《动物药学》-四真实践项目-溶血性试验

受试物致敏实验一、项目基础信息模块核心内容项目名称江苏华创誉通医学检验有限公司药物溶血性试验（体外试管法）合作双方校方：江苏农牧科技职业学院生物医药学院 企业：江苏华创誉通医学检验有限公司参与人员校方：王婧、陈晓兰、王帅兵企业：实验动物部导师2人项目目标学生：掌握体外试管法检测药物溶血性；能开展体外药物溶血性试验；会根据观察结果对药物溶血性进行判断。校方：将行业实际检测需求融入教学，完善课程案例库。企业：完成供试品的体外溶血性检测，验证现有实验方法的可重复性，储备实验操作人才。二、项目方案【项目说明】溶血性是指药物制剂引起的溶血和红细胞凝聚等反应。溶血性反应包括免疫性溶血与非免疫性溶血。免疫性溶血是药物通过免疫反应产生抗体而引起的溶血，为Ⅱ型和Ⅲ型过敏反应；非免疫性溶血包括药物为诱发因素导致的氧化性溶血和药物制剂引起血液稳态的改变而出现的溶血和红细胞凝聚等。溶血性试验是观察受试物是否能够引起溶血和红细胞凝聚等反应。凡是注射剂和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反应的其他药物制剂均需要进行溶血性试验。【仪器与试剂】新鲜兔血、三角瓶、移液器、生理盐水、试管若干、供试品。【操作流程】序号操作步骤具体操作内容1血细胞悬液的制备取兔血20mL，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入10倍量生理盐水，1000-1500r/min离心15分钟，除去上清，沉淀红细胞再用生理盐水按上述方法洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，用生理盐水配成2％的混悬液备用。2受试物准备临床用于非血管内途径给药的注射剂，以其说明书规定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1∶3稀释后作为供试品溶液；用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的临床使用浓度作为供试品溶液。3试验取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。按下表所示依次加入2%红细胞悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水，混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温箱中进行温育，开始每15min观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，一般观察3小时。按下列顺序加入各种溶液：单位为mL试管编号12345672%红细胞悬液2.52.52.52.52.52.52.5生理盐水2.02.12.22.32.42.5蒸馏水2.5受试物0.50.40.30.20.14结果观察①若试验中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，表明有溶血发生②若红细胞全部下沉，上清液体无色澄明，表明无溶血发生。③若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。如有红细胞凝聚的现象，将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴生理盐水，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚。【数据记录与报告】供试品名称：批号：检查项目

检验依据化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则结果观察组别观察结果供试品A供试品B标准规定若受试物管中的溶液在3小时内不发生溶血和凝聚，则受试物可以注射使用；若受试物管中的溶液在3小时内发生溶血和（或）凝聚，则受试物不宜注射使用。结论根据试验观察结果，判定供试品A£可以£不可以注射使用；供试品B£可以£不可以注射使用。操作人：复核人：【考核评价】考核项目考核要点评分标准评价主体分值得分职业态度具备药物检测人员的职业技能素养（1）具备依标检测的职业素养（2）具备团队协作和合理评价的能力企业导师校内导师15

操作规范实验准备实验所需材料准备正确、齐全企业导师5红细胞悬液制备（1）红细胞洗涤时无溶血（2）白细胞等去除完全（3）最终稀释倍数准确企业导师20供试品制备供试品稀释正确企业导师10试验操作台面整洁、有序各管加液准确原始记录及时、规范企业导师20

结果判定结果观察能根据试验结果判定供试品是否溶血或凝集校内导师企业导师20

结论能结合实验结果判定供试品是否适合注射使用校内导师企业导师10

三、项目评分本实验考核采用校企双导师联合评分机制，双方依据不同考核重点分工评分，具体如下：企业导师：聚焦学生实操能力，重点评估实验过程中的动手操作能力，对结果的判断及问题解决能力，评分占比60%。校内导师：聚焦学生理论与成果梳理能力，重点评估实验报告完整性及理论掌握程度，评分占比40%。四、项目保障1.技术与资源保障：企业提供符合行业检测要求的实验动物，供试品等；校方提供实验理论指导，协助解决技术难题。2.安全保障：校企共同开展