质谱真空系统）D.关机前用纯甲醇冲洗系统（防止盐结晶堵塞毛细管）19.液相色谱仪日常使用记录应包含的信息有（）A.操作人员姓名及操作时间B.流动相组成及pH值C.色谱柱型号及使用时长D.系统压力、柱温、检测器波长等运行参数20.应急处理溶剂泄漏的正确步骤包括（）A.立即关闭仪器电源（避免电火花引燃有机溶剂）B.用吸附棉覆盖泄漏区域（优先处理易燃溶剂如乙腈、甲醇）C.佩戴防护手套和护目镜后清理泄漏物D.检查泄漏点（如泵密封垫、管路接口、废液瓶）并修复三、判断题（每题1分，共10分，正确打√，错误打×）21.为提高分离效率，可将色谱柱流速设置为超过其最大耐受流速（）22.清洗泵头时，应使用与流动相极性相近的溶剂（如含缓冲盐流动相用纯水清洗）（）23.示差折光检测器对温度变化不敏感，可在室温波动较大的环境中使用（）24.更换色谱柱时，需注意流动相流向与色谱柱标记方向一致（）25.流动相放置超过48小时后，需重新脱气方可使用（）26.检测器灯能量不足时，仅影响信号强度，不影响基线稳定性（）27.自动进样器的洗针溶剂应与流动相兼容，避免残留溶剂污染样品（）28.柱压持续缓慢升高可能是由于流动相中微生物滋生导致（）29.液相色谱仪长期不用时，应保持系统内充满流动相以防止填料干燥（）30.维修泵单向阀时，可用镊子直接夹取阀球（易导致划痕影响密封）（）四、简答题（每题6分，共30分）31.简述高压输液泵的日常维护要点（至少列出5项）。32.色谱柱使用前为何需要进行平衡？平衡不充分会导致哪些问题？33.紫外检测器基线漂移的常见原因及对应的解决方法（至少列出4项）。34.配制含缓冲盐的流动相时，需遵循哪些关键步骤以避免系统堵塞？35.系统压力异常升高时，如何逐步排查故障点（从柱前到柱后依次说明）？五、实操题（每题10分，共20分）36.某实验室发现二元泵A通道流速异常（设定1ml/min，实际0.8ml/min），请写出排查与解决的具体操作流程（需包含关键检查点和工具）。37.一根C18色谱柱因进样高浓度蛋白样品导致柱效下降（理论塔板数降低30%），请设计再生方案（需明确溶剂、流速、冲洗体积及注意事项）。答案一、单项选择题1.C2.B3.B4.C5.B6.A7.B8.A9.B10.B二、多项选择题11.ABC12.ABCD13.ABC14.AB15.ABCD16.BCD17.ABCD18.ACD19.ABCD20.BCD三、判断题21.×22.√23.×24.√25.√26.×27.√28.√29.×30.×四、简答题31.高压输液泵日常维护要点：①每日开机前检查溶剂瓶内流动相体积（不低于100ml），避免空泵运行；②定期更换密封垫（建议每3000小时或压力波动超20%时更换）；③每周清洗单向阀（用甲醇超声10分钟，避免使用强酸碱）；④流动相含缓冲盐时，使用后用90%水+10%甲醇冲洗泵头30分钟（流速0.5ml/min）；⑤每月检查柱塞杆磨损情况（观察是否有划痕或腐蚀，必要时更换）；⑥长期停机前，用纯甲醇冲洗泵系统（20倍系统体积）并关闭泵电源。32.色谱柱平衡目的：使填料与流动相充分作用，达到稳定的分配系数；平衡不充分会导致：①保留时间漂移（前几针样品保留时间逐渐延长）；②峰形异常（如前沿峰或拖尾峰）；③基线不稳定（因填料持续释放杂质）；④分离度下降（不同组分洗脱顺序紊乱）。33.紫外检测器基线漂移原因及解决方法：①流动相脱气不彻底→延长脱气时间（超声30分钟或氦气吹扫10分钟）；②柱温箱温度波动→检查柱温箱校准状态，设定温度与环境温差≤10℃；③检测器灯老化（能量不足）→更换氘灯（新灯能量＞600mAU）；④流动相污染（如缓冲盐结晶或微生物）→重新配制流动相并过滤；⑤流通池有气泡→用异丙醇低流速（0.1ml/min）冲洗流通池30分钟。34.含缓冲盐流动相配制关键步骤：①先配制缓冲盐母液（如磷酸盐），用0.45μm水相滤膜过滤；②调节pH值（用稀酸/碱缓慢滴加，边滴边搅拌）；③与有机溶剂混合时，缓慢加入并搅拌（避免局部浓度过高导致盐析）；④混合后再次用0.22μm滤膜过滤（同时脱气）；⑤使用后，先用90%水+10%甲醇冲洗系统30分钟（流速0.8ml/min），再用纯甲醇冲洗10分钟（防止盐结晶）；⑥避免缓冲盐浓度过高（建议＜0.1mol/L）。35.压力异常升高排查流程（柱前→柱后）：①柱前系统：断开色谱柱，连接两通，观察压力是否正常→若压力仍高，检查在线过滤器（清洗或更换滤芯）、泵出口单向阀（超声清洗）、进样器（检查针座或定量环是否堵塞）；②色谱柱本身：连接色谱柱，观察压力→若压力高，用90%水+10%甲醇低流速（0.3ml/min）反向冲洗色谱柱（注意是否允许反冲），或更换保护柱；③柱后系统：断开检测器，连接两通至废液→若压力仍高，检查检测器流通池（用异丙醇冲洗）或废液管（是否弯折堵塞）。五、实操题36.二元泵A通道流速异常排查流程：①检查溶剂瓶：确认A通道溶剂瓶内有足够流动相，滤头未堵塞（取出滤头用5%硝酸超声10分钟，再用纯水清洗）；②检查比例阀：进入泵设置界面，单独运行A通道（1ml/min），观察实际流速（用天平称量1分钟流出液重量，计算体积）→若仍低，拆卸比例阀A通道电磁阀，检查阀芯是否卡顿（用甲醇冲洗阀腔）；③检查单向阀：拆卸A通道入口单向阀，用甲醇超声清洗阀球和阀座（注意方向），安装后测试流速；④检查密封垫：关闭泵，拆卸泵头，观察密封垫是否磨损（边缘有划痕或变形），更换同型号密封垫（安装时涂抹少量润滑脂）；⑤校准泵流速：通过系统软件进行流速校准（用标准体积管或天平称量法），确保误差＜2%。37.C18色谱柱再生方案：①反冲色谱柱（若柱压允许，按色谱柱说明书确认是否可反冲）；②溶剂冲洗顺序及参数：纯水（含0.1%三氟乙酸）：流速0.3ml/min，冲洗10倍柱体积（约15ml）→溶解水溶性蛋白；50%乙腈-水（含0.1%三氟乙