CN119403921A 用于治疗间皮素阳性癌症的组合物和方法 （A2生物治疗股份有限公司）

2024.09.29PCT/US2023/0116982023.01.27WO2023/147019EN2023.08.03本公开提供了包含对间皮素有特异性的第一激活剂受体和对间皮素阳性癌细胞中已丧失以及制备所述免疫细胞和使用免疫细胞治疗癌2其中所述第一受体是响应于MSLN的激活剂受体；并且其中所述2.根据权利要求1所述的免疫细胞，其中所述HLA_A*3.根据权利要求1_2中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述胞外配体结4.根据权利要求1_2中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的胞外配体结合结构域包含SEQIDNO:1260_1265或表6所公开的序列的互补决定区(CDR)CDR_L1、CDR_L2、5.根据权利要求1_4中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述胞外配体结6.根据权利要求1_5中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述胞外配体结7.根据权利要求1_5中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述胞外配体结其中所述第二受体的所述胞外配体结合结构域包含SEQIDNO:1268，或与其具有至少8.根据权利要求1_7中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体是嵌合抗原受体9.根据权利要求1_8中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体的所述胞外配体结合结构域包含可变重链(VH)部分和可变轻链(VL)部分，所述可变重链(VH)部分包含表3所11.根据权利要求1_10中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体的所述胞外配体结合结构域包含可变重链(VH)部分和可变轻链(VL)部分，所述可变重链(VH)部分包含SEQ3所述可变轻链(VL)部分包含SEQIDNO:279或与其具有85％、至少90％、至少95％、至少12.根据权利要求1_10中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体的所述胞外配体结合结构域包含选自SEQIDNO:3_6、80和154_215的序列，或与其具有至少85％、至少13.根据权利要求1_10中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体的所述胞外配体17.根据权利要求8_16中任一项所述的免疫细胞，其中所述跨膜结构域包含CD28跨膜18.根据权利要求17所述的免疫细胞，其中所述CD28跨膜结构域包含SEQIDNO:11的19.根据权利要求8_18中任一项所述的免疫细胞，其中所述胞内结构域包含CD28共刺20.根据权利要求19所述的免疫细胞，其中所述胞内结构域包含SEQIDNO:285的序21.根据权利要求1_20中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体包含SEQIDNO:22.根据权利要求1_21中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含LILRB1胞内23.根据权利要求22所述的免疫细胞，其中所述LILRB1胞内结构域包含与SEQIDNO:24.根据权利要求1_23中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含LILRB1跨膜25.根据权利要求24所述的免疫细胞，其中所述LILRB1跨膜结构域或其功能变体包含26.根据权利要求1_25中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含LILRB1铰链27.根据权利要求26所述的免疫细胞，其中所述LILRB1铰链结构域包含与SEQIDNO:28.根据权利要求1_27中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含LILRB1胞内4至少99％相同的序列或与SEQIDNO:71相同30.根据权利要求1_29中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含SEQIDNO:31.根据权利要求1_30中任一项所述的免疫细胞，其32.根据权利要求31所述的免疫细胞，其中所述MSL33.根据权利要求1_32中任一项所述的免疫细胞，其A*03的MSLN+/HLA_A*03_34.根据权利要求33所述的免疫细胞，其中所述MSLN+/HLA_A*03_癌细胞源自通过在HLA_A处杂合性的丧失导致HLA_A*03的丧失的MSLN+/HLA_A*35.根据权利要求1_34中任一项所述的免疫细胞，其中在存在具有杂合性丧失的所述MSLN+/HLA_A*03_癌细胞的情况下，所述第一受体和所述第二受体一起特异性激活所述免36.根据权利要求1_35中任一项所述的免疫细胞，其中在存在未通过杂合性的丧失而丧失HLA_A*03的MSLN+细胞的情况下，所述第一受体和所述第二受体一起不会特异性激活38.根据权利要求37所述的免疫细胞，其中所述T细胞是CD8+C39.根据权利要求1_38中任一项所述的免疫细胞，其中MHCI类基因的表达和/或功能42.根据权利要求41所述的免疫细胞，其中所述干扰RNA包含选43.根据权利要求41或42所述的免疫细胞，其中所述干扰RN46.