SCT 9453-2025 水产养殖环境(水体、底泥)中地西泮及其代谢物的测定 液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告

水产养殖环境（水体、底泥）中地西泮及其代谢物的测定液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofDiazepamandItsMetabolitesinAquacultureEnvironment(WaterandSediment)byLiquidChromatography-TandemMassSpectrometry摘要随着我国水产养殖业的集约化、规模化发展，水产养殖环境中药物残留问题日益受到社会关注。地西泮作为一种苯二氮䓬类镇静剂，因其非法使用导致的生态环境风险和食品安全隐患已成为行业监管的重点难点。本报告围绕行业标准SC/T9453-2025《水产养殖环境（水体、底泥）中地西泮及其代谢物的测定液相色谱-串联质谱法》的立项背景、编制过程和技术内容展开系统阐述。该标准由中华人民共和国农业农村部发布，于2025年4月27日正式发布，2025年8月1日起实施，确立了基于液相色谱-串联质谱技术的水产养殖水体及底泥样品中地西泮、去甲地西泮、替马西泮、奥沙西泮等物质的同时测定方法。本报告详细分析了当前水产养殖环境地西泮残留检测的技术现状与标准缺口，系统介绍了标准的主要技术内容、方法原理、性能指标和应用价值，并对标准的实施前景和后续发展方向进行了展望。该标准的发布实施填补了我国水产养殖环境基质中地西泮检测标准的技术空白，为水产品质量安全监管和养殖环境评价提供了科学依据。关键词：水产养殖环境；地西泮；代谢物；液相色谱-串联质谱法；行业标准；药物残留检测；环境监测Keywords:AquacultureEnvironment;Diazepam;Metabolites;LiquidChromatography-TandemMassSpectrometry;IndustryStandard;DrugResidueDetection;EnvironmentalMonitoring一、引言1.1立项背景与政策导向水产品质量安全关系人民群众身体健康和生命安全，是食品安全工作的重要组成部分。近年来，农业农村部持续加强水产养殖用兽药监管力度，先后印发《关于加强水产养殖用投入品监管的通知》（农渔发〔2021〕1号）、《全国兽用抗菌药使用减量化行动方案（2021—2025年）》等文件，明确要求严厉打击水产养殖违法使用禁用药品和其他化合物、停用兽药的行为。2023年，农业农村部发布《水产养殖用药明白纸（2023年）》，进一步规范了水产养殖用药管理。地西泮（Diazepam）又名安定，属于苯二氮䓬类中枢神经抑制药物，在临床上具有镇静、抗焦虑、抗惊厥和肌肉松弛等作用。该药物在水产养殖中虽未获批使用，但因其具有降低水产品运输应激反应、抑制水产品活动从而减少代谢消耗等效果，在实际养殖和运输环节存在非法使用的现象。地西泮在水体中化学性质较为稳定，可长时间残留于养殖水体和沉积物中，并通过食物链在生物体内蓄积。人体长期摄入含有地西泮残留的水产品，可能导致嗜睡、头昏、乏力等不良反应，甚至产生依赖性，对肝脏和神经系统造成损伤。此外，养殖环境中残留的地西泮还可能诱导细菌产生耐药性，破坏微生态平衡，对生态环境造成潜在威胁。在此背景下，建立水产养殖环境（水体、底泥）中地西泮及其代谢物的高效、灵敏、准确的检测技术标准，成为支撑监管执法、保障水产品质量安全和生态环境安全的迫切需求。1.2标准制定目的本标准（SC/T9453-2025）的制定旨在解决以下关键问题：（1）填补标准空白：我国现有的地西泮检测标准主要针对水产品可食部分（肌肉、肝脏等）基质，对于养殖环境（水体、底泥）中地西泮及其代谢物的检测尚无专门标准，无法满足养殖环境质量评价和溯源监管的需要。（2）统一检测方法：由于缺乏统一的标准方法，各检测机构在养殖环境样品中地西泮检测方面方法不一、设备配置不同、质量参差不齐，检测结果可比性和互认性差，亟需建立统一规范的标准方法。（3）覆盖代谢产物：地西泮进入环境后，可通过生物和非生物途径代谢转化生成去甲地西泮（Nordazepam）、替马西泮（Temazepam）、奥沙西泮（Oxazepam）等主要代谢产物，这些代谢产物同样具有药理活性和生态风险。建立同时测定母体化合物及其代谢物的方法，有助于全面评估养殖环境的药物残留状况。（4）支撑监管执法：为各级渔业主管部门、水产技术推广机构、检验检测机构提供科学依据和技术支撑，服务于水产养殖尾水排放监测、养殖环境本底调查、水产品质量安全风险监测等监管需求。二、标准编制过程2.1立项阶段本标准的编制工作严格遵循《国家标准管理办法》和《行业标准管理办法》的规定程序。