《动物药学》-灵芝多糖发酵生产典型工作任务

灵芝多糖发酵生产一、任务基本信息项目核心内容任务名称灵芝多糖发酵生产合作双方校方：江苏农牧科技职业学院生物医药学院企业：江苏百草堂药业有限公司适用专业/岗位专业：生物制药技术岗位：发酵工程制药工参与人员校方：圣志存、洪伟鸣、王米雪企业：李然、程世清、金冲任务目标一、知识目标1.掌握灵芝多糖液态深层发酵的基本原理与生产工艺特点。2.掌握培养基配制、灭菌原理及无菌操作的理论依据。3.理解液态深层发酵工艺参数（温度、pH、溶氧、搅拌转速、接种量、培养时间）对灵芝菌丝生长及多糖合成的影响机制。4.掌握灵芝发酵过程生长曲线变化规律，熟悉菌丝生长、代谢产物积累的动态变化特点及发酵异常现象的成因。5.掌握灵芝多糖提取、分离、纯化的基本原理，理解水提、醇沉、离心、过滤等纯化技术的理论基础。6.了解生物发酵车间GMP规范、发酵设备安全操作规程、实训过程质量控制与安全生产知识。二、技能目标1.熟练掌握无菌接种、超净台操作、菌种传代与保藏技能，杜绝杂菌污染。2.能够根据配方精准称量原料，独立完成发酵培养基配制、pH调节、分装与高压蒸汽灭菌操作，规范完成前期准备工作。3.能够熟练操作摇床、发酵罐等设备，完成灵芝液态深层发酵接种、培养全过程，能够根据生长状态调整培养参数。4.能够定时观察发酵状态，取样检测菌丝长势、发酵液性状，准确记录发酵数据，判断发酵终点、识别发酵污染、长势差等常见异常问题。5.熟练掌握发酵液预处理、离心、过滤、热水浸提、乙醇沉淀等操作，独立完成灵芝多糖粗品提取与纯化操作。6.能够按照6S与GMP要求完成设备清洗、场地整理、器具灭菌，具备发酵生产过程质量控制、安全操作和实训问题分析与处理能力三、素质目标1.

培养严谨细致的科学态度，严格遵循操作规范，重视发酵过程中的数据真实性与可追溯性，杜绝违规操作。2.

强化责任与安全意识，树立“质量第一”的理念，能识别发酵生产中的安全隐患（如灭菌不彻底、设备泄漏）并及时处理。3.

提升团队协作与问题解决能力，在多岗位配合中高效沟通，面对发酵异常时能冷静分析、协同制定解决方案，适应工业化生产需求。二、任务方案【任务说明】《灵芝多糖发酵生产》紧扣大健康产业新趋势，聚焦中医药现代化核心新赛道—中药发酵，立足新赛道技能型人才稀缺，以产教融合理念为指引，引入合作企业灵芝发酵真实项目，构建“生产场景+教学实践”一体化教学模式，精准对接生物制药技术、中药制药专业人才培养目标，实现生产与教学深度融合、协同育人。【仪器与设备】5L全自动小型发酵罐、30L机械搅拌式发酵罐【任务流程】序号操作步骤具体操作内容1菌种活化1.取保存于液体石蜡灵芝菌株，接种至斜面培养基（马铃薯葡萄糖培养基）；2.

30℃恒温培养3-5天，直至斜面长满绿色菌丝·接种过程需在无菌超净台操作，避免杂菌污染；·

活化后的菌种需镜检确认无杂菌，菌丝形态正常

。2摇瓶培养1.

配制摇瓶培养基（玉米浆20g/L、葡萄糖20g/L、乳糖10g/L、KH₂PO₄

1g/L），分装后121℃灭菌20min；2.

接入活化菌种，28℃、220r/min摇床培养2-3天；3.

培养基pH需调节至6.5-6.8；4.

培养结束后检测菌种浓度（OD600≥2.0），无杂菌生长。

3种子罐扩大培养

1.

1-3级种子罐依次扩大，培养基同摇瓶（按比例放大），121℃灭菌30min；2.

按10%-15%接种量转接，27℃培养，通气量1:0.8-1.0

vvm，搅拌速度200-300r/min；3.

培养24-36h后，镜检菌丝体形态（分支均匀），接入发酵罐

1.

每级种子罐接种前需确认无菌状态；4.

控制溶氧≥30%，避免缺氧抑制菌种生长

。4发酵培养基配制与灭菌1.

培养基配制与灭菌·配方：玉米浆30g/L、葡萄糖15g/L、乳糖25g/L、硫酸铵5g/L、CaCO₃

3g/L、MgSO₄

0.5g/L；·操作：将原料溶解后调节pH至6.5，转入发酵罐，关闭罐门后121℃、0.1MPa湿热灭菌30min，灭菌后降温至27℃。5发酵培养1.接种：种子液按10%-15%比例接入发酵罐，接种过程需无菌操作，避免罐内压力骤变；2.发酵参数控制：·温度：前3天25-27℃，后期降至23-25℃（延长产素期）；

·

pH：维持6.2-6.8，通过自动补加25%氨水调节；·溶氧：通气量1:1.0-1.2

vvm，搅拌速度300-400r/min，确保溶氧≥20%；·营养补加：发酵48h后，按速率补加葡萄糖（5g/L·d）、硫酸铵（1g/L·d），避免碳源/氮源过量抑制产素。3.

