CN116410207B 一类泛素化特异性蛋白酶抑制剂及其制备方法与应用 （杭州普济远成生物医药科技有限公司）

201910385956.02019.05.09一类泛素化特异性蛋白酶抑制剂及其制备本发明涉及一种式I所示化合物及其消旋上可接受的盐或前药，以及包含其的药物组合抑制USP28和/或USP25的活性，所述式I结构如2烷1-C6)烷基。36.一种制备权利要求1-5任一项所述的式I所示的化合8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于4骤制备得到：6分别为根据权利要求1-5任一项所述式I的R4和R6或者羟基或氨基被Boc12.权利要求1-5任一项所述的式I所示的化合物及其消旋体、立体异构体、互变异构抑制USP28和/或USP25相关的疾病或5过在其自身半胱氨酸残基和由76个氨基酸组成的泛素的C-末端羧基之间形成高能硫酯键来激活泛素；被激活的泛素被转移到E2的半胱氨酸残基上(哺乳动物中大约有50种E2偶联从E2上被转移到靶蛋白上(Annu.Rev.Biochem.2009,78,477&2018,87,697；(DNARepair2010,9,1229；Biochim.Biophys.Acta2014,1843,150；CellDeath化是由去泛素化酶(DUBs)催化的。DUBs是一类特异的蛋白水解酶(Ph(OTU)家族和Machado-Josephin结构85,251；EssaysBiochem.2005,41,187；FrontBiosci.2014,19,886；CancerInt.J.Biochem.Cell.Biol.2018,101,80；J.Clin.Oncol.2013,31,1231；Cancer6[0006]USP28是一种泛素特异性蛋白酶，在维持c-MYC(NLSD1(CellRep.2013,5,224)、HIF1alpha(Blood2012,119,1292)、Notch1中成为一个最具潜力的靶点(CancerLett.2003,197,125；ExpertOpin.Ther.TargetsMYC的稳定性从而减慢或者阻止肿瘤细胞的[0008]LSD1是一个在基因表达的表观遗传调控中起到重要作用的组蛋白去甲基化酶瘤中发现LSD1是过表达的，并且LSD1被认为对肿瘤干细胞的维持起着非常重要的作用[0009]敲除了USP28的小鼠胚胎发育正常且出生后生长正常，成年小鼠未发现有明显的1424；J.Physiol.Anthropol.200772011,479,232；J.Clin.Invest.2018,128,1217；Nat.Med.2017.23,775-781；USP28可能在老年人中产生有益健康的效[0011]USP25是一个与USP28非常接近的同源基因，并且与USP28缺陷小鼠相似，缺乏能可导致Wnt信号的减弱(GenesDev.2017,31,1024)。考虑到已知Wnt信号在癌症中的作[0012]据报道，USP25能通过去泛素化TRAF5和TRAF6两个蛋白来负调控IL17介导的免疫8代的(C1-C12)脂肪烃基，所述无取代的(C11-C12)脂肪烃基；[0023]R3为无取代或取代的(C1-C12)脂肪烃基，所述无取代的(C1-C12)脂肪烃基为由1~1-C12)脂肪烃基；取代或取代的(C1-C12)脂肪烃基，所述无取代的(C1-C12)1-C12)脂肪烃基；取代的(C1-C12)脂肪烃基为由1～12碳原子和相应的氢原子组成的脂肪烃基，取代的(C1-6为H7不为H；[0026]或R7选自无取代或任选地被一个、两个或更多个R9所取代的3-20元取代的(C1-C12)脂肪烃基为由1～12碳原子和相应的氢原子组成的脂肪烃基，取代的(C1-9和Y定义如式I中所定义。基三氟乙酰基(Tfac)和叔丁氧羰基(Boc)得到[0048]根据本发明的实施方案，部分中间体B-I(例如B-Ia或B-Ib)可由商业途径或者经和R8含有羟基或氨基等活泼基团时)[0054]试剂与反应条件：a)BnCl,KI,K2CO3/MeCN；b)H-R7-Boc,Pd(OAc)2,X-phos,Cs[0056]根据本发明的实施方案，所述通式I所涵盖的式II均可由上述通用制备方法合成[0058]根据本发明的实施方案，所述的药物组合物进一步包含治疗有效量的所述式I化药物组合物在制备用于治疗与抑制USP28相关的疾病或药物组合物在制备用于治疗与抑制USP25相关的疾病或药物组合物在制备用于治疗与抑制USP25和USP28相关的疾病或[0063]本发明还提供一种治疗或预防与USP28和/或USP25的调节相关的疾病或障碍的方[0064]根据本发明的实施方案，所述USP25和/或USP28相关的疾病或障碍包括癌症、炎治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验的化合物对于USP28和/或USP25有良好的抑制活性，相较于现有技术抑制剂的活性可高于为任选地杂原子插入至脂肪烃基中任选地C-C键和C-H键)。适宜的杂原子对于本领域熟练[0081]在任何用于制备本发明化合物的方法中，可能必需和/或期望保护任何有关分子/Et3[0084]本领域技术人员将理解，由于氮需要具有可用的孤对电和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷氧化杂环和叔胺。这些制备N-氧化物的方[0085]药学上可接受的盐可以是例如在链或环中具有氮原子的具有足够碱性的本发明发明化合物其中1个成盐位点上形成的盐，而且还包括其中2、3或全部成盐位点上形成的发明的化合物的单一立体异构体(例如单一对映异构体或单一非对的化合物与式I中所示的那些相同，但是其中一或多个原子被原子质量或质量数不同于通2如掺入放射性同位素(诸如3H和14C)的化合物可用于药物和/或底物组织分布测定。