根据权利要求44或45所述的免疫细胞，其中所述shRNA由包含以下序列的序列编码：GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC(SEQIDNO:349)或547.根据权利要求40所述的免疫细胞，其包含对编码B2M的48.根据权利要求47所述的免疫细胞，其中所述一个或多个修饰50.根据权利要求48或49中任一项所述的免疫细胞，其中所述一个或多个失活突变是通过与至少一种特异性靶向编码B2M的内源基因的序列的引导核酸(gNA)复合的核酸引导51.根据权利要求50所述的免疫细胞，其中所述gNA包含选自表12所示的序列的序列，54.根据权利要求53所述的免疫细胞，其中所述干扰RNA能够诱导RNA干扰(RNAi)介导56.根据权利要求52所述的免疫细胞，其包含对编码HLA_A*03的内源基因的序列的一57.根据权利要求56所述的免疫细胞，其中所述一个或多个修饰包含编码HLA_A*03的58.根据权利要求56或57所述的免疫细胞，其中所述一个或多个失活突变是通过与至少一种特异性靶向编码HLA_A*03的内源基因的序列的引导核酸(gNA)复合的核酸引导的核59.根据权利要求1_58中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体包含SEQIDNO:60.根据权利要求59所述的免疫细胞，其包含shRNA，所述shRNA由包含以下的序列编码：GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC(SEQIDNO:349)或61.根据权利要求59或60所述的免疫细胞，其中所述第一受体和所述第二受体由单个662.根据权利要求61所述的免疫细胞，其中所述自T2A自切割多肽包含序列GSGEGRGSLLTCGDVEEN65.一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1_64中任一项所述的免疫细b.第二受体，其包含对HLA_A*03有特异性的胞外配70.根据权利要求68或69所述的多核苷酸或二受体和对B2M有特异性的shRNA的序列由相同的TAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC(SEQIDNO:349)或GTTAACTTCCAATTTACATACCGAAGT性的序列；b.编码所述第一受体的序列包含编码包含SEQIDNO:303的多肽的序列，或与其具有74.一种杀伤在HLA_A*03基因座处具有杂合性丧者施用有效量的根据权利要求1_64中任一项所述的免疫细胞或根据权利要求65_67中任一75.一种治疗患有在HLA_A*03基因座处具有杂合性丧失的MSLN+肿瘤的受试者的MSLN+7c.如果所述正常细胞表达HLA_A*03且所述多个癌细细胞或根据权利要求65_67中任一项所述77.根据权利要求75所述的方法，其中所述受试者是患HLA_A*03表达的恶性肿瘤的杂合HLA_A78.根据权利要求75所述的方法，其中所述受试者是患有表达MSLN并且已丧失HLA_A*03表达的复发性不可切除实体瘤或转移性实体瘤的81.根据权利要求76_80中任一项所述的方法，其中所述82.根据权利要求81所述的方法，其中所述MSLN+/HLA_A*03_癌细胞源自通过在HLA_A处杂合性的丧失导致HLA_A*03的丧失的MSLN+/HLA_A*083.根据权利要求76_82中任一项所述的方法，其中在MSLN+/HLA_A*03_癌细胞存在的84.根据权利要求76_83中任一项所述的方法，其中在存在未丧失HLA_A*03的MSLN+细85.根据权利要求76_84中任一项所述的方法，其中施用述的免疫细胞或根据权利要求59_61中任一项所述的药物组合物减小所述受试者的肿瘤大88.根据权利要求85或86所述的方法，其中施用所述免疫细胞或所述药物组合物阻止89.根据权利要求75_88中任一项所述的方法，其90.根据权利要求75_88中任一项所述的方法，其物引起选择性杀伤受试者的癌细胞但不杀伤受92.根据权利要求90所述的方法，其中施用所述免疫细胞或所述药物组合物引起所述893.根据权利要求75_91中任一项所述的方法，其物较施用包含所述第一激活剂受体但不包含第二抑制性受体的其他等效免疫细胞对受试b.使用根据权利要求68_72中任一项所述的多核苷酸系统或根据权利要求73所述的载95.一种试剂盒，其包含根据权利要求1_64中任一项所述的免疫细胞或根据权利要求9[0002]本申请要求于2022年1月28日提交的美国临时专利申请系列号63/304,409的优先[0005]间皮素(MSLN)于1992年被提议作为癌症靶点(Changetal.CancerRes52:181_颈、子宫、胃、胰腺和肺腺癌的大部分亚群中也表达(Hassanetal.JClinOncol34:组合物和方法可以通过将MSLN靶向的激活剂受体与阻断剂受体配对来避免对正常组织的瘤组织和正常组织中的表达差异可赋予肿瘤[0009]在本公开的免疫细胞的一些实施方案中，HLA_A*03在MSLN+癌细胞中通过杂合性[0010]在一些实施方案中，第二受体的胞外配体结合结构域包含如表6所公开的互补决受体的胞外配体结合结构域包含SEQIDNO:1260_1265的互补决定区(CDR)CDR_L1、CDR_实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含表2所公开的互补决定区(CDR)CDR_L1、配体结合结构域包含SEQIDNO:171的scFv序列；或与其具有至少85％、至少90％、至少些实施方案中，CD28跨膜结构域包含SEQIDNO:11的序列，或与其具有至少85％、至少在一些实施方案中，LILRB1铰链结构域、LILRB1胞内结构域和LILRB1跨膜结构域包含SEQ[0016]在本公开的免疫细胞的一些实施方案中，MSLN+癌细胞是不表达HLA_A*03的MSLN合性丧失的MSLN+/HLA_A*03_癌细胞的情况下，第一受体和第二受