团体标准 枸杞子中14种杀虫剂类残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

团体标准枸杞子中14种杀虫剂类残留量的测定液相色谱-串联质谱法团体标准编号：T/XXXXXXX—2026英文标题：GroupStandard-Determinationof14InsecticideResiduesinWolfberry-LiquidChromatography-TandemMassSpectrometryMethod1范围本标准规定了枸杞子中14种杀虫剂类残留量的液相色谱-串联质谱测定方法，包括试样制备、提取、净化、仪器测定、定性定量分析及质量控制等要求。本标准适用于枸杞子（包括鲜枸杞子、干枸杞子）中14种杀虫剂类残留量的测定，14种杀虫剂具体为：吡虫啉、啶虫脒、噻虫嗪、噻虫胺、联苯菊酯、溴氰菊酯、氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、毒死蜱、辛硫磷、马拉硫磷、乙酰甲胺磷、甲胺磷（具体种类可根据实际需求调整，测定原理一致）。本方法的检出限和定量限：14种杀虫剂的检出限为0.001~0.005mg/kg，定量限为0.003~0.015mg/kg（具体数值对应每种杀虫剂，详见附录A），满足GB2763《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》对枸杞子中相关杀虫剂残留量的检测要求。2规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。《中华人民共和国食品安全法》GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB2760食品安全国家标准食品添加剂使用标准GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8302茶取样GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测NY/T761蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定SN/T2114进出口食品中多种拟除虫菊酯类农药残留量的测定液相色谱-串联质谱法3术语和定义下列术语和定义适用于本规程。3.1检出限（LOD）在给定的置信水平下，样品中能够被检出但不一定能准确定量的杀虫剂最低浓度，本标准以信噪比（S/N）≥3时对应的浓度作为检出限。3.2定量限（LOQ）在给定的置信水平下，样品中能够被准确定量测定的杀虫剂最低浓度，其测定结果应满足精密度和准确度要求，本标准以信噪比（S/N）≥10时对应的浓度作为定量限。3.3基质匹配标准溶液以空白枸杞子试样提取液为基质，加入一定量的杀虫剂标准储备液配制而成的标准溶液，用于消除基质效应对测定结果的影响。3.4回收率在空白试样中添加已知量的杀虫剂标准物质后，按照本标准规定的方法进行提取、净化、测定，测得的实际量与添加量的比值，以百分数表示，用于评价方法的准确度。3.5相对标准偏差（RSD）多次重复测定同一试样中杀虫剂残留量的标准偏差与平均值的比值，以百分数表示，用于评价方法的精密度。4原理试样中的14种杀虫剂残留经有机溶剂提取后，采用固相萃取柱净化，去除基质干扰物；净化后的提取液经液相色谱分离后，进入串联质谱仪，采用电喷雾离子源（ESI）或大气压化学电离源（APCI）电离，选择反应监测模式（SRM）进行检测。通过保留时间和特征离子对进行定性，外标法（基质匹配标准曲线法）进行定量，实现枸杞子中14种杀虫剂残留量的快速、准确测定。不同杀虫剂的离子化模式、特征离子对（母离子、子离子）及碰撞能量详见附录A，可根据仪器型号适当优化参数。5试剂与材料除非另有说明，本标准所用试剂均为色谱纯，实验用水符合GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1甲醇（CH₃OH）：色谱纯。5.1.2乙腈（CH₃CN）：色谱纯。5.1.3乙酸乙酯（CH₃COOC₂H₅）：色谱纯。5.1.4正己烷（n-C₆H₁₄）：色谱纯。5.1.5甲酸（HCOOH）：色谱纯，纯度≥98%。5.1.6ammoniumacetate（CH₃COONH₄）：分析纯，纯度≥99%。5.1.7无水硫酸镁（MgSO₄）：分析纯，使用前在105℃烘箱中干燥4h，冷却至室温后密封保存，用于脱水。5.1.8氯化钠（NaCl）：分析纯，使用前在550℃马弗炉中灼烧4h，冷却至室温后密封保存，用于盐析。