医学检验分子诊断技师试题及答案

医学检验分子诊断技师试题及答案一、单项选择题（每题1分，共25分）1.核酸分子杂交技术的基础是A.抗原抗体结合B.碱基互补配对C.蛋白质与核酸结合D.疏水相互作用答案：B2.PCR反应中，引物的退火温度通常低于其Tm值约A.0℃B.5℃C.15℃D.25℃答案：B3.实时荧光定量PCR中，Ct值是指A.扩增产物达到最大量时的循环数B.荧光信号达到设定阈值所需的循环数C.反应结束时的循环数D.引物开始延伸的循环数答案：B4.TaqMan探针5'端和3'端通常标记的基团分别是A.荧光基团和荧光基团B.荧光基团和淬灭基团C.淬灭基团和荧光基团D.生物素和亲和素答案：B5.下列方法中用于检测RNA分子的是A.SouthernblotB.WesternblotC.NorthernblotD.斑点ELISA答案：C6.Sanger测序法中终止DNA链延伸的物质是A.dNTPB.ddNTPC.ATPD.引物答案：B7.核酸在紫外分光光度计中的最大吸收波长是A.230nmB.260nmC.280nmD.320nm答案：B8.纯DNA样品的OD260/OD280比值一般为A.0.5B.1.2C.1.8D.2.5答案：C9.检测基因点突变最直接准确的方法是A.PCR-RFLPB.Sanger测序C.琼脂糖凝胶电泳D.蛋白印迹答案：B10.实时荧光定量PCR中SYBRGreenI的主要缺点是A.灵敏度低B.不能进行多重检测C.与所有双链DNA结合，特异性较低D.需要特殊仪器答案：C11.PCR实验室使用UNG酶防止产物污染，其作用是A.降解RNAB.降解含dUTP的DNA产物C.降解蛋白质D.降解引物答案：B12.下列不属于分子诊断实验室常规分区的是A.试剂准备区B.标本制备区C.扩增区D.微生物培养区答案：D13.巢式PCR的主要优点是A.提高灵敏度B.提高特异性C.缩短反应时间D.降低试剂成本答案：B14.逆转录PCR主要用于检测A.DNAB.RNAC.蛋白质D.脂类答案：B15.基因芯片技术的核心原理是A.抗原抗体反应B.核酸杂交C.电泳分离D.质谱分析答案：B16.下列关于PCR引物设计原则错误的是A.引物长度一般为18～25bpB.GC含量一般为40%～60%C.两条引物3'端可互补D.避免形成二级结构答案：C17.实时荧光定量PCR中，扩增效率为100%时标准曲线斜率理想值接近A.-2.0B.-3.32C.-4.5D.-5.0答案：B18.检测染色体易位常用的分子诊断技术是A.PCRB.FISHC.WesternblotD.ELISA答案：B19.循环肿瘤DNA（ctDNA）主要来源于A.正常血细胞B.肿瘤细胞凋亡或坏死释放的DNAC.细菌基因组DNAD.病毒核酸答案：B20.单核苷酸多态性（SNP）是指A.单个碱基的插入B.单个碱基的缺失C.单个碱基的变异D.染色体结构变异答案：C21.用于mRNA表达定量的内参基因通常属于A.管家基因B.癌基因C.抑癌基因D.病毒基因答案：A22.琼脂糖凝胶电泳中，DNA片段迁移率主要取决于A.片段长度B.片段序列C.片段浓度D.片段颜色答案：A23.下列哪项是RNA提取过程中必须使用的抑制剂A.蛋白酶KB.RNase抑制剂C.DNaseD.溶菌酶答案：B24.数字PCR的主要优势是A.无需标准曲线即可绝对定量B.成本低C.操作简单D.通量高答案：A25.分子诊断中常用EDTA抗凝管而少用肝素抗凝管，原因是A.EDTA抑制PCR反应B.肝素抑制Taq酶活性C.EDTA降解DNAD.肝素降解RNA答案：B二、多项选择题（每题2分，共10题，共20分）1.PCR反应体系的基本成分包括A.模板DNAB.引物C.dNTPsD.耐热DNA聚合酶E.缓冲液和Mg²⁺答案：ABCDE2.影响PCR扩增特异性的因素有A.退火温度B.Mg²⁺浓度C.引物设计D.循环次数E.模板纯度答案：ABCDE3.实时荧光定量PCR常用的荧光化学方法包括A.SYBRGreenIB.TaqMan探针C.