体一起特异性激活免疫的序列的序列编码：GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC(SEQIDNO:349)或GTTAACTTCCAATTTACATACCGAAGTATGTAAATTGGAAGTTAAC(SEQIDNO:350)的序列，或细胞包含对编码B2M的序列的一个或多个修饰，其中一个或多个修饰降低B2M的表达和/或个失活突变是通过与至少一种特异性靶向编码HLA_A*03的内源基因的序列的引导核酸ATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC(SEQIDNO:349)或GTTAACTTCCAATTTACATACCGAAGTATGTA的序列包含GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCTTAACAAGCTTTGAGTGC(SEQIDNO:349)或GTTAACTTCCAATTTACATACCGAAGTATGTAAATTGGAAGTTAAC(SEQIDNO:350)，或与其具有至少80％、至少90％或至少95％同一性的序列；(b)编码第一受体的序列包含编码SEQIDNO:[0029]本公开提供了杀伤在HLA_A*03基因座处具有杂合性丧失的MSLN+癌细胞的方法，[0030]本公开提供了治疗患有在HLA_A*03基因座处具有杂合性丧失的MSLN+肿瘤的受试如果正常细胞表达HLA_A*03并且多个癌细胞不表达HLA_A*03，并且多个癌细胞为MSLN阳[0032]在本公开方法的一些实施方案中，受试者是患有表达MSLN(MSLN+)并且已丧失HLA_A*03表达的恶性肿瘤的杂合HLA_A*03患者。在一些实施方案中，受试者是患有表达[0033]在本公开方法的一些实施方案中，癌细胞包含不表达HLA_A*03的MSLN+/HLA_A*在未丧失HLA_A*03的MSLN+细胞存在的情况下，第一受体和第二受体一起不会特异性激活的被杀伤的细胞是癌细胞，约95％的被杀伤的细胞是癌细胞或约100％的被杀伤的细胞是癌细胞。在一些实施方案中，施用免疫细胞或药物组合物引起受试者的至少约40％、约活剂受体但不包含第二抑制性受体的其他等效免疫细[0040]本公开提供了包含本公开的免疫细胞或药物组合物的试剂盒。在一些实施方案[0043]图3是显示TCGA癌症(包含肿瘤和正常样本)中MSLN表达的图。缩写：BLCA(膀胱[0049]图9是显示10个富含亮氨酸重复序列(LRR)和III型纤连蛋白结构域相对于LRRN4[0050]图10A显示基于pMHCHLA_A*02scFvLIR_1的抑制性受体可以在基于无细胞珠的性受体可以抑制MSLNscFvCAR对Jurkat细[0052]图11显示如通过IFNγ的倍数诱导所测量，使用基于pMHCHLA_A*02scFvLIR_1的抑制性受体和HLA_A*02+HeLa和SiHa细胞作为靶细胞通过MSLNscFvCAR，基于pMHC[0053]图12显示使用HLA_A*02+SiHa细胞而非HLA_A*02_SiHa细胞，基于pMHCHLA_A*02scFvLIR_1的抑制性受体抑制由MSL[0054]图13是用于识别由于杂合性的丧失而在癌细胞中丧失的潜在抑制性受体靶点的[0056]图15A是显示HLA_A*02阻断剂抑制针对高密度抗原MSLN的MSLNCAR激活剂。用与表达MSLN或MSLN&HLA_A*02的K562细胞共培养的MSLNLBD1_CAR或MSLNLBD1_CAR&A2_LIR_[0057]图15B是一对图，显示HLA_A*02阻断剂抑制针对高密度抗原MSLN的MSLNCAR激活剂。在存在HLA_A*02的情况下，使用A2_LIR_1阻断剂阻断MSLNLBD1_CART细胞对内源性[0058]图15C是一对图，显示HLA_A*02阻断剂抑制针对高密度抗原MSLN的MSLNCAR激活杀伤的影响部分由激活剂LBD控制，这表明需要进一步优化阻断剂模块或激活剂/阻断剂[0060]图17是一系列图，显示在MSLN+HLA_A*02+Capan_2细胞存在的情况下，HLA_A*[0061]图18是一对图，显示表达具有鼠SS1scFv的第二代CAR的T细胞对MSLN+HLA_A*02+HeLa细胞(左)或天然为MSLN+HLA_A*02+的HCT116野生型(WT)细胞的杀伤可被HLA_A*[0063]图20A是显示LIR_1铰链对HLA_A*02抑制性受体阻断KRASTCR激活Jurkat细胞的[0064]图20B是显示表达KRASTCR激活剂和底部表格中显示的HLA_A*02scFvLIR_1抑制[0065]图21A是显示LIR_1铰链对HLA_A*02抑制性受体阻断KRASTCR激活Jurkat细胞的[0066]图21B是显示表达KRASTCR激活剂和底部表格中显示的HLA_A*02scFvLIR_1抑制[0067]图22A和图22B显示通过两个靶点实现选择性细胞毒性的Tmod方法(Tmod指表达激活剂和抑制剂受体组合的免疫细胞)。图22A显示肺(和其他重要器官)被MSLN(+)间皮衬里解以产生激活剂和阻断剂。etal.,2020)。62个带有不同scFv的CAR构建体(Gen3)在Jurkat细胞中瞬时转染以表达6种新型CAR和3种基准CAR的分子/细胞敏感性(EC50)。对于那些测定中敏感性低于检测限[0071]图25A显示通过用MSLNmAb染色和流式细胞术评估的人类细胞系中MSLN的表达。[0073]图26A显示了本研究中使用的细胞系的总结。各种癌细胞系中MSLN和A*02的表面[0074]图26B显示使用QIFIKIT对MSLN分子/细胞进行定量。抗人MSLN小鼠抗体克隆618923(R&D系统)用于染色约100,000个细胞。清洗细胞后，使用抗鼠IgGF(ab’)2二抗(InvitrogenA21237)对细胞和QIFI珠进行染色。使用QIFI抗原标准曲线定量表面上的转染的野生型内源性MSLN(+)HeLa细胞共培养。