CN119403835A 靶向白介素-19的抗体和方法 （伊莱利利公司）

2024.12.19PCT/US2023/0658662023.04.18WO2023/205617EN2023.10.2623.根据权利要求2所述的抗体，其中所述HCVR的氨基酸序列是SEQIDNO.11并且所述5.根据权利要求4所述的抗体，其中所述HCVR的氨基酸序列是SEQIDNO.13并且所述9.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至8中任的患者施用有效量的根据权利要求1至8中任一项所述的抗体或根据权利要求9所述的药物15.一种载体，其包含编码SEQID19.一种产生抗体的方法，其包括在使得所述抗体表达的条件下培养根据权利要求1620.一种抗体，其通过在使得所述抗体表达的条件下培养根据权利要求16或权利要求21.一种结合人IL_19的抗体，其包含重链可变区(HCVRLCDR3，其中HCDR1的氨基酸序列是SEQIDNO.21，HCDR2的氨基酸序列是SEQID324.一种结合人IL_19的抗体，其包含重链可变区(HCVRLCDR3，其中HCDR1的氨基酸序列是SEQIDNO.33，HCDR2的氨基酸序列是SEQID并且所述LC的氨基酸序列是SEQID4[0003]自身免疫疾病是身体对其自身组织产生免疫应答而引起的一种形式的免疫介导[0004]目前FDA批准的免疫介导疾病的治疗包括通常用于治疗急性炎症的皮质类固醇以仍然需要靶向不同人靶标和途径的其他疗法来治疗免疫[0005]虽然IL_19抗体在本领域中是已知的(WO2019/143585)，但迄今为止还没有获批性结合。此类IL_19抗体还应具有治疗上可接受的药代动力学(Pk)特征并显示出低免疫原本发明的抗体对人IL_19具有拮抗作用。本发明的实施方案提供了包含轻链可变区(LCVR)5文LCVR和HCVR的氨基酸序列具有至少实施方案包括包含编码SEQIDNO:12或14的第一核酸序列和编码SEQIDNO:6的第二核酸含编码SEQIDNO:6的核酸序列的第二载体。更进一步的实施方案包括包含本发明的一种达的条件下培养本公开的细胞以及从培养基[0011]本发明的实施方案还包括结合鼠IL_19的抗体，该抗体包含重链可变区(HCVR)和是SEQIDNO.22，HCDR3的氨基酸序列是SEQIDNO.23，LCDR1的氨基酸序列是SEQID据一些实施方案，HCVR的氨基酸序列是SEQIDNO.24并且LCVR的氨基酸序列是SEQID发明的抗体还包括氨基酸序列与本文氨基酸序列具有至少95％同源[0012]本发明的另一个实施方案包括结合鼠IL_19的抗体，该抗体包含重链可变区根据一些实施方案，HCVR的氨基酸序列是SEQIDNO.36并且LCVR的氨基酸序列是SEQID6包括包含编码SEQIDNO:26的第一核酸序列和编码SEQIDNO:27的第二核酸序列的载体。含编码SEQIDNO:38的第一核酸序列和编码SEQIDNO:39的第方法包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗体或本公开[0020]VH和VL区可以进一步细分为被称为互补决定区(CDR)的超变区，所述超变区散布人,“Canonicalstructuresforthehypervariableregionsofimmunoglobulins”,JournalofMolecularBiology,196,901_917(1987)；Al_Lazikani等人,“Standardconformationsforthecanonicalstructuresofimmunoglobulins”,JournalofMolecularBiology,273,927_948(1997))、North(North等人,“ANewClusteringofAntibodyCDRLoopConformations”,JournalofMolecularBiology,406,228_256(2011))或IMGT(可在上找到的国际免疫遗传学数据库；参见Lefranc等人,7[0023]产生和纯化抗体的方法是本领域熟知的，并且可例如在Harlow和Lane(1988),Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,Cold[0025]可使用已知的方法制备和纯化本发明的抗体。例如，可对编码HC(例如过程，但并不一定表示完全消除了所有障碍症状。治疗包括施用本发明的抗体或其药物组合物以治疗将受益于IL_19活性降低的人类的疾病或病症，并且包括：(a)抑制疾病的进一8确定可基于所使用的不同表位作图技术而变化，并且也可随所使用的不同实验条件而变的(例如，Rockberg和Nilvebrant,EpitopeMappingProtocols:MethodsinMolecular备并且包含本发明的抗体以及一种或多种药学上可接受的载剂和/或稀释剂(例如，Remington,TheScienceandPracticeofPharmacy，第22版,LoydV.