根据水产行业标准制修订计划，由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口管理，组织相关科研院所和检测机构成立标准起草工作组。立项前期，起草工作组系统调研了国内外相关标准和文献资料，包括：-国内标准：GB31656.4-2021《食品安全国家标准水产品中地西泮残留量的测定液相色谱-串联质谱法》、SC/T9434-2022《水产养殖环境中地西泮的测定酶联免疫吸附法》等；-国际标准和法规：欧盟EU2019/1871号法规（动物源性食品中药物残留限量规定）、日本肯定列表制度中关于地西泮的限量要求、国际食品法典委员会（CAC）相关标准等；-国内外方法学研究文献：近年来关于水体及沉积物中苯二氮䓬类药物的固相萃取-液相色谱-串联质谱检测方法的研究论文。经充分调研和可行性论证，确认了立项的必要性和技术可行性，完成了标准草案和编制说明的编写工作。2.2起草阶段起草工作组由来自水产科学研究、环境监测、检验检疫等领域的技术专家组成。工作组对标准的技术路线、方法学参数、验证方案等进行了反复研究和论证，重点解决了以下技术难题：（1）水体样品前处理方法优化：针对养殖水体基质复杂、目标物含量低的特征，比较了不同固相萃取柱（HLB、MCX、C18等）的富集净化效果，优化了上样流速、淋洗溶剂、洗脱溶剂等关键参数，建立了高回收率、低基质效应的前处理方法。（2）底泥样品净化方案设计：底泥基质含有大量腐殖酸、有机质和矿物质，是检测的难点基质。通过对比QuEChERS法、固相萃取法、凝胶渗透色谱法等多种净化方案，确定采用改进的QuEChERS结合固相萃取净化的联合方案，有效降低了基质干扰。（3）色谱-质谱条件优化：通过对不同色谱柱（C18、HSST3、BEHC18等）和流动相体系（甲醇-水、乙腈-水，含不同浓度甲酸/甲酸铵）的系统优化，实现了地西泮及其四种代谢物的良好色谱分离和稳定质谱响应。（4）内标物选择：选用氘代同位素内标（如地西泮-d5）进行校正，有效消除了基质效应和前处理过程中的损失，提高了定量准确性。（5）方法验证：组织多家实验室进行协同验证实验，对方法的检出限、定量限、线性范围、回收率、精密度、基质效应等技术参数进行全面验证，确保方法的科学性、适用性和可靠性。2.3征求意见与审查阶段标准草案完成后，通过全国水产标准化技术委员会向行业内外广泛征求意见。征求意见范围涵盖水产科研院所、大专院校、检验检测机构、渔业行政主管部门、水产养殖企业等。起草工作组对反馈意见逐条进行认真处理和回复，对合理意见予以采纳并对标准文本进行修改完善。在完成征求意见处理的基础上，形成标准送审稿，提交全国水产标准化技术委员会组织专家审查。审查专家对标准的技术内容、编写格式、规范性等方面进行了严格把关，一致同意通过审查。随后，按照程序完成标准报批稿的编制和报批工作。2.4发布与实施2025年4月27日，中华人民共和国农业农村部正式发布本行业标准，编号为SC/T9453-2025，自2025年8月1日起实施。三、标准主要技术内容3.1标准适用范围本标准规定了水产养殖环境（水体、底泥）中地西泮（Diazepam）及其代谢物去甲地西泮（Nordazepam）、替马西泮（Temazepam）、奥沙西泮（Oxazepam）残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于淡水养殖和海水养殖环境中的养殖水体、排放尾水以及养殖池塘底泥中地西泮及其代谢物的测定。方法的检出限和定量限能够满足养殖环境常规监测和应急监测的需求。3.2方法原理水体样品：取一定体积的水样（通常为100mL），经滤膜过滤去除悬浮颗粒物后，用稀酸或缓冲溶液调节pH值，使目标物呈分子状态，以利于固相萃取富集。将水样以恒定流速通过经活化的亲水-亲脂平衡（HLB）固相萃取柱，目标化合物被保留在萃取柱上，用水和适当比例的甲醇-水溶液淋洗除去极性干扰杂质，再用甲醇或乙腈洗脱目标物。洗脱液经氮吹浓缩后用流动相复溶，供液相色谱-串联质谱仪测定。底泥样品：取冷冻干燥或新鲜底泥样品，准确称取一定量（如5g），加入适量内标溶液和乙酸铵缓冲溶液，涡旋混匀后加入乙腈进行提取，辅以超声辅助萃取，离心后取上清液。提取液经QuEChERS分散固相萃取初步净化（使用C18和PSA吸附剂）、再经固相萃取柱进一步净化，洗脱液氮吹浓缩后用流动相复溶，供仪器测定。目标化合物在液相色谱系统中经C18反相色谱柱进行分离，在电喷雾离子源（ESI）正离子模式下电离，以多反应监测（MRM）模式进行质谱检测。每个化合物选取两个特征离子对（一个定量离子对、一个定性离子对），以保留时间和离子对丰度比进行定性确证，以同位素内标法或外标法进行定量分析。3.3主要技术参数标准规定了以下关键技术参数要求：-色谱条件：推荐使用C18色谱柱（如ACQUITYUPLCHSST3，2.1mm×100mm，1.8μm或等效色谱柱）；柱温：35~40℃；流动相A为含0.1%甲酸的5mmol/L甲酸铵水溶液，流动相B为甲醇（或乙腈）；流速：0.2~0.3mL/min；梯度洗脱程序在7~10分钟内完成全部分离。