共培养6小时后评估功能响应(RLU)。使用确定Jurkat细胞中MSLNCAR3Tmod构[0078]图28A显示MSLN和A*02mRNA和蛋白的绘制的水平。构建体的EC50和IC50与正常用图25B中所示的标准曲线计算蛋白和mRNA水平之间的转换；方法)。图中显示的HeLa和MS751A*02转基因细胞系变体更好地模拟了正常组织中的激活剂和阻断剂或Tmod的原代T细胞以效靶比(E:T)＝1:1与肿瘤或正常靶细胞共培养48小时。A*02:MSLN[0080]图29A显示在细胞毒性测定中与A*02阻断剂配对的前导CAR3受体与基准CAR的比培养来评估细胞毒性。通过用未转导的T细胞稀释转导的原代T细胞为最终有效的效靶比[0083]图30A显示MSLNCAR3Tmod细胞在混合的肿瘤和正常细胞共培养物中选择性杀伤=9:1(其他比率参见图31B)。将转导了CAR3或CAR3Tmod构建体的原代T细胞与HeLa靶细胞[0085]图31A显示MSLNCAR3Tmod细胞在混合的肿瘤细胞和正常细胞共培养物中选择性别使用在MSLN(+)A*02(+)正常细胞和MSLN(+)A*02(一)肿瘤细胞系中表达的GFP和RFP进行[0086]图31B显示CAR3和CAR3Tmod在混合的正常和肿瘤共培养物中的细胞毒性，其中正或CAR3Tmod转导的原代T细胞以E:T＝1.2:1与肿瘤细胞或正常靶细胞共培养48小[0088]图32B显示在Jurkat细胞功能测定中，对MSLN(+)和MSLN(_)对照靶细胞子集的[0089]图33A显示RACA(重复抗原攻击测定)和可逆测定的示意图。将CAR3或CAR3Tmod转[0091]图33C显示通过流式细胞术分析用标记的sMSLN单体或四聚体对瞬时转染的CAR[0092]图34A、图34B和图34C显示在异种移植模型中Tmod构建体介导的肿瘤细胞的选择35A显示用MSLNCAR或CAR3Tmod转导的原代T细胞以E:T＝1.4:1与HLA_AKO肿瘤或A*02转[0094]图36显示A*02阻断剂在A*02(+)或(_)T细胞中的顺式结合消除了功能。由于自体低(KD)B2M可恢复阻断剂的可用性。图37E显示B2MshRNA也恢复了对MSLN(+)A*02(+)“正[0096]图38A显示通过从scFv文库进行多轮细胞分选来富集抗HLA_A*11结合剂。在靶探[0097]图38B显示mRNA滴定测定中的Jurkat细胞激活：用连续稀释的HLA_A*11mRNA转染HeLa靶细胞，并瞬时转染JurkaT细胞以表达HLA_A*11CAR4。6小时共培养后评估功能响应构建体的JurkaT细胞在内源性MSLN(+)H[0099]图39B和图39C显示MSLNCAR3+A*11阻断剂的原代T细胞细胞毒性测定。转导CAR3mLIFN_γ过夜处理HeLa靶细胞所诱导的PD_L1存在的影响。用抗PD_1抗体的阻断同样对[0101]图41显示在Jurkat细胞功能测定中MSLNCARA*03Tmod构建体的表征。mBAGAP_[0102]图42显示来自5个不同供体的原代T细胞中MSLNCARA*03Tmod构建体在MS751靶细胞上的功能表征。mBAsh(GAP_A3)＝具有小鼠阻断剂和激活剂(加上β2MshRNA)的构建[0103]图43显示来自5个不同供体的原代T细胞中MSLNCARA*03Tmod构建体HeLa靶细胞[0104]图44A和图44B显示Tmod构建体介导异种移植模型中肿瘤细胞的选择性杀伤。图44A显示双侧翼肿瘤和正常MS751异种移植模型的示意图。图44B显示通过卡尺测量评估的继性细胞疗法的免疫细胞)中表达，并将这些免疫细胞的活性靶向表现出杂合性的丧失或模块)的作用是抑制第一受体对免疫细胞的激活。每个受体含有与特定配体结合的配体结提供了一种明确区分肿瘤与正常组织的方法。发生LOH的一个基因座是人类白细胞抗原受体在存在表面阻断剂抗原(例如HLA_A*02或HLA_A*03蛋白)的情况下来阻止激活免疫细性抗原，如果能够通过适当的治疗方法特异性靶向这些癌细胞，则可以介导选择性杀伤其他等位基因区分开来。抑制性受体的示例性靶点包括但不限于主要组织相容性复合体性癌细胞中丧失。或者，抑制性受体的进一步示例性靶点包括但不限于细胞间粘附分子1受体如MSLN或MSLNpMHC响应性激活剂受体激活的工程化T细胞安全地治疗MSLN阳性癌症[0109]本公开的组合物和方法可以降低或消除MSLN在正常组织上的表达引起的剂量限制性毒性(DLT)。本公开提供了使用过继性细胞疗法通过添加第二抑制性受体靶向癌细胞中的MSLN来治疗MSLN阳性癌症的方法，所过减轻其毒性使这些MSLN靶向的受体可用作[0111]在变型中，本文所述的组合物和方法可用于杀伤靶细胞和/或治疗由于杂合性丧[0112]美国专利申请公开号2022/0370497中描述的方法和组合物通过引用整体并入本苷酸的核苷酸序列和/或确定由其编码的氨基酸序列，并将这些序列与第二个核苷酸序列个比对序列之间的精确匹配数除以较短序列的长度并乘以100。同一性百分比也可以例如通过使用高级BLAST计算机程序(包括2.2.9版，可从国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)获得)比较序列信息来确定。BLAST程序基于Karlin和Altschul，论于Altschul,etal.,J.Mol.Biol.215:403_410(1990)；KarlinAndAltschul,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873_5877(1993)；和Altschuletal.,NucleicAcids酸或氨基酸)的数量除以两个序列中较短序列中符号的总数。该程序可用于测定所比较蛋17:149_163(1993)的SEG程序确定的查询序列的区段。所需序列同一性程度的范围为大约范围应理解为包括所述范围内的任何整数值一和百分之一)。