5.1.9标准储备液：分别准确称取14种杀虫剂标准品（纯度≥98%）各0.01g（精确至0.0001g），分别置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1000μg/mL的标准储备液。置于-20℃冰箱中密封保存，有效期6个月。5.1.10标准中间液：准确移取每种杀虫剂标准储备液1.00mL，置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，配制成浓度为10μg/mL的标准中间液。置于4℃冰箱中密封保存，有效期1个月。5.1.11混合标准工作液：准确移取标准中间液适量，用甲醇稀释配制成浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL的混合标准工作液，现配现用。5.1.12基质匹配混合标准工作液：按照本标准6.2、6.3规定的方法制备空白枸杞子试样提取液，准确移取混合标准工作液适量，用空白提取液稀释配制成与混合标准工作液浓度一致的基质匹配混合标准工作液，现配现用。5.2材料5.2.1固相萃取柱：C18固相萃取柱（500mg/6mL）或N-丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱（500mg/6mL），或等效固相萃取柱，用于净化提取液。5.2.2滤膜：有机相滤膜，孔径0.22μm，用于过滤净化后的提取液，去除微小杂质，保护仪器。5.2.3离心管：聚四氟乙烯离心管，规格50mL，耐有机溶剂，用于试样提取和离心操作。5.2.4容量瓶：规格10mL、50mL、100mL，玻璃材质，用于配制标准溶液和定容提取液。5.2.5移液管：规格1mL、2mL、5mL、10mL，精度符合GB/T12808规定，用于移取标准溶液和提取液。6仪器与设备6.1液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配备电喷雾离子源（ESI）和大气压化学电离源（APCI），具备选择反应监测（SRM）模式，灵敏度满足本标准检出限要求。6.2高速冷冻离心机：转速≥8000r/min，温度可调控（0~4℃），用于离心分离提取液中的杂质和脱水剂。6.3超声波提取仪：功率≥200W，频率40kHz，用于辅助提取试样中的杀虫剂残留。6.4分析天平：精度0.0001g（用于称量标准品）和0.01g（用于称量试样），符合JJF1036规定。6.5固相萃取装置：包括真空抽滤系统和固相萃取柱支架，用于固相萃取净化操作。6.6氮吹仪：具备温度调控功能（室温~80℃），用于浓缩净化后的提取液，氮气纯度≥99.99%。6.7组织捣碎机或粉碎机：用于粉碎干枸杞子试样，确保试样均匀。6.8烘箱：可调控温度（50~200℃），用于干燥无水硫酸镁。6.9马弗炉：可调控温度（300~1000℃），用于灼烧氯化钠。6.10冷藏冷冻冰箱：具备-20℃冷冻和4℃冷藏功能，用于保存标准溶液和试样。6.11涡旋振荡器：转速≥2000r/min，用于摇匀标准溶液和提取液。7试样的制备与保存7.1试样采集按照GB/T8302的规定进行取样，根据枸杞子的产地、批次、等级，随机抽取具有代表性的试样，鲜枸杞子取样量不少于1000g，干枸杞子取样量不少于500g。取样时避免试样受到污染，将抽取的试样放入干净的密封容器中，贴上标签，注明试样名称、产地、批次、取样日期、取样人等信息。7.2试样制备7.2.1鲜枸杞子：去除试样中的杂质（如枝叶、石子、腐烂果实等），洗净，用干净的纱布擦干表面水分，放入组织捣碎机中捣碎，制成匀浆，倒入干净的密封容器中，备用；若不能立即测定，置于4℃冰箱中冷藏保存，保存时间不超过24h。7.2.2干枸杞子：去除试样中的杂质，放入粉碎机中粉碎，过40目筛，混匀，倒入干净的密封容器中，备用；干试样可在室温下密封保存，避免受潮、污染。7.2.3平行试样：每批试样应制备2份平行试样，编号为试样1、试样2，平行试样的制备条件应完全一致，用于评价测定结果的精密度。7.3试样保存鲜枸杞子匀浆试样：4℃冰箱冷藏保存，保存时间不超过24h，超时应重新制备试样。干枸杞子粉碎试样：室温下密封保存，置于干燥、阴凉、通风处，避免阳光直射、受潮、污染，保存时间不超过7d。注：保存过程中，应防止试样受到杀虫剂污染，避免与其他农药、有机溶剂等接触。8测定步骤8.1提取8.1.1准确称取5.00g（精确至0.01g）制备好的试样（鲜枸杞子匀浆或干枸杞子粉末），置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入20mL乙腈，涡旋振荡1min，使试样与乙腈充分混合。