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文档简介
本发明公开了一种提高酶法合成多巴胺产及固定化酶及树脂的重新活化等步骤实现提高酶法合成多巴胺产量的目的。本发明提供的方100次纯化能力不下降，该方法操作简单，毒性2S1、将多巴脱羧酶基因导入大肠杆菌内，建立菌种定化多巴脱羧酶与基础反应液的质量体积比为1:旋多巴用量为每1L基础反应液投入100~120g320mM咪唑50mMPBS200mMNaCl洗脱杂质、再用500mM咪唑50mMPBS200mMNaCl洗脱，提取纯化得精酶液；精酶液按30~60mg蛋白/1g已活化的环氧基基树脂载体搅拌5小时或以4[0010]优选的，步骤S3中，基础反应液包含0.20~0.40mol/L的磷酸盐缓冲液和0.25~固定化后的多巴脱羧酶可重复使用50次合成能力不下降，离子交换树脂可重复利用100次5养11小时，菌株生长至OD600达到44，加入终浓度为0.2mmol/L的IPTG(异丙基硫代半用600ml20mM咪唑_50mMPBS_200mMNaCl溶液洗杂，再用300ml500mM咪唑_50mMPBS_时，收集解吸流出液，直至解吸流出液OD280为9.6时停止解吸，收集的多巴胺解吸液共8.6L，解吸液中多巴胺含量91.3g，利用高效液相色谱法检测解吸液中多巴胺纯度达到6
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