CN119403814A 用于河鲀毒素的提取和纯化的方法 （威克斯药业有限公司）

2025.01.03PCT/CA2023/0505622023.04.26WO2024/007068EN2024.01.11用于从含有TTX的生物材料中提取TTX的方23.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第一有机溶剂和/或所述第二有机溶剂还4.根据权利要求3所述的方法，其中所述有机酸分别以小于所述第一有机溶剂的总体积的约5%的浓度或小于第二有机溶剂的总体积的约56.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其34相关的化合物(MakarovaM.等人,AngewandteChemie,InternationalEdition2019,567得(PratheepaV.等人,EnvironmentalToxicologyandPharmacology2016,36,[0021]图3是示出了通过在流动相中使用1_庚烷磺酸钠的RP18HPLC法时，TTX峰的洗脱[0022]图4是示出了制备后中间体的TTX纯度(HPLCA%)对比的图。RP18_HPLC步骤(a)和8[0026]本文中术语前无数量词指的是一个/种或多于一个/种(即至少一个/种)。例如，包含不会对相关术语的基本特征和新颖特征或功能产生实质性影响的附加项目、材料、组件、步骤或元素。例如，如果存在于组合物中但不影响组合物的性质或特征的痕量元素以中使用这些术语之一可以为所有其他术语提供支持。9过程的单个步骤来确定，其中TTX的量是相对于该过程的前一步之后获得的材料中可用的此该测量受到生物质中可用的TTX浓度以及提取过程和纯化过[0040]申请人已开发了用于从生物材料中提取和纯化TTX的方法，其中生物材料用有机纹螺属(Nassariusspp.)、榧螺属(Olivaspp.))、扁虫或锤头虫((笄蛭属(Bipaliumspp.)、背平涡虫属(Notoplanaspp.)、海片蛭属(Stylochusspp.)、平角涡虫属蟹(鲎属(Tachypleusspp.)、爱洁蟹属(Atergatisspp.))、贻贝(贻贝属(Mytilus菌属(Pseudomonasspp.)、沙雷氏菌属(Serratiaspp.)、玫瑰杆菌属(Roseobacterspp.)、气单胞菌属(Aeromonasspp.)、希瓦氏菌属(Shewanellaspp.)、海单胞菌属(Marinomonasspp.)、邻单胞菌属(Plesiomonasspp.)、交替单胞菌属(Alteromonas属(Microbacteriumspp.)、微球菌属(Micrococcusspp.)、皮肤球菌属(Kytococcusspp.)、赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillusspp.))和拟杆菌和WO2016061874中公开的水的使用或CN101891751中公开的含水量大于其总体积40%的有(即步骤a1)。对于第二提取，加入5体积(V)溶剂(乙醇+1体积/体积%乙酸)，将混合物以[0113]将0.61kg卵巢(TTX=63ppm)解冻约45分[0115]将0.51kg卵巢(TTX=48ppm)解冻约45分箱中；此外，过滤后分离出606g湿残渣。经过第一提取后，TTX的回收率为R%=70%(TTX=[0121]在使用前，将3.78kg(TTX=约50ppm)的河鲀卵巢在5℃至10℃下储存过夜进行解体残渣(约7L)留在反应器中用于步骤a1)。过滤后收集到澄清溶液(12.1kg，测量密度=以浓缩溶液。浓缩步骤通过将溶液加热至50℃(夹套温度)并施加在蒸馏过程中，搅拌速率设定为100rpm。约26小时后，将所得浓缩溶液从反应器中排出热至50℃(夹套温度)并施加约200毫巴的真空进行；在蒸馏过程中，搅拌速率设定为空抽吸将溶液与固体分离，同时将固体保留在反应器中，并按照相同的程序用8L(3.[0137]将根据实施例4制备的提取后获得的提取溶液的一部分(约800mL)放入1L反应器[0139]将根据实施例6制备的提取后获得的提取溶液的一部分(约800mL)放入1L反应器[0141]用90/10体积/体积的二氯甲烷/甲醇(0.9L×2)的混合物提取实施例8的过滤浓缩[0145]将来自实施例13的糊状油用水+1%乙酸溶解至V=80mL，并用相同的混合物进一步稀释至V=200mL(相对于油重为4V)。将稀释溶液以1mL等量装入RP一HPLC柱上(Agilent[0148]将来自200次制备运行中收集的主要馏分(收集时间为12分钟至17.5分钟)混合[0150]将对应于实施例14中获