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DB34DB34/T2996—2017猪链球菌检验操作规程ProtocolofexaminationforStreptococcussuis安徽省质量技术监督局发布I1GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培SN/T2984检验检疫动物病原微生物实3.4冰箱：2℃~10℃。）：2革兰氏染色姬姆萨染色镜检染色镜检落涂片馅检、纯培养5.1.1对病猪，最急性和急性病例可无菌采集死亡猪的心、肝、肺、肾、脾、淋巴结等组织，慢性病例如关节炎型一般采取关节液及周围组织；对活5.1.2脏器组织样品采集后需延迟送检的，可保存于饱和氯化钠溶液或30%甘油缓冲盐水溶液中，保存时间不超过72h。5.1.3样品均需采取低温(4～8℃)保存和运输。5.2.2猪链球菌形态学特征：革兰氏阳性球菌，菌体直径约1m,链状排列，链长短常与细菌的种类及生长环境有关，固体培养物以双球菌为多，少量呈3个～5个排列的短链，液体培3用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组织后划线接种于血液琼脂平板，于36℃±1℃培养24h±2h，如菌落生长缓慢，可延长至48h±2h后观察。同时取病料做组织触片，姬姆萨染色后镜5.3.5在血液琼脂平板和选择性普通琼5.5.2小鼠模型：将肺、脑、脾、肝、淋巴结磨碎，用灭菌生理盐水制成1:5组的肉汤纯培养物用于动物试验。小鼠皮下注射组织悬液0.2m4个血清型。大多数致病性菌株为1～9血清型，其中猪链球菌2型为最常见和5培养基的配制将38～39g氯化钠加入100mL蒸馏水中，充将A.3.1中各成分溶于蒸馏水中，加热溶解6将A.4.1中THB培养基溶于蒸馏水中，加热溶解，127PCR扩增仪、1.5mL离心管、0.2mLPCR反应管、水浴锅、高2×PCRMasterMix、灭菌超纯水、琼脂糖、10mg/ML溴化乙锭（EB（10×LoadingBuffer）、相对分子质量MaGCAGCGTATTCTGTCAAACGCCATGGACAGATAAGGAATAAAGCGGAGTACAGCGTCCTGCACGGTATTCAAACGCAAGGAATTACGGTATCGAGTATCTAAAGAATGGGAAAGAGACACGTTGGTATCGGACACGTAAAGACTGGCTACATATAATGGAAGCCCCCGAAGTATCTGGG检测基因温度/时间温度/时间温度/时间延伸温度/时间数延伸温度/时间575555性(+),猪链球菌及1、2、7、9型PCR检测结果电泳图见图B.1、图B.2、图B.3、图B.4、图B.5;

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