8.1.2将离心管放入超声波提取仪中，在室温下超声提取15min，提取功率200W，频率40kHz，期间每隔5min涡旋振荡1次，确保提取充分。8.1.3提取完成后，向离心管中加入3g无水硫酸镁和1g氯化钠，涡旋振荡2min，使无水硫酸镁充分吸收提取液中的水分，氯化钠促进水相和有机相分层。8.1.4将离心管放入高速冷冻离心机中，在4℃、8000r/min条件下离心5min，使有机相（上层，乙腈相）与水相（下层）完全分离。8.1.5用移液管准确移取10mL上层有机相，置于干净的离心管中，备用；若提取液浑浊，可再次离心，或用0.22μm有机相滤膜过滤后备用。8.2净化8.2.1固相萃取柱活化：将C18固相萃取柱或PSA固相萃取柱安装在固相萃取装置上，先用5mL甲醇活化柱子，再用5mL乙腈平衡柱子，活化和平衡过程中，控制流速为1~2mL/min，弃去流出液。8.2.2上样与洗脱：将8.1.5中备用的10mL有机相缓慢注入活化平衡后的固相萃取柱中，控制流速为1~2mL/min，弃去流出液；待所有有机相全部过柱后，用5mL乙腈洗脱柱子，收集洗脱液于干净的离心管中，控制洗脱流速为1~2mL/min，确保杀虫剂全部洗脱。8.2.3浓缩：将收集的洗脱液放入氮吹仪中，在40℃、氮气流量5mL/min条件下氮吹至近干（剩余体积约0.5mL），避免吹干导致杀虫剂损失。8.2.4定容：用甲醇定容至1.0mL，涡旋振荡1min，使残留物充分溶解，然后用0.22μm有机相滤膜过滤，过滤后的溶液放入进样瓶中，用于液相色谱-串联质谱仪测定。8.2.5空白试验：按照上述8.1~8.2步骤，不加试样，仅加入5.00mL空白基质（鲜枸杞子空白匀浆或干枸杞子空白粉末，经检测不含目标杀虫剂），进行提取、净化、定容，制备空白试样溶液，用于扣除基质干扰，同时用于配制基质匹配标准溶液。8.3仪器测定8.3.1仪器条件优化：按照仪器操作规程，开启液相色谱-串联质谱仪，预热30min，优化仪器条件，使14种杀虫剂能够完全分离，且灵敏度满足本标准要求，参考仪器条件如下（可根据仪器型号适当调整）。（1）液相色谱条件色谱柱：C18色谱柱（100mm×2.1mm，1.8μm）或等效色谱柱；流动相：A相为0.1%甲酸水溶液（v/v），B相为甲醇；洗脱程序：梯度洗脱，洗脱程序详见附录B；柱温：40℃；进样量：5μL；流速：0.3mL/min。（2）质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子模式或负离子模式（根据杀虫剂种类选择，详见附录A）；电离电压：5500V（ESI+）或-4500V（ESI-）；离子源温度：550℃；雾化气压力：0.34MPa；气帘气压力：0.24MPa；碰撞气：氮气，纯度≥99.99%；监测模式：选择反应监测模式（SRM），每种杀虫剂选择1个母离子和2个子离子（定量离子和定性离子），碰撞能量、去簇电压等参数详见附录A。8.3.2标准曲线绘制：按照优化后的仪器条件，依次测定基质匹配混合标准工作液（0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL），以标准工作液的浓度为横坐标（x），对应的定量离子峰面积为纵坐标（y），绘制基质匹配标准曲线，计算回归方程和相关系数（r）。相关系数r应≥0.998，否则应重新配制标准溶液，重新绘制标准曲线。8.3.3试样测定：按照与标准曲线绘制相同的仪器条件，测定空白试样溶液、试样溶液（包括平行试样），记录每种杀虫剂的定量离子峰面积和定性离子峰面积。8.3.4平行测定：对2份平行试样，按照上述8.1~8.3步骤进行平行测定，记录测定结果，计算平行试样的相对标准偏差（RSD）。9定性与定量分析9.1定性分析9.1.1保留时间定性：试样溶液中目标杀虫剂的保留时间，与基质匹配混合标准工作液中对应杀虫剂的保留时间偏差应≤±2.5%，否则不能定性为该杀虫剂。9.1.2特征离子对定性：试样溶液中目标杀虫剂的定量离子与定性离子的峰面积比，与基质匹配混合标准工作液中对应杀虫剂的定量离子与定性离子的峰面积比偏差应≤±20%。9.1.3定性判定：只有同时满足上述9.1.1和9.1.2要求，才能判定试样中含有该种杀虫剂；若仅满足其中一项，或均不满足，则判定试样中不含该种杀虫剂，或需重新测定确认。9.2定量分析9.2.1计算方法：根据试样溶液中目标杀虫剂的定量离子峰面积，代入基质匹配标准曲线的回归方程，计算出试样溶液中该杀虫剂的浓度（μg/mL），再根据下列公式计算试样中该杀虫剂的残留量（mg/kg）。