NYT 4681-2025 饲料中6种雷琐酸内酯类化合物的测定 气相色谱-质谱法标准立项发展报告

饲料中6种雷琐酸内酯类化合物的测定气相色谱-质谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofSixResorcylicAcidLactonesinFeedsbyGasChromatography-MassSpectrometry摘要雷琐酸内酯类化合物（ResorcylicAcidLactones，RALs）是一类具有显著生物学活性的苯并内酯类化合物，主要通过霉菌代谢产生，常见成员包括玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇等。该类化合物具有强烈的雌激素样作用，可通过饲料链进入动物机体，进而对畜禽生殖系统、生长发育及食品安全产生严重危害，被多项国际法规和国内标准列为饲料及食品中重点监控的霉菌毒素类风险物质。本报告围绕行业标准NY/T4681-2025《饲料中6种雷琐酸内酯类化合物的测定气相色谱-质谱法》的立项背景、技术内容、研制过程及应用前景进行全面阐述。该标准由农业农村部发布，于2025年1月9日正式发布，自2025年5月1日起实施，规定了基于气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）同时测定饲料中6种雷琐酸内酯类化合物的原理、试剂与材料、仪器设备、分析步骤、结果计算及精密度要求。标准采用固相萃取净化前处理技术结合气相色谱-质谱联用检测手段，方法检出限低至2.0μg/kg，定量限为5.0μg/kg，加标回收率范围为72.5%～108.3%，相对标准偏差（RSD）不大于12.5%，具有良好的灵敏度、准确度和精密度，能够满足现行饲料质量安全监管的检测需求。本标准的发布实施填补了我国农业行业标准中饲料中雷琐酸内酯类化合物统一检测方法的技术空白，为饲料质量安全监管、风险监测和畜禽产品质量提升提供了有力的技术支撑，对于保障动物性食品安全和消费者健康具有重要的现实意义。关键词：雷琐酸内酯类化合物；饲料安全；气相色谱-质谱法；行业标准；霉菌毒素检测；固相萃取KeywordsResorcylicacidlactones;Feedsafety;Gaschromatography-massspectrometry;Agriculturalindustrystandard;Mycotoxindetection;Solid-phaseextraction1引言1.1立项背景饲料安全是动物性食品安全的源头保障，直接关系人民群众身体健康和畜牧业可持续发展。近年来，随着饲料工业的快速发展和消费者对食品质量安全关注度的不断提升，饲料中天然有毒有害物质的检测与防控已成为世界各国质量安全监管的重点领域。霉菌毒素作为饲料中最主要的一类天然污染物，因其普遍存在性、强毒性和难以根除等特点，长期受到国内外学者的广泛关注。雷琐酸内酯类化合物是一类由镰刀菌属（*Fusarium*）真菌产生的次生代谢产物，其代表性成员包括玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）及其系列衍生物，如α-玉米赤霉醇（α-Zearalanol，α-ZAL）、β-玉米赤霉醇（β-Zearalanol，β-ZAL）、α-玉米赤霉烯醇（α-Zearalenol，α-ZOL）、β-玉米赤霉烯醇（β-Zearalenol，β-ZOL）和玉米赤霉酮（Zearalanone，ZAN）等。该类化合物的共同结构特征为含有间苯二酚（雷琐酸）内酯母核。研究表明，RALs具有显著的雌激素样生物活性，可与动物体内的雌激素受体结合，干扰内分泌系统的正常功能，导致畜禽出现假发情、外阴红肿、卵巢萎缩、流产、死胎等生殖障碍症状，同时还可影响动物的生长性能和免疫功能。长期摄入含有RALs的饲料，不仅对养殖动物造成直接危害，还可能通过食物链在动物源性食品中蓄积残留，对人类健康构成潜在威胁。国际社会对饲料及食品中雷琐酸内酯类化合物的控制已给予高度关注。欧盟法规（EC）No1881/2006及其修订版规定了食品中玉米赤霉烯酮的最高限量；联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会（JECFA）对玉米赤霉烯酮及其代谢物进行了系统的毒理学评估，制定了暂定最大每日耐受摄入量（PMTDI）为0.5μg/kg体重/天。我国《饲料卫生标准》（GB13078-2017）明确规定了饲料中玉米赤霉烯酮的限量指标，其中仔猪配合饲料限量为500μg/kg，生长育肥猪配合饲料限量为250μg/kg，青年母猪配合饲料限量为100μg/kg。然而，现行限量标准所对应的检测方法尚存在一定局限性，尤其是对饲料中多种雷琐酸内酯类化合物同步定性和定量检测的方法标准相对缺乏，难以满足日益严格的监管需求。1.2标准立项的必要性（1）现行检测方法存在技术缺口。目前，我国饲料中玉米赤霉烯酮等雷琐酸内酯类化合物的检测主要依赖免疫亲和柱-高效液相色谱法或液相色谱-串联质谱法，上述方法或存在检测目标物单一（仅针对玉米赤霉烯酮一种化合物）、或仪器设备昂贵、普及率不高的问题。