分子信标D.荧光共振能量转移探针E.银染答案：ABCD4.核酸提取质量评估的常用指标包括A.浓度B.OD260/OD280比值C.完整性D.OD260/OD230比值E.颜色答案：ABCD5.可用于基因突变检测的方法有A.Sanger测序B.ARMS-PCRC.高分辨率熔解曲线分析D.基因芯片E.Westernblot答案：ABCD6.下列属于核酸杂交技术的有A.SouthernblotB.NorthernblotC.荧光原位杂交D.斑点杂交E.Westernblot答案：ABCD7.防止PCR实验室污染的措施包括A.严格分区操作B.使用带滤芯吸头C.加入UNG酶消化含dUTP产物D.设置阴性对照E.扩增后开盖通风答案：ABCD8.分子诊断常用标本类型包括A.EDTA抗凝外周血B.新鲜组织C.石蜡包埋组织D.痰液E.尿液答案：ABCDE9.下列属于基因突变类型的有A.点突变B.缺失C.插入D.重复E.倒位答案：ABCDE10.关于Ct值的说法正确的有A.Ct值越大，起始模板量越少B.Ct值越小，起始模板量越多C.Ct值与起始模板浓度成严格反比D.Ct值是荧光信号达到设定阈值所需循环数E.不同批次实验Ct值可直接比较答案：ABD三、填空题（每空1分，共10分）1.PCR扩增的三个基本步骤依次为______、______、______。答案：变性、退火、延伸2.常规PCR使用的TaqDNA聚合酶最适延伸温度为______℃。答案：723.实时荧光定量PCR绝对定量常用的标准品是已知浓度的______或______。答案：质粒DNA、体外转录RNA4.纯RNA样品的OD260/OD280比值通常约为______。答案：2.05.核酸分子杂交中，提高杂交严谨性可通过升高______或降低______实现。答案：温度、盐浓度6.荧光定量PCR熔解曲线分析中，特异性产物通常表现为______个熔解峰。答案：17.Sanger测序反应中，ddNTP与dNTP的区别在于ddNTP的3'端缺少______。答案：羟基（-OH）8.分子诊断报告应当包含检测方法、结果、______和局限性等内容。答案：参考范围9.基因突变命名中，符号“c.”表示______序列，符号“p.”表示______序列。答案：编码DNA、蛋白质10.Southernblot检测DNA时，探针与靶DNA结合依赖______原则。答案：碱基互补配对四、名词解释（每题2分，共5题，共10分）1.Ct值答案：实时荧光定量PCR中，荧光信号达到设定阈值时对应的循环数。Ct值与起始模板拷贝数的对数呈线性负相关，模板量越大，Ct值越小。2.荧光原位杂交（FISH）答案：利用荧光标记的核酸探针与固定在细胞或组织切片中的靶DNA或RNA进行杂交，通过荧光显微镜观察信号位置和数量，用于检测染色体异常、基因扩增或缺失等。3.单核苷酸多态性（SNP）答案：指在基因组水平上由单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性，通常表现为二等位基因变异，是人类可遗传变异中最常见的一种。4.扩增阻滞突变系统（ARMS）答案：利用引物3'端碱基与模板错配会阻碍DNA聚合酶延伸的原理，设计针对野生型或突变型等位基因的特异性引物，通过PCR扩增检测已知点突变。5.熔解曲线分析答案：实时荧光定量PCR结束后，在升温过程中连续采集荧光信号，根据双链DNA解链时荧光染料释放导致的荧光信号变化绘制熔解曲线，用于判断扩增产物特异性和区分不同产物。五、简答题（每题5分，共4题，共20分）1.简述TaqMan探针的工作原理。答案：TaqMan探针为一段寡核苷酸，5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团。探针完整时，荧光基团与淬灭基团距离近，荧光信号被淬灭。PCR退火时探针与模板特异性结合，延伸时TaqDNA聚合酶的5'→3'外切酶活性将探针水解，荧光基团与淬灭基团分离，荧光信号释放。