临床儿童测梅毒检测方法、TRUST与TPPA试验特点及意义

临床儿童测梅毒检测方法、TRUST与TPPA试验特点及意义梅毒螺旋体（TP)属于密螺旋体属苍白螺旋体中的苍白亚种，是引起人类梅毒的病原体。近年来梅毒发病率呈逐年上升趋势。在病程的不同阶段有不同的临床症状，梅毒的病程分为3个时期。一期梅毒：主要症状是在入侵部位发生硬下疳，潜伏期一般为2~4周，当机体对其发生免疫反应时，下疳消失。腹股沟或皮损近卫淋巴结肿大。二期梅毒：TP随血液循环播散，表现为皮肤粘膜损害，全身浅表淋巴结可肿大，此时梅毒螺旋体在体内大量繁殖。三期梅毒：梅毒螺旋体会侵入到神经系统和心血管系统造成极大损害，同时在多个器官会产生树胶肿，此阶段传染性不强，且机体内梅毒数量极少，不易检测到。绝大多数梅毒螺旋体感染是通过性途径传播的，也可以通过输入梅毒螺旋体的传染性血液制品而感染。神经梅毒可出现在梅毒的早期和晚期，如果没有及时合理的治疗，梅毒将发展为多个阶段。因此，梅毒疾病的早期检测对于控制梅毒传播和及时治疗具有重要意义。梅毒螺旋体检测方法目前临床实践中，梅毒螺旋体实验室诊断主要采用病原学和血清学两种。病原学检查梅毒螺旋体的结果最直接，包括暗视野显微镜法(DFM)、直接免疫荧光试验(DFA)、自动聚焦显微镜(FFM)等方法。

梅毒螺旋体很难在体外培养，所以其诊断主要为血清学检测，包括特异性抗体和非特异性抗体检测。人体感染梅毒螺旋体后，体内会产生两种抗体：一种是特异性抗梅毒抗体（IgM、IgG抗体），一种是非特异性抗心磷脂抗体。根据人体感染梅毒螺旋体后外周血清出现的非特异性抗体与特异性抗体，将梅毒血清检测方法分为非梅毒螺旋体抗原血清试验与梅毒特异性抗体检测。其中，非梅毒螺旋体抗原血清试验有甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、性病研究实验室试验（VDRL）、快速血浆反应素纸片试验(RPR)、不加热血清反应素试验(USR)，是以心磷脂为抗原，对待检样本中是否出现抗心磷脂抗体进行检测；梅毒特异性抗体检测有梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）、酶联免疫吸附试验（TP-ELISA），荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验和重组免疫印迹法等，以梅毒螺旋体的成分为抗原，对待检样本中的抗梅毒螺旋体抗体进行检测。

TRUST和TPPA是什么梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）：TPPA是梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）的改良版，用玫瑰红色的明胶颗粒替换了TPHA中使用的红细胞，使结果更易于肉眼观察。TPPA使用双抗体夹心法，因此具有较高的敏感性与特异性，是目前国内外公认的梅毒血清确认试验。TPPA单独阳性只能说明在感染或曾经感染过，而不能判断梅毒活动与否。当人体感染梅毒螺旋体后，体内便会终身有抗体存在，使用该方法对患者进行检测不会受治疗方法、病情发展及干预措施等因素的影响，检测结果有良好的稳定性，假阳性较少，对各期梅毒的检出率都较高。TPPA可在临床实践中快速诊断梅毒，从样品处理到结果只需约120min,不需要特殊设备的配合，但是，该方法自动化检测的难度较高，无法储存原始数据，需检验人员用肉眼进行观察，当样本数量较多时，便难以实现批量筛查，不仅操作步骤烦琐，而且所花时间较长，难以达到快速检测的目的，不适合用于大规模筛选性检测。TPPA试剂盒价格高昂，也一定程度上限制了其在基层医院的推广使用。

甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）：TRUST法所用的抗原为心磷脂，其可经对抗心磷脂抗体检查判断患者是否发生梅毒，此法操作较为简便，价格低廉，易被患者接受，其滴度变化与梅毒治疗情况呈正相关，即随着梅毒的治愈，抗体滴度下降，可用于监测患者病情变化与疗效评估。但人体感染TP4~8周血清内才会出现一定数量的非特异性抗体和特异性抗体，而治疗后非特异性抗体会转化为阴性，降低TRUST检测的敏感性，不适用于潜伏期和Ⅰ期、Ⅲ期梅毒检查，当患者处于梅毒螺旋体感染的早期或潜伏期，使用该方法检测时若非特异性抗体滴度不足，难以检测出阳性，便会出现假阴性的结果，误诊、漏诊风险较大。TRUST法影响因素比较多，磷脂存在于机体所有细胞中，非梅毒性疾病也可产生类脂体抗体与磷脂抗原反应产生梅毒血清生物学假阳性。免疫系统相关疾病如类风湿关节炎、麻风、混合结缔组织病等都会引起假阳性。

梅毒检测结果临床意义表1梅毒诊断的两种血清学试验结果及意义

表2.不同分期梅毒的血清学实验室试验结果TRUST阳性，TPPA阳性需结合患者流行病史、临床症状，基本可以诊断梅毒，说明正在感染梅毒，具有较强传染性。梅毒处理的一般原则为：及早发现，及时正规治疗，越早治疗效果越好；剂量足够，疗程规则，不规则治疗可增加复发风险及促使晚期梅毒损害提前发生；治疗后要经过足够时间的追踪观察（包括全身体检和复查非梅毒螺旋体血清学试验滴度）；所有梅毒患者均应做HIV咨询和检测；患者所有性伴应同时进行检查和相应治疗。

2.TRUST阳性，TPPA阴性

①TRUST滴度很高，如果TRUST滴度达到1:32以上，基本可以诊断是梅毒，建议复查TPPA，并要进行足量规则治疗，并定期随访3年。

②TRUST滴度比较低，根据近期是否有不安全性行为、多性伴或性伴侣感染史、或输血史等情况而定，如果没有以上情况，可以定期随访复查。

3.TRUST阴性，TPPA阳性

①如果既往感染过梅毒但是未治疗过，此时可能已转为潜伏梅毒，建议进行足量规则治疗，并定期随访3年。

②如果以前感染过梅毒并且正规治疗过，但是没有经过正规的3年定期随访观察，建议复查随访一段时间。若未正规治疗过，建议进行足量规则治疗，并且定期随访3年。

③如果对以前是否感染过梅毒未知，建议进行足量规则治疗，并且定期随访3年。需要注意，少数患者在正规抗梅治疗后，非梅毒螺旋体抗体滴度下降至一定程度后不再下降，且长期维持在某一滴度范围，这种现象称为血清固定现象。对于血清固定