当术语“约”紧接在数字或数值之前时，意指数字或数值的范围最多±特异性的配体结合结构域是能够区分基因的不同等位基因的配体结合结构域。例如，对HLA_A*02特异性的配体结合结构域不结合，或仅微弱地结合其它HLA_A等位基因如HLA_A*并且仍然具有低水平的与一种或多种不影响其在本文所述的受体系统中的功能的额外靶胞存在下而不是在靶细胞存在下抑制性受体抑制[0143]免疫细胞上的受体表达可以通过报告本文所述的激活剂受体和抑制性受体的存标记的受体特异性配体)对免疫细胞群进行染色，并使用荧光激活细胞分选(FACS)流式细活剂受体和抑制性受体两者的免疫细胞的合适百分比是针对本文所述的方法特异性确定集和/或耗竭步骤可用于免疫细胞群以满足本文所述的免疫细胞、药物组合物和试剂盒的[0144]本文所述的免疫细胞表达的响应性受体可以通过测量预期由受体的胞内结构域生成的信号的生成的测定进行验证。报告细胞系如Jurkat_荧光素酶NFAT细胞(Jurkat细胞)可用于表征响应性受体。Jurkat细胞源自T细胞并包含稳定整合的激活T细胞核因子活剂受体或激活剂和抑制性受体的特定对的免疫细胞(例如Jurkat细胞或原代免疫细胞)与表达增加量的激活剂配体或抑制剂配体的靶细胞的共培养物中测定。通过例如将编码和非靶配体的靶细胞测定的激活剂和抑制性受体的示例性合适的EC50和IC50值包括激活[0145]表达激活剂受体或激活剂和抑制性受体的特定对的本文所述的免疫细胞的激活为阴性对照(不表达激活剂受体的免疫细胞)的百分比来定量免疫细胞激活的百分比。此在表达激活剂受体配体的靶细胞中观察到的特异性杀伤与在表达激活剂受体配体和抑制激活剂受体配体和抑制性受体配体的靶细胞的特异性杀伤小于或等于40％、小于或等于细胞的合适的特异性杀伤值可以是例如至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约细胞的合适的特异性杀伤值可以是例如至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约及不是并且不应被视为承认或任何形式的暗示它们构成有效的现有技术或形成世界上任[0152]本公开提供了第一受体，其包含对靶抗原具有特异性的第一胞外配体结合结构体可以通过将小鼠CDR移植到人框架序列中，随后用某些人框架残基反向替换来自源抗体特异性抗原的肽抗原。由靶癌细胞表达并作为肽抗原(pMHC)由主要组织相容性复合体I类(MHC_I)在癌细胞表面呈递的任何分子可以是第一受体胞外配体结合结构域的合适的靶抗源物。该I类分子是由重链和轻链(β_2微球蛋白)组成的异二聚体。本领域已知超过100种[0163]在一些实施方案中，癌细胞特异性抗原是MSLN或其与主要组织相容性复合体I类[0164]所有MSLN同种型均被视为本公开的癌细胞特异性抗原。MSLN同种型1前蛋白在含以下氨基酸序列：肽抗原包含与SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:2的子序列具有至少80％、至少85％、至少[0173]本公开提供了第一受体，其包含对靶抗原具有特异性的第一胞外配体结合结构[0174]在一些实施方案中，癌细胞特异性抗原是与MHC_I复合的MSLN或MSLN来源的肽抗[0175]可以以配体依赖性方式调节受体活性的任何类型的配体结合结构域被认为在本单链抗体(scFv)(Harlowetal.,1999,In:UsingAntibodies:ALaboratoryManual,LaboratoryManual,ColdSpringHarbor；N.Y.；Houstonetal.,1988,段。在进一步的方面，第一胞外配体结合结构域包含抗体片段，该抗体片段包含scFv或362)，其由ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCTCCGAGGTGCCAGATGT用本领域可获得且熟知的重组DNA或氨基酸序胞受体(TCR)β可变结构域在不存在第二TCR可变结构域的情况下特异性结合抗原。仅Vβ结[0188]在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含TCRα链可变结构域和[0189]在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含scFv抗原结合结构[0223]在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含与SEQIDNO:171的序域包含含有SEQIDNO:171序列的结[0224]在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含与SEQIDNO:3_6外配体结合结构域包含含有SEQIDNO:3_6或80中任一个的序列的scFv抗原结合结构域。在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域基本上由选自SEQIDNO:3_6或80的的序列。一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含表2所示的LCCDR1、LCCDR2和LCCDR3(例如表2的A行、B行或C行的LCCDR1、LCCDR2和[0234]在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含含有序列SGDYYWS(SEQ列CAREDVVKGAFDIW(SEQIDNO:533)的HCCDR3，或相对于其具有最多1、2或3个氨基酸取受体的胞外配体结合结构域包含含有序列RASQSISSYLN(SEQIDNO:535)的LCCDR1、包含序列AASSLQS(SEQIDNO:539)的LCCDR2、包含序列QQSYSTPLT(SEQIDNO:542)的LC中，第一受体的胞外配体结合结构域包含含有序列RASQSISSYLN(SEQIDNO:535)的LCCDR1、包含序列AASSLQS(SEQIDNO:539)的LCCDR2和包含序列QQSYSTPLT(SEQIDNO:542)的LCCDR3。