编辑,物的合适载剂包括在与本发明的抗体组合时保留分子活性并且不与患者的免疫系统反应的疾病或障碍的风险中或表现出如本文所述的疾病或障碍的患者施用包含本发明的抗体本发明的抗体。有效量是指实现期望的治疗结果所必需的量(剂量和时间段以及施用方定的程序参数，序列比较算法计算测试序列相对于参考序列的序列同一性或同源性百分比。示例性序列比对和/或同源性算法可通过Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2:4829(WisconsinGeneticsSoftwarePackage)中，GeneticsComputerGroup,575Science列同一性和序列相似性百分比的算法的一个示例是BLAST算法，其描述于Altschul等人,信息中心(www.ncbi.nlm.nih.g[0037]图1展示了在用于基因分析的银屑病样小鼠模型中比较溶媒治疗的小鼠、抗炎Ab[0038]图2A和图2B表示评价抗鼠IL_19Ab4在银屑病样小鼠模型中的疗效的单个研究的[0039]图3展示了在用于基因分析的特应性皮炎样小鼠模型中，与初始或抗炎治疗的小[0042]图6A和图6B显示了与同种型治疗的小鼠相比，在抗鼠IL_19Ab3治疗的小鼠中从[0043]图7比较了在接触性皮炎的小鼠模型中，初始小鼠的同种型对照与用抗炎剂治疗[0045]图9和图10显示了在接触性皮炎的小鼠模型中使用抗鼠IL_19Ab4的两个单独研[0046]图11显示了在皮肤炎症的特应性皮炎样小鼠模型中IL_19表达与耳朵厚度变化的[0047]图12显示了在皮肤炎症的银屑病样小鼠模型中IL_19表达与临床总评分曲线下面[0048]图13显示了皮肤炎症的特应性皮炎样小鼠模型中的IL_19表达(疾病高峰期与缓[0050]表1中给出了本发明的例示的抗IL_19抗体。可将编码本公开的例示的抗IL_19抗在感受态细胞系(诸如CHO细胞)中重组表达。例示的抗IL_19抗体的各个区域的关系如下的国际免疫遗传学信息系统(InternationalImmunogeneticsInformationsystem8)；性(包括低非特异性和/或血清结合)并且具[0055]用SECTOR8Imager6000(MesoScaleDiagnostics)测量的MesoScaleDiscovery溶液平衡滴定(MSD_SET)测定法用于评估本发明的例示的IL_19抗体与生物素化人IL_19(具有SEQIDNO:1中所列的氨[0056]除非另有说明，所有试剂和材料均来自MesoScaleDiagnostics(Rockville,0.017pM的11点3倍抗体梯度。将混合物在37℃下温育72小时。将MSD96孔板(多阵列96孔分钟。用洗涤缓冲液洗涤三次后，将150μL的1X读取缓冲液T(目录号R92TC_1)添加到该孔中，并在添加缓冲液后5分钟在SECTOR8Imager6000(MesoScaleDiagnostics)上分[0057]通过将S形曲线拟合至使用测定法开发工具试剂盒以归一化ECL值绘图的电化学发光(ECL)响应与log(IL_19浓度)的关系图来确定平衡KD。KD被确定为10pM固定IL_19配体D值由三次独立实验计算，并且数据变异性以三次独立运NAb113.136.83[0061]表2表明例示的抗IL_19抗体mAb1和mAb2在体外对人IL_19具有低皮摩尔结合亲和DiscoveRx蛋白质稀释缓冲液中稀释的22x人(SEQIDNO.1)或食蟹猴(SEQIDNO.15)IL_IL_19抗体对人和食蟹猴IL_19诱导的受体二聚化信号[0068]可基本上如下所述的那样进一步评估IL_19体外中和。A431皮样上皮细胞(ATCC#CRL_1555)表达IL_19受体(IL20Ra/IL20Rb)。IL_19与IL_19受体的相互作用诱导A431皮样10％HIFBS(Gibco#10082147)和1XPenStrep(Gibco#15140_122)]中生长。将细胞在0.05％胰蛋白酶_PBS中解离，并在96孔板(Falcon#353072)中以30,000基铺板于无血清培养基(Opti_MEM(Gibco#31985_070)、0.5％BSA(Gibco#15260_037)和1x钟。此后，除去培养基，并使用磷酸化STAT3(Tyr705)试剂盒(MesoScaleDiagnostics，[0069]表4中显示了例示的抗IL_19抗体使人和食蟹猴IL_19诱导的磷酸化STAT体包被在链霉亲和素板上。将例示的Ab2样品在稀释缓冲液中以1:4稀释至10μg/mL的浓总血浆IL_19浓度显示随时间增加，在336小时达到峰值(对于IV为1651.0pg/mL和[0077]可基本上如本文所述的那样评估本公开的例示的IL_19抗体的药代动力学参数。