过程监测·取样频率：每4h取样1次；·检测项目：菌种浓度（OD600）、青霉素含量（高效液相色谱法）、pH、残糖量、杂菌情况；·发酵终点：残糖量≤1g/L时，终止发酵，发酵周期约6-8天。【数据记录与报告】序号考核项目内容操作记录工况确认1移种操作升罐压，确定种子罐罐压大于发酵罐罐压。罐压：2种子罐准备工作空气流量调节对过滤器进行通气操作，确认过滤系统完好。3过滤器蒸汽灭菌高效过滤器蒸汽灭菌，规定温度维持规定时间。温度：开始时间：结束时间：4灭菌后对过滤器进行吹干。开始时间：结束时间：5种子罐实消消毒灭菌消毒控制规定温度、压力维持规定时间。温度：压力：开始时间：结束时间：6接种操作接种操作接种时，操作控制罐压，罐压为：7发酵罐空罐准备流量调节对过滤器进行通气操作，确认过滤系统完好。过滤器蒸汽灭菌高效过滤器蒸汽灭菌，规定温度维持规定时间。开始时间:结束时间:完成灭菌后对过滤器进行吹干

开始时间:结束时间:空罐准备使用一次水对罐体进行全面清理

开始时间:结束时间:8发酵罐实消消毒灭菌消毒控制规定温度、压力维持规定时间。温度：压力：开始时间：结束时间：【考核评价】项目操作要求考核内容评分标准分值评分结果（一）交接班及设备检查(2.5分)种子罐交接检查（关键控制点）PI1301检查检查牌未旋转到“检查”状态，只要有一项漏检，扣0.8分0.8PI1304检查PI1307检查FI1301检查发酵罐A/B交接检查（关键控制点）PI1308检查检查牌未旋转到“检查”状态，只要有一项漏检，扣0.8分0.8PI1311检查PI1314检查FI1302检查物品检查检查工具及物品未检查接种工具、仪器设备等物品，扣0.2分0.2过程巡检种子罐检查种子罐未检查，检查后未将罐体、管线、阀件旋转到“检查”状态，扣0.2分0.2发酵罐漏点检查发酵罐漏点检查发酵罐A未检查，检查后未将罐体、管线、阀件旋转到“检查”状态，扣0.5分0.5(二)接种操作(8.5分)接种帽灭菌旋转接种帽种子罐实消过程中第一次未旋转接种帽(有动作，接种帽拧动即可），扣0.2分0.2种子罐实消过程中第二次未旋转接种帽，或未戴隔热手套，扣1分1取样正确标注未按照规范填写罐号/培养时间/取样时间的标签，扣0.4分0.4取样操作未按照规范用新洁尔灭进行消毒操作，扣0.5分0.5定量取样取样量不在（100mL±5mL）范围内，扣1分1接种环境灭菌接种前未正确使用新洁尔灭对周围环境灭菌（需按照接种口为中心0.5米范围内旋转喷洒操作)，扣0.2分0.2接种工未戴手套操作，扣0.5分0.5接种操作消毒工未按照要求进行接种操作（先在火圈内铺好棉花，再用95%酒精浸润脱脂棉），扣0.3分0.3消毒工未正确、及时佩戴隔热手套或未拧下接种帽，接种帽至于火焰附近5-10厘米处，扣0.5分0.5接种工未按顺序点火，在火焰附近5厘米范围内松绳、去掉牛皮纸、瓶塞，扣0.5分0.5未将用过的火柴、棉绳、牛皮纸置于防爆垃圾桶中，扣0.5分0.5接种工未在火焰周围2-5厘米内需要旋转、稳定快速拔出瓶塞，扣0.5分0.5接种工未在火焰保护下，准确，迅速的倒入种子，或接种瓶脱手，扣0.5分0.5未在火焰熄灭前完成接种操作，扣0.5分0.5接种从打开接种帽到开始拧接种帽，时间在1分钟内，超过1分钟，扣0.5分0.5接种完成后，消毒工未戴手套拿接种帽（帽口向火焰）在火焰上旋转一圈（约5秒），扣0.3分0.3消毒工未戴手套在5秒内拧上接种帽，扣0.3分0.3接种后处理接种后处理消毒工接种完成后未正确熄灭火焰，扣0.3分0.3(三)接种质量(3分)接种质量裁判现场评分实际接种量/100g=K。K＜0.97，得0分；0.97≤K≤0.98，得1分；K＞0.98，得2分；K≧0.99，得3分3(五)填写生产记录(2分)生产记录情况按照流程记录工段操作内，未按照流程记录正确的时间点，扣1分1记录内容正确生产记录内容不正确或有空项，扣0.5分0.5记录工整记录涂改，或记录不工整，扣0.5分0.5（六）安全文明生产（5分）个体防护按照行业有关安全规范，着工作服、手套未佩戴或佩戴不规范（头发露出工作帽、未系鞋带、工作服未系满扣、带饰品），扣1分1操作时未戴手套或操作过程中手套放置在操作区域，扣1分1安全行为选手在操作过程中要规范动作及行为脚踩管道、蹲坐、跑步或蹦跳上楼梯，上下楼梯每次跨一节楼梯，或出现摔倒现象，扣1分1环境卫生保持现场环境整齐、清洁、有序未按照HSE规范放置废物，或从柜中(或推车上）取放物品用后没有归位，扣1分1工具使用操作任何工具及物品是否规范操作工具及物品脱落掉地，或未放在指定位置，或身体各部位接触管道，扣1分1重大事故由于操作不当引起设备损坏及人身伤害事故考核期间出现由于操作不当引起的设备损坏，或人身伤害事故，扣5分（本项未倒扣分）★三、任务评分本任务考核采用校企双导师联合评分机制，双方依据不同考核重点分工评分，具体如下：企业导师：聚焦学生实操能力，重点评估实验过程中的操作规范性、数据准确性及问题解决能力，评分占比60%。校内导师：聚