在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含含有序列SGDYYWS(SEQIDNO:438)的HCCDR1、包含序列YIYYSGSTYYNPSLKS(SEQIDNO:454)的HCCDR2、包含序列CAREDVVKGAFDIW(SEQIDNO:533)的HCCDR3、包含序列RASQSISSYLN(SEQIDNO:535)的LCCDR1、包含序列AASSLQS(SEQIDNO:539)的LCCDR2和包含序列缺失的CDR序列。在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含含有序列SGDYYWS(SEQIDNO:438)的HCCDR1、包含序列YIYYSGSTYYNPSLKS(SEQIDNO:454)的HCCDR2、包含序列CAREDVVKGAFDIW(SEQIDNO:533)的HCCDR3、包含序列RASQSISSYLN(SEQIDNO:535)的LCCDR1、包含序列AASSLQS(SEQIDNO:539)的LCCDR2和包含序列QQSYSTPLT(SEQIDNO:542)的LCNO:470)和GGYDGRGFDY(SEQIDNO:534)的序列的CDR。在一些实施方案中，重链包含序列GYTMN(SEQIDNO:448)、LITPYNGASSYNQKFRG(SEQIDNO:470)和GGYDGRGFDY(SEQIDNO:轻链包含SASSSVSYMH(SEQIDNO:538)、DTSKLAS(SEQIDNO:541)和QQWSGYPLT(SEQIDNO:545)的序列。[0236]对MSLN有特异性的抗原结合结构域的示例性重链和轻链的序列如下表3和表4所[0245]在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含表3所示的可变重链区CDR2和HCCDR3)，和(ii)与表3所示的VH序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少[0247]在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含(i应于表4的#列。[0248]在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含SEQIDNO:233的VH序[0249]在一些实施方案中，第一受体的胞外配体结合结构域包含SEQIDNO:279的VL序[0250]在一些实施方案中，本文提供的抗原结合结构域的CDR中的一个或多个(例如，1基酸来改变抗体的CDR的氨基酸序列，可以获得各种效果，例如增加对靶抗原的结合亲和包括将人工特异性移植到特定免疫效应细胞上的工程化受体。CAR可以用于赋予单克隆抗结构域和胞内结构域融合的融合体。其它CAR设计的特异性可以源自受体的配体(例如，胞的细胞因子产生并改善CAR_T细胞的体内扩增。示例性的铰链可以分离自或源自IgD和或与其相同的氨基酸序列：TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(SEQID[0257]ACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGAT(SEQIDTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP(SEQIDNO:9)。在一些实施方案中，CD28铰链包含或基本上由GAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACC至少99％同一性或与其相同的氨基酸序列：FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV(SEQIDNO:CTGGCCTGCTACAGCCTGCTGGTGACAGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTG(SEQIDNO:12)。在一些实施一性、至少99％同一性或与其相同的氨基酸序列：IPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLI(SEQIDATTCCGTGGCTCGGCCACCTCCTCGTGGGCCTCAGCGGGGCTTTTGGCTTCATCATCTTAGTGTACTTGCTGATC(SEQIDNO:14).在一些实[0263]本公开的CAR的细胞质结构域或其它胞内信号转导结构域负责激活其中放置CAR虽然通常可以使用整个胞内信号转导结构域，但在许多情况下没有必要使用整个结构域。[0264]用于本公开的CAR中的胞内信号转导结构域的实例包括T细胞受体(TCR)和共受体案中，胞内激活结构域确保存在激活CART细胞的效应子功能所必需的T细胞受体(TCR)信[0269]AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGCGTAGAGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGACTCAGTACAGCCACCAAGGA依赖性初级激活的序列(初级细胞质信号转导序列)和以抗原非依赖性方式作用以提供次[0271]初级细胞质信号转导序列以刺激方式或抑制方式调节TCR复合物的初级激活。以体酪氨酸的激活基序或ITAM。在一些实施方案中，ITAM含有通过任何两个其它氨基酸于本公开的CAR中的含有初级细胞质信号转导序列的ITAM的其它实例包括源自TCRζ、FcR[0272]在一些实施方案中，包含单个ITAM的CD3ζ激活结构域包含与以下序列具有至少列：RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLHMQALPPR(SEQIDNO:17)。