简而言之，以1mL/kg的体积向雄性SpragueDawley大鼠施用5mg/kgAb1或Ab2在PBS(pH室分析(NCA)计算每只动物(N＝3)的药代动力学参数，并且在适当时通过平均值和标准偏观CL，T1/2＝半衰期F＝SC施用后的生物利用度，计算为(平均AUC0_inf.SC/平均AUC0_[0085]树突细胞(DC)内化测定法评估CD14+单核细胞衍生的树突细胞对分子的内化。简DC。使用Ficoll(#17_1440_02，GEHealthcare)和Sepmate50(#15450，STEMCELL谷氨酰胺和25mMHEPES的RPMI培养基(完全RPMI培养基或培养基，购自Life悬于完全RPMI培养基中并以每孔50μL接种于96孔圆底板中，向其中添加50μL的抗体/探针式将内化信号归一化为IgG1同种型(归一化的内化指数＝0)和内部阳性对照PC(归一化的9.510.39.510.3[0094]MHC相关肽蛋白质组学(MAPP)概要分析了先前为评估免疫原性而用测试分子处理胞来从血沉棕黄层制备来自一组10个正常人供体的原代人树突细胞，并通过在含有5％血清替代品的完全RPMI培养基(ThermoFisherScientific，目录号A2596101)中在37℃和5％CO2下与20ng/mlIL_4和40ng/mlGM_CSF一起温育3天来分化成未成熟树突细胞，如在温育5小时后更换含有5μg/mlLPS的新鲜培养基以将细胞转化为成熟树突细胞。第二天℃直至样品分析。[0096]肽的鉴定是由内部蛋白质组学管道(Higgs等人,2008)针对包含测试分子序列的牛/人数据库使用多种搜索算法(不含酶搜索参数)生成的。将从测试分子鉴定的肽与亲本二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记。将PBMC以4×106个细胞/ml/孔接种在含有5%CTSTM免疫细胞SR(Gibco，目录号A2596101)的AIM_V培养基(LifeTechnologies，目录号增殖CFSEdimCD4+T细胞的百分比除以未刺激孔中的增殖CFSEdimCD4+T细胞的百分比来计[0107]预先存在的反应性测定法评估源自预先存在的抗药物抗体(PEA)和潜在地其他交20.326.1[0113]例示的抗体Ab1和Ab2展示出对于父母(parental)治疗施用必需的溶解度、低聚高分子量(HMW)聚集也是期望的。通过用10K分子量截止过滤器(AmiconU.C.过滤器，配制的样品在4℃和35℃下温育四周。根据标准程序使用CE_SDS和aSEC评估反映化学变化[0118]表10.在四周内通过CE_SDS测量的相对于在4℃下温育的样品的主峰％变化和通序列中约0.2％CDRPTM改变)，表明例示的抗体具有足够的化学稳定性以促进开发具有足天将30mg3.75％咪喹莫特(IMQ)乳膏(Zyclara)(BauschHealthCompaniesInc.,Laval,Quebec,Canada)涂抹于小鼠的剃毛背部(2×2cm区域)。基于体重将小鼠随机分成治疗组，[0123]图1展示了比较溶媒治疗的小鼠、抗炎Ab治疗的小鼠和初始小鼠的临床总评分随2B表示评价mAb4在该模型中的疗效的单个研究的随时间的临床总评分(图2A)和曲线下面耳朵的厚度并记录为基线耳朵测量值。在第1天，用移液管将10μL的MC903(TocrismAb4，通过内部开发的ELISA测量耳朵培养物中的IL_19水平。根据制造商的方案(MesoScaleDiscovery)，使用定制的U_Plex生物标记物MSD组1评估来自耳朵培养物的IL_4和[0127]图3的结果比较了同种型对照与正常的未激发和未治疗小鼠，直至第14天的炎症发对照显示无炎症应答。用已知的抗炎剂以每周10mg/kg给药两周(第0和7天)的治疗显著此外，与初始未治疗的小鼠相比，同种型治疗的小鼠的耳朵中的IL_4和IL_13分泌量升高吸入5％异氟烷麻醉下，将所有小鼠的腹侧剃毛。将100μl异硫氰酸荧光酯异构体I(FITC；天，重复FITC的DBP:丙酮溶液的给予和施用程序。在第5天，用同种型对照Ab或抗鼠抗体结合的mAb3和另一抗鼠IL_19Ab，通过内部开发的ELISA测量耳朵培养物中的IL_19水平。使用GraphPadPrism第9版进行数据分析和统计显著[0131]图7的结果将同种型对照与初始小鼠和用抗炎剂治疗的激发小鼠进行比较，直至始未激发对照显示无炎症应答。激发前用剂量为10mg/kg的抗炎剂治疗24小时显著降低了型治疗组相比，高剂量(20mg/kg)和中剂量(10mg/kg)的mAb4均显著降低耳朵厚度(21％抑[0135]使用定制的96标记物基因表达组和Viia_7平台(AppliedBiosystems)通过两步逆转录试剂盒将先前从小鼠组织纯化的RNA逆转录成cDNA。以1:10稀释所得cDNA以用于下过NanoString按照制造商推荐的方案使用“小鼠癌症免疫谱分析组(MouseCancerImmuneProfilingPanel)”确定基因表达水平。将先前纯化的RNA在无RNA酶的水中稀释至20ng/[0136]通过qRT_PCR或NanoString评估IL19基因表达，