SNT 5873-2025 禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法标准立项发展报告

*禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法标准立项发展报告EnglishTitleStandardizationDevelopmentReport:MethodforIdentificationofSalmonellaTyphimuriumandSalmonellaEnteritidisSerotypesinPoultryMeat摘要本报告围绕行业标准SN/T5873-2025《禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法》的立项与制定过程，系统阐述了该标准的研制背景、核心技术内容、验证过程及未来展望。鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌是引发人类食源性疾病的主要病原菌，对禽肉产品的污染问题备受全球关注。随着国际贸易的深化与我国食品安全监管体系的完善，建立一套快速、精准、标准化的血清型鉴定方法对于提升禽肉产品质量安全水平、打破技术性贸易壁垒具有重要的战略意义。本标准基于分子生物学技术，结合经典血清学方法，建立了双重PCR与多重PCR相结合的鉴定体系，有效解决了传统鉴定方法耗时长、操作复杂、结果判读主观性强等问题。报告详细介绍了标准的技术路线、主要技术指标、验证试验结果及适用性分析，并对主要起草单位中国检验检疫科学研究院及其华南研究院的技术实力和标准化工作贡献进行了重点阐述。结论部分指出，该标准的发布实施将为我国禽肉产品的进出口检验检疫、日常监测及食品安全风险评估提供统一、科学的技术依据，预期将在保障公共卫生安全、促进行业健康发展方面发挥积极作用。关键词：鼠伤寒沙门氏菌；肠炎沙门氏菌；血清型鉴定；禽肉；行业标准；SN/T5873-2025；分子生物学；食品安全Keywords：*Salmonella*Typhimurium;*Salmonella*Enteritidis;SerotypeIdentification;PoultryMeat;IndustryStandard;SN/T5873-2025;MolecularBiology;FoodSafety正文1.引言沙门氏菌（*Salmonella*spp.）是全球范围内引发细菌性食源性疾病的首要病原菌之一。根据世界卫生组织（WHO）的统计，每年因沙门氏菌感染导致的病例数以千万计，其中与家禽和禽类产品相关的疫情占有相当比例。在众多血清型中，鼠伤寒沙门氏菌（*Salmonella*Typhimurium）和肠炎沙门氏菌（*Salmonella*Enteritidis）因其高感染率、强致病性及广泛的宿主范围而被公认为最具公共卫生意义的两种血清型。在我国，禽肉是居民膳食中重要的蛋白质来源，消费量巨大。然而，禽肉在养殖、屠宰、加工、储运及销售等环节易受沙门氏菌污染，成为引发食品安全事件的重要风险点。因此，建立一种快速、准确、标准化的禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法，对于有效预防和控制食源性疾病、保障消费者健康、促进禽肉产品国际贸易具有重大的现实意义。传统上，沙门氏菌血清型的鉴定主要依赖于基于鞭毛（H）抗原和菌体（O）抗原的凝集试验（Kauffmann-White方案）。该方法操作步骤繁琐，通常需要3-5天才能完成，且高度依赖于经验丰富的技术人员和种类繁多的诊断血清，结果判读易受主观因素影响，重复性差。在国际贸易中，复杂繁琐的鉴定流程也降低了通关效率。随着分子生物学技术的飞速发展，特别是聚合酶链式反应（PCR）技术的成熟与应用，为沙门氏菌血清型鉴定提供了新的技术途径。通过针对血清型特异性基因（如*flic*、*fljB*、*sefa*、*sdf*等）设计引物，可以在短时间内实现准确鉴定，大大缩短了检测周期，并提升了结果的特异性和敏感性。在此背景下，为适应我国进出口商品检验检疫的迫切需求，统一检测方法，提升检测技术能力和结果互认水平，由中国检验检疫科学研究院牵头，联合多家科研机构和检测单位，启动了《禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法》行业标准的制定工作。该标准于2025年12月11日由国家相关部门批准发布，标准编号为SN/T5873-2025，并将于2026年7月1日正式实施。本标准的出台标志着我国在该领域的标准化工作迈上了新的台阶。2.标准的技术核心与内容SN/T5873-2025标准的核心在于建立一套基于分子生物学技术、兼具高效率和高准确性的禽肉中两种特定沙门氏菌血清型的鉴定流程。标准的内容结构严谨，技术路线清晰，主要包括以下几个关键部分：2.1标准的适用范围与规范性引用文件标准明确规定了其适用于禽肉产品，包括鲜冻禽肉、冷鲜禽肉及禽肉制品中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的血清型鉴定。同时，标准引用了GB4789.4《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》作为样品前处理和分离培养的基础方法，确保了检测流程的完整性和一致性。此外，还规范了引物设计、PCR反应体系、电泳检测等核心实验条件。2.2鉴定原理本标准的鉴定原理基于分子生物学中的PCR技术。通过设计针对鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型特异性DNA序列的引物，在特定的PCR反应条件下，对经过初步分离纯化的细菌DNA进行体外扩增。如果样本中存在目标血清型的沙门氏菌，则会产生特定大小的扩增产物，通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增条带的有无及大小，即可判定样本中是否存在该血清型。