对于实际饲料样品中可能同时存在的多种雷琐酸内酯类化合物，缺乏简便、准确、经济的同步检测手段。（2）监管需求日益迫切。随着饲料质量安全监管力度的不断加大，基层检测机构对操作简便、成本可控、灵敏度满足限量要求的检测方法需求日益迫切。气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）作为一项相对成熟的分析技术，在基层实验室具有较好的普及基础，具备在全国范围内推广应用的条件。（3）国际贸易与技术接轨的需要。饲料及动物源性食品的国际贸易对检测方法的一致性提出了更高要求，制定与国际先进水平接轨的行业标准，有助于消除技术性贸易壁垒，促进我国饲料产品的国际贸易。（4）法规标准体系完善的需要。《中华人民共和国农产品质量安全法》《饲料和饲料添加剂管理条例》等法律法规对饲料质量安全提出了明确要求，标准化检测方法体系的完善是落实上述法律法规、强化质量安全监管的重要技术基础。鉴于上述背景，农业农村部将《饲料中6种雷琐酸内酯类化合物的测定气相色谱-质谱法》列入农业行业标准制修订计划，由相关权威检测和研究机构牵头承担标准的研制工作。2标准主要内容2.1标准适用范围本标准规定了饲料中6种雷琐酸内酯类化合物（α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮）的气相色谱-质谱测定方法。标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料及饲料原料中上述6种雷琐酸内酯类化合物的定性和定量检测。标准方法的检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0μg/kg，能够满足现行饲料卫生标准中玉米赤霉烯酮限量指标的检测要求。2.2方法原理与技术路线本标准的检测原理为：试样中的雷琐酸内酯类化合物经有机溶剂提取、固相萃取柱净化后，采用气相色谱-质谱联用仪进行分离和检测。方法基于保留时间定性、选择离子监测（SIM）模式定量，以特征离子峰面积按外标法定量。技术路线主要包括以下关键环节：（1）样品提取。根据饲料基质的复杂性，采用乙腈-水混合溶液或乙酸乙酯等有机溶剂对试样进行振荡提取或超声辅助提取，使目标化合物从饲料基质中充分释放。对于不同饲料类型（配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料等），需根据基质差异优化提取溶剂配比和提取时间。（2）净化。采用固相萃取（SPE）技术对提取液进行净化处理。通过对比不同净化柱（如C18柱、HLB柱、中性氧化铝柱等）的净化效果和回收率，筛选出最优的净化方案，以有效去除饲料基质中的脂肪、色素、蛋白质等干扰物质，降低基质效应。（3）衍生化处理。雷琐酸内酯类化合物分子中含有多个羟基官能团，直接进行气相色谱分析时存在沸点高、极性大、色谱峰拖尾等问题，需在进样前进行硅烷化衍生化处理，常用衍生化试剂为N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）或N-甲基-N-（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（MSTFA），将羟基转化为三甲基硅烷基（TMS）衍生物，以提高方法的挥发性和色谱分离性能。（4）气相色谱-质谱分析。采用毛细管气相色谱柱（如HP-5MS、DB-5MS等，30m×0.25mm×0.25μm）进行分离，程序升温方式实现6种化合物的有效分离。质谱采用电子轰击离子源（EI），选择离子监测（SIM）模式采集信号，依据各化合物的特征碎片离子进行定性确认和定量分析。2.3主要技术参数标准对各技术参数进行了系统的条件优化和方法学验证，主要性能指标如下：-线性范围：各化合物在5.0μg/L～500μg/L浓度范围内线性关系良好，相关系数（r）不低于0.995；-检出限：饲料基质中添加浓度2.0μg/kg时，各化合物的信噪比（S/N）≥3，满足定性检出要求；-定量限：饲料基质中添加浓度5.0μg/kg时，各化合物的信噪比（S/N）≥10，定量结果的相对标准偏差满足要求；-加标回收率：在5.0μg/kg、50μg/kg和200μg/kg三个添加水平下，6种化合物的平均加标回收率为72.5%～108.3%；-精密度：在重复性条件下，同一实验室不同操作人员、不同时间测定结果的相对标准偏差（RSD）不大于12.5%。2.4标准结构本标准按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定进行编写，标准结构包括：前言、范围、规范性引用文件、术语和定义、方法原理、试剂与材料、仪器设备、试样制备与保存、分析步骤、结果计算与表述、精密度、回收率、试验报告等章节。3标准研制过程3.1立项阶段随着饲料质量安全监管工作的深入推进，农业农村部畜牧兽医局组织专家对饲料质量安全检测标准体系进行了系统梳理和评估，针对雷琐酸内酯类化合物检测标准缺失的突出问题，提出了标准立项建议。经标委会专家评审和农业农村部审核批准，正式列入农业行业标准制修订计划。3.2起草阶段标准起草组由多家具备扎实研究基础和丰富实践经验的技术机构组成。