X=式中：X——试样中目标杀虫剂的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C——由标准曲线计算得到的试样溶液中目标杀虫剂的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——试样溶液的最终定容体积，单位为毫升（mL），本标准中V=1.0mL；f——试样的稀释倍数，本标准中未进行稀释，f=1；若提取液进行了稀释，需根据实际稀释倍数计算f；m——称取的试样质量，单位为克（g）；1000——单位换算系数（1mg=1000μg）。9.2.2结果表示：测定结果保留3位有效数字；若测定结果低于定量限，则以“未检出”表示，同时注明该杀虫剂的定量限；若测定结果高于定量限，需按上述公式计算准确数值，并与GB2763规定的最大残留限量进行对比。9.2.3平行试样结果：2份平行试样的测定结果相对标准偏差（RSD）应≤15%，否则应重新制备平行试样，重新测定；若重新测定后RSD仍＞15%，需排查测定过程中的干扰因素（如试样不均匀、提取不充分、仪器波动等），直至满足要求。10质量控制与质量保证10.1空白试验控制每批试样测定时，必须同时进行空白试验（不加试样，其余步骤相同），空白试验中不得检出目标杀虫剂；若空白试验中检出某一种或多种杀虫剂，说明测定过程中存在污染，需排查污染源（如试剂、仪器、容器、环境等），消除污染后重新测定该批试样。10.2回收率控制每批试样测定时，应选取空白试样，进行加标回收试验，加标水平分为低、中、高三个水平，低水平为定量限的1倍，中水平为定量限的5倍，高水平为定量限的10倍，每个加标水平制备3份平行试样。14种杀虫剂的加标回收率应在70%~120%之间，相对标准偏差（RSD）应≤15%，否则说明方法的准确度和精密度不满足要求，需优化提取、净化或仪器条件，重新进行加标回收试验，直至满足要求。10.3标准曲线控制标准曲线的相关系数r应≥0.998，否则应重新配制标准溶液，重新绘制标准曲线；每测定10个试样，需插入1个中等浓度（0.1μg/mL）的基质匹配标准工作液进行校准，若校准结果与标准曲线计算结果的偏差≤±10%，可继续测定；若偏差＞±10%，需重新绘制标准曲线，再继续测定。10.4仪器性能控制测定前，需对液相色谱-串联质谱仪进行性能检查，包括灵敏度、分辨率、稳定性等，确保仪器性能符合测定要求；测定过程中，若仪器出现异常（如峰形畸变、基线漂移、灵敏度下降等），应立即停止测定，排查故障，修复后重新进行性能检查，合格后方可继续测定。10.5试剂与材料控制所用试剂均应符合本标准规定的纯度要求，实验用水符合GB/T6682规定的一级水；固相萃取柱、滤膜等材料应符合质量要求，使用前需进行活化、平衡等处理，确保净化效果；标准品的纯度≥98%，标准溶液的配制应准确，严格按照本标准规定的步骤操作，标注配制日期和有效期，过期标准溶液不得使用。11检出限与定量限本方法中14种杀虫剂的检出限（LOD）和定量限（LOQ）根据空白试样加标试验确定，以信噪比（S/N）≥3为检出限，S/N≥10为定量限，具体数值详见附录A。当试样中杀虫剂残留量低于检出限时，判定为“未检出”；当残留量介于检出限和定量限之间时，需重新测定，若仍检出，可定性为“检出”，但不能准确定量，需注明“检出但低于定量限”；当残留量高于定量限时，可准确定量，计算具体残留量。12允许误差12.1平行试样允许误差：2份平行试样的测定结果相对标准偏差（RSD）应≤15%，若超出允许误差，需重新制备平行试样，重新测定。12.2实验室间允许误差：不同实验室采用本标准方法测定同一批试样，测定结果的相对偏差应≤20%，若超出允许误差，需排查实验室间的差异（如仪器条件、试剂纯度、操作步骤等），重新测定确认。13试验报告试验报告应完整、准确、清晰，包括以下内容：13.1基本信息：报告编号、试样名称、产地、批次、等级、取样日期、取样人、测定日期、测定人、审核人、批准人等。13.2试样信息：试样的制备方法、保存条件、保存时间等。13.3仪器与试剂信息：所用仪器的型号、编号、校准情况；试剂的名称、纯度、生产厂家；标准品的名称、纯度、生产厂家等。13.4测定条件：液相色谱条件（色谱柱、流动相、洗脱程序、柱温、进样量、流速等）；质谱条件（离子源、电离电压、离子源温度、监测模式、特征离子对、碰撞能量等）。13.5测定结果：空白试验结果、平行试样测定结果、标准曲线参数（回归方程、相关系数）、加标回收试验结果、每种杀虫剂的残留量（注明“未检出”或具体数值）、定量限等。13.6质量控制结果：空白试验、加标回收、标准曲线校准、仪器性能检查等质量控制项目的结果，评价测定结果的可靠性。13.7结论：根据测定结果，结合GB2763规定的最大残留限量，判定试样中14种杀虫剂残留量是否合格；若有