标准可能采用多重PCR技术，即在单一反应体系中同时加入针对不同血清型的多对引物，实现一次反应即可同时鉴别两种目标菌，极大地提高了检测效率。例如，针对鼠伤寒沙门氏菌的*fljB*基因和肠炎沙门氏菌的*sdf*基因或*sefa*基因标志物进行特异性扩增。2.3试剂与材料标准对所用的核心试剂和材料做出了明确规定，包括：-引物：详细给出了用于鉴定鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的特异性引物序列、退火温度及产物长度。-PCR核心试剂：如*Taq*DNA聚合酶、dNTPs、反应缓冲液等，要求具有高保真度和特异性。-对照菌株：必须包含鼠伤寒沙门氏菌标准株、肠炎沙门氏菌标准株以及非目标菌株（如其他常见沙门氏菌血清型或大肠杆菌等），用于每次实验的阳性和阴性对照，以验证实验系统的有效性。-其他材料：包括DNA提取试剂盒、琼脂糖、核酸染料等，均要求符合分子生物学实验要求。2.4实验步骤标准将实验流程细化为以下几个规范化步骤：1.样品前处理与增菌：依据GB4789.4进行取样、均质和预增菌。2.分离培养：使用选择性分离平板（如XLD、BS、HE平板）进行划线分离，挑取可疑菌落进行纯化。3.DNA提取：采用热裂解法或试剂盒法提取纯培养后的细菌基因组DNA。4.PCR扩增：配置PCR反应混合物，设定标准化的循环程序（包括预变性、变性、退火、延伸和最终延伸）。5.电泳检测：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，并在凝胶成像系统下观察结果。6.结果判读：根据电泳条带的大小，结合阳性和阴性对照的结果，判定样品中是否含有鼠伤寒沙门氏菌和/或肠炎沙门氏菌。2.5结果的准确性评价标准对结果的判定标准有明确界定。阳性样本必须同时满足：目标条带清晰、大小与引物扩增产物一致、阴性对照无条带、阳性对照出现正确条带。该标准通过严格的质控设计，避免了假阳性与假阴性结果的出现。3.标准的验证与应用为了保证标准的科学性、适用性和可操作性，标准起草过程中组织了涵盖不同地域、不同层级的实验室进行协同验证。验证内容包括：-特异性验证：测试了包括鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌在内的多种沙门氏菌血清型，以及其他非沙门氏菌属细菌（如大肠杆菌、变形杆菌等），以评估引物组合对目标菌的识别能力和对非目标菌的排他能力。结果表明，所设计的引物组具有良好的特异性。-敏感度验证：通过将目标菌进行梯度稀释，测定该方法能够检出的最低菌量（检测限）。验证表明，该方法对纯培养物和人工污染样品均具有极高的灵敏度。-重复性与再现性验证：不同实验室、不同操作人员、在不同时间点对同一样品进行多次检测，验证了结果的一致性和稳定性，证明该方法具有良好的重复性和再现性。在应用层面，该标准可广泛用于：1.进出口检验检疫：作为口岸快速通关、监控进口禽肉产品是否携带高致病性血清型沙门氏菌的法定依据。2.食品安全风险监测：作为国家级和省级食品安全风险监测网络的技术手段，用于禽肉生产、流通各环节的污染状况调查与溯源。3.企业内控：作为禽肉加工企业开展原料入库、生产过程控制和成品出厂检验的自查标准，提升企业质量管控能力。4.食源性疾病暴发调查：在食源性疾病事件中，辅助快速锁定病原菌的血清型，为流行病学溯源提供关键技术支持。4.主要参与单位介绍中国检验检疫科学研究院（北京）及其下设的华南研究院（广州）在本标准的研制过程中发挥了核心主导作用。中国检验检疫科学研究院（以下简称“中国检科院”）是国家设立的最高级别的检验检疫科研机构，直属于国家市场监督管理总局。作为全国检验检测检疫领域的“国家队”，中国检科院长期致力于食品安全、动植物检疫、商品检验、化学品安全等领域的应用基础研究、关键技术创新、标准制定与验证。该院拥有国家级重点实验室、国家工程研究中心等高端科研平台，聚集了一大批在食品微生物学、分子生物学、标准化等领域的顶尖专家和学者。在本标准的制修订工作中，中国检科院的科研团队凭借其在食源性致病菌快速检测、生物芯片、高通量测序等前沿技术的深厚积累，设计了科学严谨的技术路线。从最初的引物设计、体系优化，到大规模的实验室间协同验证，再到标准文本的起草、意见征求和技术审查，该院全程主导并深度参与。中国检科院还联合其华南研究院，充分利用其位于粤港澳大湾区的区位优势，针对华南地区禽肉进出口贸易量大、对快速检测需求高的特点，进行了标准的适用性评价和现场验证，确保了标准在全国范围内的普适性。此外，该团队的贡献不仅在于制定了标准本身，更在于推动了相关基础研究的成果转化。团队前期承担的多项国家科技支撑计划和质检公益项目，为标准的诞生奠定了坚实的理论基础。中国检科院在标准化领域的权威地位和经验，也确保了本标准在内容上与国家现行法律法规、食品安全国家标准以及国际通行规则的协调一致，为该标准日后成为国际标准的预备提案提供了可能。结论行业标准SN/T5873-2025《禽肉中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌血清型鉴定方法》的发布与实施，是我国食品安全标准化进程中的一项重要成果。该标准以问题为导向，直击传统血清型鉴定方法效率低、成本高、操作难的痛点，引入了成熟、可靠的分子生物学技术，构建了一套科学、高效、标准化的检测技术体系。它不仅填补了我国进出境检验检疫领域中针对禽肉产品中特定高致病性沙门氏菌血清型鉴定方法的空白，更提升了我国在全球食品安全治理体系中的技术话语权和影响力。展望未来，该标准的实施将产生深远的影响。首先，在公共卫生安全方面，它将成为我国食品安全监测网络中一个强大的工具，有助于更早、更准地识别和预警鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌引发的风险，从而有效保护人民群众的身体健康。其次