在一些实施方案99％同一性或与其相同的核苷酸序列编码：[0273]在一些实施方案中，CAR的细胞质结构域可以被设计为包含CD3ζ信号转导结构域本身或与在本公开的CAR的上下文中有用的任何其它期望的细胞质结构域(一个或多个)组含共刺激分子的胞内结构域的CAR的一部分。共刺激分子是除抗原受体或其配体之外的细与其相同的氨基酸序列：[0276]CCCCCGGAGGCCTGGCCCCACCCGGAAGCACTACCAGCCCTACGCCCCTCCCAGGGATTTCGCCGCCT[0279]GGCCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGA[0283]QNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGK[0284]本公开的CAR的细胞质信号转导部分内的细胞质结构域可以以随机或指定的顺序酸_丝氨酸双联体提供了合适接头的实例。示例性接头包含序列GGGGSGGGGSGGGGSGG(SEQ[0285]本公开的CAR的细胞质信号转导部分内的细胞质结构域可以以随机或指定的顺序99％同一性的序列。[0286]本公开的CAR的细胞质信号转导部分内的细胞质结构域可以以随机或指定的顺序[0290]任何合适的配体结合结构域可以融合到本文所述TCR的胞外结构域、铰链结构域[0291]在一些实施方案中，配体结合结构域融合到一个或多个TCR亚基的一个或多个胞ε或CD3ζ或其片段或衍生物中的任一个或多个可以融合到能够提供本公开的刺激信号的一[0293]分离自或衍生自任何来源的TCR跨膜结构域被认为在本公开的范围内。跨膜结构或最多15个氨基酸)和/或与跨膜蛋白所源自的蛋白的胞内区相关的一个或多个额外的氨膜结构域可以具有一个跨膜区段或多于一个跨膜区段。跨膜结构域/区段的预测可以使用膜锚定系统的非限制性实例包括血小板衍生生长因子受体(PDGFR)跨膜结构域、糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚(翻译后添加到信号序[0301]GTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGG[0303]ACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTG一些实施方案中，胞内结构域包含一个或多个能够向跨膜结构域提供刺激信号的结构域。及这些序列的任何衍生物或变体和具有相同功能能力的任何重组的初级胞内信号转导结构域包括源自负责初级刺内结构域包含与以下序列具有至少80％同一性、至少90％同一性或与其相同的氨基酸序[0314]示例性的共刺激胞内信号转导结构域包括源自负责共刺激信号或抗原非依赖性位基因变体)具有特异性的胞外配体结合结构域。非靶等位基因变体可以通过任何机制在[0318]非靶抗原可以是蛋白或其与主要组织相容性复合体I类(MHC贝的丧失(其可通过癌细胞中杂合性的丧失而发生)产生保留基因的其它多态性变体但已和HLA_A*01等位基因的受试者可患有仅丧失HLA_A*03等位基因的癌症。在这样的受试者并选择性地杀伤表达MSLN但由于杂合性丧失而丧失HLA_A*02(或另一种非靶抗原)的癌细[0319]示例性抑制性受体描述于2020年9月6日提交的PCT/US2020/045228、2020年12月表达由配体结合结构域识别的等位基因的非靶细胞的存在下抑制包含第二受体的免疫细[0325]由非靶细胞表达但不由靶细胞不表达的任何细胞表面分子可以是第二受体胞外的丧失而在癌细胞中丧失的示例性非靶抗原包括ICAM1、COMT和CXCL16。在一些实施方案是包含与主要组织相容性复合体I类(MHC_I)复合的ICAM1、COMT或CXCL16的多态性残基的入本文。在一些实施方案中，ICAM1包含以下氨基酸序列：1MAPSSPRPALPALLVLLGALFPGPGNAQTSVSPSKVILPRGGSVLVTCSTSCDQPKLLGI61ETPLPKKELLLPGNNRKVYELSNVQEDSQPMCYSNCPDGQSTAKTFLTVYWTPERVELAP121LPSWQPVGKNLTLRCQVEGGAPRANLTVVLLRGEKELKREPAVGEPAEVTTTVLVRRDHH181GANFSCRTELDLRPQGLELFENTSAPYQLQTFVLPATPPQLVSPRVLEVDTQGTVVCSLD241GLFPVSEAQVHLALGDQRLNPTVTYGNDSFSAKASVSVTAEDEGTQRLTCAVILGNQSQE301TLQTVTIYSFPAPNVILTKPEVSEGTEVTVKCEAHPRAKVTLNGVPAQPLGPRAQLLLKA361TPEDNGRSFSCSATLEVAGQLIHKNQTRELRVLYGPRLDERDCPGNWTWPENSQQTPMCQ421AWGNPLPELKCLKDGTFPLPIGESVTVTRDLEGTYLCRARSTQGEVTRKVTVNVLSPRYE481IVIITVVAAAVIMGTAGLSTYLYNRQRKIKKYRLQQAQKGTPMKPNTQAT[0334]在一些实施方案中，ICAM1包含与SEQIDNO:27具有至[0336]在一些实施方案中，非靶抗原包含具有SEQIDNO:27的第469位的K的ICAM1多态的ICAM1配体的亲和力高于对具有SEQIDNO27的第469位的E的ICAM1配体的亲和力。在一含配体结合结构域，该配体结合结构域对具有SEQIDNO:27的第469位的E的ICAM1配体的亲和力高于对具有在SEQIDNO:27的第469位的K的ICAM1配[0338]野生型人类COMT在NCBI记录编号NP_000192[0340]在一些实施方案中，COMT包含与SEQIDNO:28具有至少80％、至少85％、至少肽，该肽包含COMT的多态性残基。