CN119390843A 抗tl1a抗体及其制备方法和应用 （华润生物医药有限公司）

道新澜社区观光路1301-84号银星智本申请公开了生物医药技术领域的一种抗基酸序列如SEQIDNO:7~9所示22.如权利要求1所述的抗TL1A抗体，其特征在于，8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1~3任一项所述的抗求5所述的表达载体、如权利要求6所述的细胞或如权利要求所述8的药物组合物在制备与3抗TL1A抗体及其制备方法和应用通过TNF同源结构域(THD)相互作用自组装成稳定的三聚体，TL1A主要以膜结合形式(mTL1A)表达，形成稳定的三聚体，随后通过选择性剪接或金属蛋白酶（如TNF_α转换酶[0006]TL1A表达增加和/或TL1A基因多态性与各种自身免疫性疾病和炎症性疾病的发病4答与适应性免疫应答联系起来，并在自身免疫性疾病和炎症性疾病的诱导中起关键作用。链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:[0014]本申请的第四方面提供一种细胞，所述细胞包含本申请第三方面所述的表达载述的抗TL1A抗体以及药学上可接受的赋[0018]本申请的第八方面提供一种检测TL1A的方法，包含将本申请第一方面所述的抗方面所述的药物组合物在制备与TLA1相关的疾病治疗药物5[0024]图3为本申请一实施方式中抗TL1A抗体抑制TL1A诱导的CD4+T细胞因子IFNγ的以包括多个子步骤或者多个阶段，这些子步骤或者阶段并不必然是在同一时刻执行完成，其他步骤的子步骤或者阶段的一部分轮流或者交替或者同67氨基酸在各种区域或结构域中的分布遵循Kabat、IMGT或Chothia等常见系统中的编号定如可以采用放射性标记或者酶标记来测定未标记抗体阻断标记抗体结区的至少一部分和轻链可变区的至少一部分；以及衍生自另一物种的恒定区的至少一部[0049]在一些实施方式中，本申请的抗TL1A抗体包含人IgG1重链恒定区和人Kappa轻链8够在它们被导入的宿主细胞中自主复制(例的细菌载体)。其他载体(例如非附加型哺乳动物载体)可以在导入宿主细胞后整合到宿主(enterobacteriaceae)的成员，例如大肠杆菌(Escherichiacoli)或沙门氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢杆菌科(Bacillaceae)例如枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；链球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌毕赤酵母(Pichiapastoris)。适当的动物宿主细胞系包括CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、9方面所述的抗TL1A抗体以及药学上可接受子间的免疫结合性质可使用本领域中公知的方法定量。一种方法涉及测量抗原结合位点/[0074]根据所需的检测方法，检测产品还可以含有用于执行抗原_抗体反应的试剂或用本申请第六方面所述的药物组合物在制备与TLA1相关的疾病治疗药物中的应用。床结果，诸如减少各种本申请靶抗原相关病症的发病率或改善所述病症的一个或多个症[0086]使用重组人和小鼠TL1A三聚体蛋白和稳定编码HumanTL1A的表达载体稳定转染小鼠使用HumanTL1A蛋白和CHO_hTL1A细胞交叉免疫。蛋白免疫首次使用剂量50μg/只小悬液用100μm滤网过滤并离心收集细胞沉淀。将1_2mLACK裂解液加入细胞轻柔吹打混匀，胞悬液中加入MouseBDFcBlock，4℃下封闭5min；再加入CD4_FITC、CD8a_FITC、GR1_为：AqVD_Amycan_/CD4_/CD8a_/GR1_/F4/80_FITC_/B220_APC_H7+/IgD_PE_/IgM_PerCP_Cy5.5_/IgG1&IgG2a/b_APC+/TL1A_BV421+/TL1A_[0094]反转录合成cDNA方法：在96孔PCR板中以10μl反应体系合成cDNA，1μM的Oligo务(/IMGT_vquSystem转染试剂盒（ThermoFisher，A29133）说明书，将获得的重组质粒与转染试剂[0100]通过FACS检测本申请中的抗HumanTL1A抗体阻断TL1A与DR3细胞结合的作用。使用含3%FBS的DPBS稀释DR3过表达的HEK293细胞（HEK293_DR3细胞调整密度至0.5×1063%FBS的DPBS洗涤3次后，按100μl/孔加入SA_PE(Biolenged，405204于2_8℃孵育Cytoflex流式细胞仪检测细胞平均荧光强度，计算抗体阻断TL1A结合DR3过表达细胞的[0103]6.在Jurkat_hDR3_Luc细[0104]使用含1%FBS的RPMI1640培养基稀释Jurkat_hDR3_Luc细胞，调整密度至4×106min。使用SpectraMaxi3X酶标仪检测LUM发光，计算抗体抑制HumanTL1A诱导的Jurkat_抑制HumanTL1A诱导的Jurkat_hDR3_Luc细胞DR3下游信号激力检测。其中主要方法参数如下：Baseline1：30s，Baseline2：30s，Antigen