起草组在系统调研国内外相关标准和文献资料的基础上，结合多年从事饲料质量安全检测技术研究的积累，完成了标准草案的编制。草案形成后，起草组组织开展了实验室间的协同验证试验，对不同饲料基质（配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料）中6种目标化合物的检测效果进行了全面验证，并根据验证结果对方法参数进行了反复优化。3.3征求意见与审查阶段标准草案广泛征求了全国饲料标准化技术委员会委员、饲料检测机构、科研院所、高等院校及企业代表的意见建议。起草组对反馈意见逐条进行了认真处理和分析，对标准文本进行了修改完善。经全国饲料标准化技术委员会组织专家审查，一致同意该标准通过技术审查，认为标准内容科学合理、技术指标先进适用、操作性强，整体达到国内领先水平。3.4发布与实施2025年1月9日，农业农村部正式发布NY/T4681-2025《饲料中6种雷琐酸内酯类化合物的测定气相色谱-质谱法》，自2025年5月1日起实施。标准的发布填补了我国饲料中多种雷琐酸内酯类化合物同步检测方法标准的空白，为各级饲料质量检测机构的日常工作提供了统一规范的技术依据。4主要起草单位介绍本标准的主要起草单位——中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所（以下简称"质标所"），是农业农村部直属的农产品质量安全领域国家级公益性科研机构，也是全国饲料标准化技术委员会秘书处依托单位。质标所成立于2003年，加挂"农业农村部农产品质量标准研究中心""农业农村部饲料质量安全监督检验测试中心"等平台，是国家饲料质量安全风险评估实验室、国家饲料质量安全监测重点实验室的建设依托单位。研究所拥有一支高素质的科研人才队伍，现有科研人员中具有博士学位人员占比超过80%，涵盖分析化学、动物营养学、毒理学、食品科学、标准化等多个学科领域。在饲料质量安全研究领域，质标所长期承担全国饲料质量安全例行监测、风险预警评估和应急监测等技术支撑工作，构建了覆盖饲料中霉菌毒素、违禁添加物、重金属、微生物等风险因子的检测技术体系。研究所在霉菌毒素检测技术方面积累了深厚的研究基础，先后主持制修订饲料质量安全领域国家标准和行业标准40余项，获省部级科技奖励多项，在国内外学术期刊发表研究论文300余篇，多项研究成果被相关法规标准采纳应用。在NY/T4681-2025标准研制过程中，质标所作为标准牵头单位，负责标准总体方案设计、关键技术研究、实验室间验证组织及标准文本起草等工作，联合多家省级饲料质检机构完成了协同验证试验，保证了标准技术指标的先进性和适用性。该标准的成功研制，充分体现了质标所在饲料质量安全检测技术领域的引领地位和标准化工作的组织协调能力。5结论与展望5.1标准意义NY/T4681-2025《饲料中6种雷琐酸内酯类化合物的测定气相色谱-质谱法》的发布实施，具有多方面的重要意义：第一，填补了标准空白。该标准是我国首次以农业行业标准形式规定饲料中多种雷琐酸内酯类化合物的同步检测方法，改变了此前仅依靠单一化合物检测方法或非标方法进行监控的局面，完善了饲料质量安全检测标准体系。第二，提升了监管支撑能力。标准采用的气相色谱-质谱技术具有良好的灵敏度和选择性，检出限和定量限均能满足现行饲料卫生标准中玉米赤霉烯酮限量值的检测要求，为各级检测机构开展饲料质量安全监测提供了简便、准确、成本可控的技术手段。第三，促进了方法统一和技术进步。标准的实施有利于规范各检测机构实验室的操作流程，提高检测结果的可比性和互认性，同时推动了气质联用技术在饲料质量安全检测领域的深入应用，为后续相关标准的制修订提供了方法参考和技术储备。第四，保障了食品安全和国际贸易。加强对饲料中雷琐酸内酯类化合物的监控，从源头上降低了动物性食品中该类物质的残留风险，保障了消费者健康。统一规范的检测方法也促进了饲料和动物产品国际贸易中技术壁垒的消除。5.2未来展望随着科学技术的不断进步和质量安全监管要求的持续提高，饲料中雷琐酸内酯类化合物检测技术及标准化工作仍将面临新的挑战和发展机遇：（1）检测技术向更高效方向发展。随着超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）技术在基层实验室的逐步普及，更高灵敏度、更高通量的多残留同步检测方法将成为未来发展的重要方向。同时，基于免疫亲和净化、QuEChERS（快速、简便、廉价、高效、耐用、安全）等新型前处理技术的应用，将进一步提高检测效率，降低检测成本。（2）标准体系将进一步完善。建议在NY/T4681-2025的基础上，逐步扩大覆盖的化合物种类，将更多新发现的雷琐酸内酯类衍生物纳入监测范围；同时，针对不同饲料基质的特点，研制更加细化的检测方法标准，形成覆盖面广、层次分明、配套完善的饲料中雷琐酸内酯类化合物检测标准体系。（3）检测新技术与新装备的研发。免疫层析快检技术、生物传感器、拉曼光谱等快速筛查技术将在现场监管和日常监测中发挥日益重要的作用。将快速筛查技术与实验室确证方法相结合，形成"筛查+确证"的分级检测模式，将有效提升监管效率和风险防控能力。（4）国际标准的对接与协调。在经济全球化和贸易国际化的背景下，积极参与国际标准化组织（ISO）、国际食品法典委员