-质谱条件：离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子模式；监测方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等参数以各化合物的质谱响应最优为准进行优化。-方法性能指标：-检出限（LOD）：水体中地西泮及其代谢物不大于0.5ng/L，底泥中不大于0.05μg/kg-定量限（LOQ）：水体中地西泮及其代谢物不大于1.0ng/L，底泥中不大于0.1μg/kg-线性范围：1~100ng/L（水体）或0.1~20μg/kg（底泥），相关系数r≥0.995-回收率：三个添加水平下，水体样品平均回收率在70%~120%之间，底泥样品平均回收率在60%~110%之间-精密度：实验室内部相对标准偏差（RSD）不大于15%，实验室间相对标准偏差不大于20%3.4质量控制要求标准设置了完善的质量控制措施，包括：（1）空白试验：每批样品至少做一个空白试验，确认无目标物污染；（2）基质加标：对于每批样品（不超过20个），至少做一个基质加标样品，加标回收率应在方法验证确定的范围内；（3）内标校正：所有样品在提取前加入适量内标溶液，以校正前处理和基质效应的影响，内标回收率应在一定范围内（如50%~150%）；（4）仪器稳定性检查：每批样品分析前后应注入标准工作溶液，检查仪器响应稳定性，确认仪器状态良好后再进行样品分析；（5）平行样测定：每个样品至少进行平行双样测定，平行测定结果的相对偏差应符合标准规定的要求。3.5检出限和定量限的确定依据标准中检出限和定量限的确定基于以下考虑：一是仪器灵敏度水平，即使用现行主流品牌和型号的液相色谱-串联质谱仪（如WatersXevo系列、ABSciexTripleQuad系列、Agilent6400系列、ThermoTSQ系列等）在实际条件下可稳定达到的灵敏度水平；二是监管需求，即能够满足养殖环境背景值调查和污染溯源的最低浓度要求；三是参考国内外相关文献报道和已有标准中同类基质的目标物检出限水平。四、主要编制单位介绍4.1标准编制单位概况本标准的主要起草单位包括中国水产科学研究院黄海水产研究所（或相应牵头单位，以标准正式文本为准）等国内水产养殖环境监测和水产品质量安全研究领域的权威机构。其中，中国水产科学研究院黄海水产研究所成立于1947年，是我国成立最早的综合性海洋水产研究机构之一，坐落于山东青岛。研究所隶属于农业农村部中国水产科学研究院，是国家级公益性水产科研机构，在渔业资源与生态环境研究、水产品质量安全监测与风险评估、水产健康养殖技术等领域具有深厚的科研积累和广泛的社会影响力。4.2技术实力与科研积累平台建设：研究所建有国家水产品质量监督检验中心、农业农村部水产品质量安全风险评估实验室、农业农村部水产品质量安全检测与评价重点实验室等多个国家级和省部级科研平台，拥有国际先进水平的液相色谱-串联质谱仪、气相色谱-串联质谱仪、电感耦合等离子体质谱仪等高精尖检测设备，为标准的研制提供了坚实的硬件支撑。科研团队：研究所拥有一支结构合理、学术水平高的科研团队，现有中国工程院院士、国家杰出青年科学基金获得者、农业农村部产业技术体系岗位科学家等高层次人才。团队成员在水产品药物残留检测技术、环境污染物分析与风险评估等领域承担了大量国家级和省部级科研项目，积累了丰富的方法学研究经验和标准研制经验。科研成果：研究所近年来在兽药残留检测技术研究方面取得了一系列重要成果，主持或参与制修订国家标准、行业标准数十项，在国内外学术期刊发表研究论文数百篇，获国家科技进步奖和省部级科技奖励多项。团队在苯二氮䓬类等镇静剂类药物多残留同时检测技术、复杂环境基质样品前处理技术等方面形成了系统的技术储备。4.3在标准研制中的主要贡献作为标准的牵头起草单位，研究所主要承担了以下工作：-组织开展标准立项可行性研究和前期技术调研；-设计并实施方法学研究实验方案；-开展样品前处理条件的系统优化；-组织协调多家实验室开展协同验证实验；-起草标准文本及编制说明；-负责标准征求意见阶段的技术答疑和意见处理；-参与标准审查阶段的技术汇报和答疑。五、标准应用前景分析5.1在水产品质量安全监管中的应用该标准可为各级渔业主管部门开展水产养殖环境质量监测提供技术依据。通过定期对养殖水体、排放尾水和池塘底泥中地西泮及其代谢物进行监测，可有效评估养殖区域地西泮污染状况，及时发现非法用药行为，为水产品质量安全源头治理提供数据支撑。5.2在养殖环境评价与修复中的应用标准可用于水产养殖环境本底调查和污染风险评估，为养殖池塘改造、底泥疏浚、养殖尾水处理等环境修复工程的决策提供科学依据。同时，对于拟新建养殖区域的环境评价，该标准也是重要的技术参考。5.3在市场准入和国际贸易中的应用随着国际社会对水产品中药物残留