四川商务职业学院《生化分离与分析技术实验》2023 2024学年第二学期期末试卷

四川商务职业学院《生化分离与分析技术实验》2023‑2024学年第二学期期末试卷四川商务职业学院《生化分离与分析技术实验》2023‑2024学年第二学期期末试卷（模拟本校该课程考试题型，适配高职生物、食品类专业，含完整参考答案）班级：\\\\\\\\姓名：\\\\\\\\学号：\\\\\\\\得分：\\\\\\\\一、单项选择题（每题2分，共30分）蛋白质盐析常用的中性盐是（）

A.氯化钠B.硫酸铵C.硫酸钠D.硫酸镁SDS‑PAGE电泳中，SDS的主要作用是（）

A.调节pHB.使蛋白质变性并带上等量负电荷

C.染色D.凝聚蛋白凝胶过滤层析（分子筛）分离蛋白质时，流出顺序是（）

A.小分子先出B.大分子先出

C.同时流出D.按电荷大小流出测定蛋白质浓度，280nm紫外吸收法主要利用哪种氨基酸（）

A.甘氨酸B.酪氨酸、色氨酸C.丙氨酸D.赖氨酸离子交换层析，带负电蛋白优先结合（）

A.阴离子交换剂B.阳离子交换剂

C.凝胶介质D.疏水介质透析的主要目的是（）

A.去除盐等小分子杂质B.沉淀蛋白

C.裂解细胞D.蛋白显色双缩脲法测定蛋白质，显色基团要求（）

A.至少两个肽键B.单个氨基酸

C.游离氨基D.游离羧基蛋白质在等电点时，其（）最低

A.溶解度B.分子量C.吸光度D.电荷密度亲和层析的分离依据是（）

A.分子大小B.特异性生物相互作用

C.电荷差异D.疏水性差异高速离心主要用于（）

A.分离细胞碎片、细胞器、大分子复合物

B.过滤除菌

C.蛋白染色

D.调pH进行层析装柱，柱内不能有气泡，原因是（）

A.增大流速B.造成样品流路不均，分离效果变差

C.升高温度D.提高分辨率考马斯亮蓝G‑250法测蛋白，颜色变化为（）

A.红→蓝B.无色→红色C.黄→绿D.蓝→紫下列哪一项属于粗分离阶段技术（）

A.亲和层析B.盐析C.SDS‑PAGED.高效液相超滤技术主要用于（）

A.样品浓缩、脱盐B.核酸显色

C.细胞破碎D.固定pH不连续PAGE电泳，“浓缩效应”主要发生在（）

A.分离胶B.浓缩胶C.电泳缓冲液D.样品缓冲液二、判断题（对打√，错打×；每题1分，共10分）盐析会使蛋白质空间结构不可逆变性。（）SDS‑PAGE可以用来测定蛋白质相对分子质量。（）凝胶过滤层析中，大分子不能进入凝胶颗粒内部。（）氨基酸可以发生双缩脲显色反应。（）透析袋使用前要检查有无破损漏洞。（）蛋白质pI大于溶液pH时，蛋白带负电荷。（）层析洗脱时流速过快，会降低分离分辨率。（）紫外法测蛋白，核酸杂质会干扰280nm读数。（）亲和层析特异性高，适合精细纯化目标蛋白。（）等电点沉淀法是利用蛋白质在pI处溶解度最低析出。（）三、名词解释（每题4分，共20分）盐析分子筛效应比活力透析亲和层析四、简答题（每题6分，共24分）简述蛋白质分离纯化的一般流程（前处理‑粗分离‑精细纯化‑鉴定）。简述SDS‑聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。盐析和有机溶剂沉淀蛋白质，主要优缺点各是什么？简述离子交换层析的基本原理。五、综合分析计算题（16分）某同学提纯蛋白酶：

①粗酶液总体积100mL，总蛋白500mg，总酶活力10000U；

②经盐析、离子交换层析后，得到纯化酶液20mL，总蛋白20mg，总酶活力6000U。求：

（1）粗酶与纯化酶的比活力；（8分）

（2）酶回收率、纯化倍数；（6分）

（3）简单评价本次纯化效果。（2分）参考答案一、单选（每题2分，30分）1.B2.B3.B4.B5.A

6.A7.A8.A9.B10.A

11.B12.A13.B14.A15.B二、判断（每题1分，10分）1.×2.√3.√4.×5.√

6.×7.√8.√9.√10.√三、名词解释（4分/题，20分）盐析：向蛋白质溶液加入高浓度中性盐，降低蛋白质溶解度，使蛋白质沉淀析出；一般不破坏蛋白高级结构，属于可逆沉淀。分子筛效应：凝胶层析介质为多孔网状颗粒，大分子无法进入颗粒内部，路径短先流出；小分子进入颗粒孔隙，路径长后流出，按分子量大小实现分离。比活力：每毫克蛋白质所含有的酶活力单位，用来表示酶纯度，比活力越高，酶纯度越高。透析：利用半透膜，小分子盐、杂质可以透过，大分子蛋白质不能透过，实现样品脱盐去除小分子杂质的实验技术。亲和层析：依据生物分子间特异性亲和相互作用，目标蛋白与固定相配体特异性结合，杂蛋白被洗脱，之后再洗脱目标蛋白，特异性高。四、简答题（6分/题，24分）蛋白质分离纯化一般流程

①前处理：破碎细胞/组织，缓冲液提取，释放目标蛋白；

②粗分离：盐析、等电点沉淀，去除大量杂质，浓缩样品；

③精细纯化：离子交换、凝胶过滤、亲和层析等层析技术进一步提纯；

④鉴定：电泳、活性测定、浓度测定对产物进行分析鉴定。SDS‑PAGE原理

SDS使蛋白质变性，破坏高级结构，蛋白质结合大量SDS带上大量均等负电荷，掩盖蛋白本身电荷差异；电泳时，蛋白迁移速率只取决于分子大小；小分子迁移快，大分子迁移慢，以此分离、测定蛋白分子量。盐析与有机溶剂沉淀优缺点

盐析：优点，条件温和，蛋白不易变性，处理量大；缺点，样品含盐高，后续需要脱盐。

有机溶剂沉淀：优点，沉淀速度快，脱盐简便；缺点，容易引起蛋白质变性，需要低温操作。离子交换层析原理

介质带有带电基团，溶液中带相反电荷的蛋白质分子吸附到介质上；改变pH或者提高盐浓度，不同蛋白吸附能力不同，被依次洗脱，实现蛋白质分离。五、综合计算题（16分）比活力=总酶活力U÷总蛋白mg；

回收率=纯化后总活力÷粗酶总活力×100%；

纯化倍数=纯化后比活力÷粗酶比活力(1)粗酶比活力=10000÷500=20U/mg

纯化酶比