山东近海新污染物溶解性及试验溶液贮备液制备、典型浮游植物及培养条件、培养基的制备方法

（资料性）

山东近海新污染物溶解性及试验溶液贮备液制备不同溶解度的山东近海新污染物的分类及试验溶液储备液制备方法见表A.1。山东近海新污染物溶解性及试验溶液贮备液制备溶解性新污染物名称试验溶液贮备液制备方法易溶与可溶物质持久性有机污染物：全氟及多氟烷基化合物直接溶于三级水中配制成试验溶液贮备液微溶物质持久性有机污染物：多溴二苯醚（低溴代）、短链氯化石蜡、五氯苯酚及其盐类；抗生素：四环素、氧氟沙星、阿奇霉素、氯霉素；内分泌干扰物：三氯甲烷、罗红霉素、红霉素宜使用适当的助溶剂（如DMSO）进行溶解，或者采用超声（200 W～300 W，30 min）、加热（根据试验样品性质而定，易挥发的样品不能采取此方法）等方法增溶。若使用助溶剂，终浓度应不高于NOEC值，且在试验组中浓度保持一致。若仍不能完全溶解，则实际溶解的样品浓度为最终贮备液浓度极微溶物质持久性有机污染物：多氯联苯、多溴二苯醚（高溴代）、多环芳烃（如萘、蒽、菲等）、多氯化萘、滴滴涕、二噁英、六氯丁二烯、七氯、氯丹、双酚A、壬基酚、六氯苯；内分泌干扰物：17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、17α-雌二醇、雌三醇、戊酸雌二醇、四溴双酚A、辛基酚、己烷雌酚、17α-炔雌醇；抗生素：诺氟沙星、环丙沙星、依诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、克拉霉素、磺胺噻唑、三甲氧苄胺嘧啶几乎不溶或不溶物质微塑料类：聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯等按照标准样品的浓度（液体样品）或质量（固体样品）配制相应浓度贮备液（以三级水为溶剂）即可，进行正式试验前将贮备液超声分散（200 W～300 W，30 min）后加入

（资料性）

山东近海典型浮游植物及培养条件山东近海典型浮游植物的培养条件见表B.1。山东近海典型浮游植物及培养条件物种名称拉丁名培养条件中肋骨条藻Skeletonemacostatum使用加Sia的f/2培养基进行培养。藻种的培养温度设为20 ℃±1 ℃，培养光照条件设为78 μmol photos/（m2·s）～100 μmol photos/（m2·s），光暗比设置为12 h:12 h假微型海链藻Thalassiosiralespseudonana旋链角毛藻Chaetoceroscurvisetus青岛大扁藻Platymonashelgolandica使用f/2培养基进行培养。藻种的培养温度设为25 ℃±1 ℃，培养光照条件设为78 μmol photos/（m2·s）～156 μmol photos/（m2·s），光暗比设置为12 h:12 h海水小球藻Chlorellasp.塔玛亚历山大藻AlexandriumtamarenseAlexandriumtamarense使用加Sia的L/1培养基进行培养。藻种的培养温度设为20 ℃±1 ℃，培养光照条件设为78 μmol photos/（m2·s）～100 μmol photos/（m2·s），光暗比设置为12 h:12 h微小原甲藻Prorocentrumminimum球等鞭金藻Isochrysisgalbana使用f/2培养基进行培养。藻种的培养温度设为25 ℃±1 ℃，培养过程中设为78 μmol photos/（m2·s）～100 μmol photos/（m2·s），光暗比设置为12 h:12 ha硅酸盐培养母液（见表C.3）

（资料性）

培养基的制备方法f/2微量金属培养母液制备方法f/2微量金属培养母液的制备见表C.1。f/2微量金属培养母液制备方法用量成分储备液浓度g/L dH2O最终溶液中的摩尔浓度M3.15 gFeCl3·6H2O—1×10-54.36 gNa2EDTA·2H2O—1×10-51 mLCuSO4·5H2O9.804×10-81 mLNa2MoO4·2H2O6.303×10-81 mLZnSO4·7H2O22.008×10-81 mLCoCl2·6H2O10.005×10-81 mLMnCl2·4H2O180.009×10-71 000 mL三级水——L/1微量金属培养母液制备方法L/1微量金属培养母液的制备见表C.2。L/1微量金属培养母液制备方法用量成分储备液浓度g/L dH2O最终溶液中的摩尔浓度M3.15 gFeCl3·6H2O—1.17×10-54.36 gNa2EDTA·2H2O—1.17×10-50.25 mLCuSO4·5H2O2.451×10-83 mLNa2MoO4·2H2O19.909×10-81 mLZnSO4·7H2O22.008×10-81 mLCoCl2·6H2O10.005×10-81 mLMnCl2·4H2O180.009×10-71 mLH2SeO31.30×10-31×10-81 mLNiSO4·6H2O2.701×10-81 mLNa3VO41.841×10-81 mLK2CrO41.941×10-91 000 mL三级水——硅酸盐培养母液制备方法硅酸盐培养母液的制备见表C.3。硅酸盐培养母液制备方法用量成分储备液浓度g/L dH2O最终溶液中的摩尔浓度M1 mLNa2SiO3·9H2O30.001.07×10-41 000 mL三级水——维生素培养母液制备方法维生素金属培养母液的制备见表C.4。维生素培养母液制备方法用量成分储备液浓度g/L dH2O最终溶液中的摩尔浓度M1 mLVitaminB12（cyanocobalamin）1.001×10-1010 mLBiotin0.102×10-9200 mgThiamine·HCl—3×10-71 000 mL三级水——f/2培养基制备方法f/2培养基的制备见表C.5。f/2培养基制备方法体积/（mL）成分储备液浓度g/L dH2O最终溶液中的摩尔浓度M1NaNO375.008.83×10-41NaH2PO4·H2O5.003.63×10-51f/2微量金属培养母液见表C.1—0.5维生素培养母液见表C.3—1 000灭菌海水——L/1培养基制备方法L/1培养基的制备见表C.6。L