氚(即2H)替代可提供源自更高的代谢稳定性的某些治疗优势(例如增加的体内半衰通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。适用于上述制剂的典型的药学上可溶剂化物(水合物)是指化合物I与化学计量学的一个或多个分子的水或其他溶剂形成的共包含羟基/羧基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前药形式包括磷酸慢性淋巴细胞白血病、慢性嗜酸粒细胞白血病/高嗜酸性粒细胞综合征、慢性粒细胞白血[0101]以下所述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法；所得化合物以VarianMercury-plus400核磁共振仪和WatersQ-TOF-Ultima质谱仪测定其1HNMR谱和[0106]实施例1.[0110]a)向反应瓶(500mL)中加入硫代乙酸钾(57.11g,0.50mol)和无水DMF(250mL)，2SO4[0113]d)向反应瓶(250mL)中加入1a-5(13.85g,40mmol)和无水DMF(70mL)，冷却至0-5℃,加NaH(1.92g,48mmol,含量60％)，至无气体放出后，滴加MeI(3.24mL,52mmol)/DMFPE重结晶，得N-甲基-N-三氟乙酰基-3-氨基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯(1a-6,洗脱，得N-甲基-N-三氟乙酰基-3-氨基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(A-1,2.38g,收率[0120]实施例2.[0127]使用适当的合成前体，根据上文针对实施例2(中间体A-27)概述的程序合成在下[0131]实施例3.[0132]制备中间体A-30(3-(N-甲基-N-三氟乙酰基胺基-6-羟基甲基噻吩[2,3-b]吡啶-2SO4甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁[0137]c)向反应瓶(250mL)中加入3a-3(16.73g,40mmol)和无水DMF(70mL)，冷却至0-5℃,加NaH(1.92g,48mmol,含量60％)，至无气体放出后，滴加MeI(3.24mL,52mmol)/DMFPE重结晶，得N-甲基-N-三氟乙酰基-3-氨基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯3a-4MeOH20:1→3:1梯度洗脱，得3-N-甲基-N-三氟乙酰基胺基-6-羟基甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸A-30(2.54g,95％)，(+)-ESI-[0139]实施例4.[0143]a)向反应瓶(250mL)中加入对溴苯乙胺1b-1(10.00g,50mmol)、KI(0.41g,2.5mmol)、K2CO3(16.58g,120mmol)和乙腈(100mL)，升温至回流，滴加BnCl(20.89g,N2烷2-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-1-甲酸叔丁酯(2.69g,8.70mmol)、Pd(dppf)Cl2Na2SO4干燥，减压浓缩得粗品。粗品过硅胶柱，CHCl3-M[0156]使用适当的合成前体，根据上文针对实施例5(中间体B-21)概述的程序合成在下[0164]b)向100mL圆底烧瓶中添加3b-2(1过夜，反应完冷却，加水(20mL)淬灭。反应溶液用EA(20mL)萃取3次，合并有机层用无水液减压浓缩后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷-甲醇10:1洗脱)，得到黄色油状物B-25[0171]b)向100mL圆底烧瓶中添加4b-2(9.52g,35mmol)、60mmol)和THF(30mL)，r.t.搅拌2h。过20mL，分出有机层减压浓缩后，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷-甲醇20:1洗脱)，得到4b-4[0173]d)向反应瓶(25mL)中加入4b-4(0.92g,4mmol)、无水THF(5mL)和NaH(0.192g,N2基氨基噻吩[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺[0188]a)向反应瓶(10mL)中加入A-2(382mg,1.2mmol)、B-1(398mg,1.2mmol)、EDCIHNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50-124.4,119.5,114.6,53.7,50.6,41.0,34.4,32.9,25.4,23.7.[0209]制备化合物I-83(NCs2CO3(326mg,1.0mmol)和1,4-二噁烷(1ml)，搅匀，加入X-PhosPd(II)(39.5mg,[0213]b)向反应瓶(5mL)中加入I-83a(21.2mg,0.033mmo[0218]实施例11.[0220]纯化的USP28以及用于测定DUBs活性的底物泛素-罗丹明110(Ubiquitin-[0221]抑制1-[(测试化合物+底物的荧光值-测试化合物(无底物)的荧光值)/DMSO对照组的平均荧光值-测试化合物(无底物)[0223]实施例12.[0225]纯化的USP25以及用于测定DUBs活性的底物泛素-罗丹明110(Ubiquitin-TritonX-100]稀释成所需浓度(其中DMSO含量≤0.5％)，预先与USP25(终浓度15nM)在96[0226]抑