每扩增一条DNA链就释放一个荧光基团，荧光信号强度与扩增产物量成正比，从而实现实时定量。2.简述分子诊断实验室分区设置及气流要求。答案：分子诊断实验室通常分为四个独立区域：试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区。各区应独立设置并有明确的单向流程，从试剂准备区到标本制备区再到扩增区最后到产物分析区。气流压力要求：试剂准备区可正压，标本制备区负压，扩增区负压，产物分析区负压，避免扩增产物气溶胶逆流污染上游区域。各区物品专用，人员不得逆向流动。3.简述RNA提取过程中防止RNA降解的主要措施。答案：使用RNase抑制剂处理实验器材和溶液，常用DEPC处理水配制试剂；操作人员佩戴手套口罩，避免皮肤和唾液污染；标本采集后尽快处理或液氮速冻保存；提取过程中使用异硫氰酸胍等强变性剂抑制RNase活性；低温操作；使用RNase-free的离心管和吸头；必要时在提取体系中加入RNase抑制剂如RNasin；避免反复冻融RNA。4.简述Sanger测序法的基本原理。答案：Sanger测序又称双脱氧链终止法。在四个独立反应体系中加入模板、引物、dNTP和少量一种ddNTP。由于ddNTP缺少3'-羟基，掺入后无法形成下一个磷酸二酯键，DNA链合成终止。通过调整ddNTP与dNTP比例，使每个碱基位置随机终止，产生一系列长度相差一个碱基的DNA片段。经高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳或毛细管电泳分离，根据片段末端标记的荧光或放射性信号读取碱基序列。六、计算与综合分析题（每题5分，共3题，共15分）1.某实验室提取DNA后，取5μLDNA样品加蒸馏水至1000μL，在紫外分光光度计上测定OD260=0.12，OD280=0.065。已知DNA浓度计算公式为：DNA浓度（μg/mL）=OD260×50×稀释倍数。请计算该样品DNA浓度，并判断纯度是否合格，说明理由。答案：稀释倍数=1000μL÷5μL=200倍。DNA浓度=0.12×50×200=1200μg/mL。OD260/OD280=0.12÷0.065≈1.85，位于1.8～2.0之间，说明DNA纯度较好，蛋白质污染较少，可用于后续分子诊断实验。2.某荧光定量PCR实验检测HBVDNA，标准品浓度分别为1×10⁶、1×10⁵、1×10⁴、1×10³IU/mL，对应Ct值分别为18.2、21.5、24.8、28.1。待测样本Ct值为23.0。请计算标准曲线回归方程，并计算待测样本HBVDNA浓度，同时评价该标准曲线扩增效率是否在可接受范围。答案：以Ct值为纵坐标y，以标准品浓度对数值lgC为横坐标x，四个点分别为(6,18.2)、(5,21.5)、(4,24.8)、(3,28.1)。计算斜率k=(18.2-28.1)÷(6-3)=-9.9÷3=-3.30，截距b=18.2-(-3.30×6)=18.2+19.8=38.0。回归方程为y=-3.30x+38.0。待测样本Ct=23.0，代入23.0=-3.30x+38.0，得x=(38.0-23.0)÷3.30=4.545，浓度=10⁴·⁵⁴⁵≈3.5×10⁴IU/mL。扩增效率E=[10^(-1/斜率)-1]×100%=[10^0.303-1]×100%≈(2.01-1)×100%≈101%。理想效率为90%～110%，该标准曲线效率约101%，在可接受范围内。3.某非小细胞肺癌患者外周血ctDNA检测结果显示EGFR基因第21外显子L858R突变阳性，未检测到T790M突变。请分析该结果对靶向治疗选择的意义，并说明分子诊断报告应包含哪些要素。答案：EGFR基因L858R突变是EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）的经典敏感突变，提