COMT1的多态性残基包含SEQIDNO:28的氨基酸残基[0342]在一些实施方案中，非靶抗原包含具有SEQIDNO:28的第158位的V的COMT多态高于对具有SEQIDNO:28的第158位的V的C[0343]在一些实施方案中，非靶抗原包含与MHC_I复合的C_X_C基序趋化因子配体16[0344]1MSGSQSEVAPSPQSPRSPEMGRDLRPGSRVLLLLLLLLLVYLTQPGNGNEGSVTGSCYCG61KRISSDSPPSVQFMNRLRKHLRAYHRCLYYTRFQLLSWSVCGGNKDPWVQELMSCLDLKE121CGHAYSGIVAHQKHLLPTSPPISQASEGASSDIHTPAQMLLSTLQSTQRPTLPVGSLSSD181KELTRPNETTIHTAGHSLAAGPEAGENQKQPEKNAGPTARTSATVPVLCLLAIIFILTAA241LSYVLCKRRRGQSPQSSPDLPVHYIPVAPDS[0345]在一些实施方案中，非靶抗原包含CXCL16的多态性。例如，非靶抗原包含源自配体结合结构域对具有SEQIDNO:29的第200位处的V的CXCL16配体的亲和力高于对具有SEQIDNO:29的第200位的A的CXCL16配体的亲和力。在一些实施方案中，非靶抗原包含配体结合结构域对具有SEQIDNO:29的第142位的T的CXCL16配体的亲和力高于对具有SEQIDNO:29的第142位的I的CXCL16配合结构域包含如表6或表7中所示的CDR序列。配体结合结构域包含HLA_B*07配体结合结构域，该配体结合结构域包含表6所示的CDR序配体结合结构域包含HLA_C*07配体结合结构域，该配体结合结构域包含表6所示的CDR序一些实施方案中，第二受体的胞外配体结合结构域包含表6所公开的HLA_A*01互补决定区些实施方案中，第二受体的胞外配体结合结构域包含表6所公开的HLA_A*02互补决定区[0390]在一些实施方案中，第二受体的胞外配体结合结构域包含SEQIDNO:103_108或入的CDR序列。些实施方案中，第二受体的胞外配体结合结构域包含表6所公开的HLA_A*03互补决定区些实施方案中，第二受体的胞外配体结合结构域包含表7所公开的HLA_A*11互补决定区些实施方案中，第二受体的胞外配体结合结构域包含表6所公开的HLA_B*07互补决定区些实施方案中，第二受体的胞外配体结合结构域包含表6所公开的HLA_C*07互补决定区[0400]LLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPRTSGGGTKLEIK(SEQIDASVRISCKASGYTFTSYHIHWVKQRPGQGLEWIGWIYPGNVNTEYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMHLSSLTSEDS[0401]在一些实施方案中，HLA_A*02scFv包含SEQIDNO:42_53中任一个的互补决定区链包含选自SEQIDNO:42_44和48_5SEQIDNO:30_41中任一个的重链部分至少95％相同的序列，并且轻链包含与SEQIDNO:[0403]在一些实施方案中，重链包含与SEQIDNO:30_41中任一个的重链部分相同的序结构域。在一些实施方案中，HLA_A*03配体结合结构域包含SEQIDNO:61的序列。结构域包含SEQIDNO:615_628的序列。域包含SEQIDNO:1259的序列。LIYSASYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPPTFGGGTKLEIK(SEQIDNO:GSMKLSCVASGFTFSNYWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRLKSTNYATHYAESVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNNLRAE一个的重链CDR，且其中抗原结合结构域的轻链包含SEQIDNO:638_641、645_648、650_A*03抗原结合结构域包含重链和轻链，并且重链包含选自SEQIDNO:657_[0411]在一些实施方案中，HLA_A*03抗原结合结构域包含重链和轻链，重链包含与SEQIDNO:615_628或1259中任一个的重链部分至少95％相同的序列，并且轻链包含与SEQIDIDNO:615_629或1259中任一个的轻链部分相同的序列。结构域，该scFv结构域包含选自表5所示序列的序列，或与其至少90％、至少95％或至少5所示的以肽非依赖性方式结合HLA_A*11的以下小鼠和[0416]下表7显示了HLA_A*11配体结合结构域的示例性重链和轻链CDR(分别为CDR_H1、[0420]在一些实施方案中，HLA_A*11scFv包含SEQIDNO:114_122中任一个的互补决定结合结构域包含重链和轻链，并且重链包含选自SEQIDNO:92_110的一个、两个或三个[0421]下表8提供了HLA_A*11抗原结合结构域的示例性重链和轻链序列。在一些实施方的重链部分至少95％相同的序列，并且轻链包含与SEQIDNO:141的轻链部分至少95％相[0422]在一些实施方案中，重链包含与SEQIDNO:114_122中任一个的重链部分相同的包括测量细胞中靶基因的mRNA和/或蛋白水平的技术。测量样本中蛋白水平的方法包括免其比率可以通过本领域已知的方法确定，尤其包括免疫组织化学和荧光激活细胞分选[0436]在一些实施方案中，非靶抗原在靶细胞中的表达水平低于正常细胞中的表达水[0437]非靶细胞表达的任何不被靶细胞表达(或以低水平表达)的细胞表面分子都可以LRRN4包含以下氨基酸序列：[0444]在一些实施方案中，LRRN4包含与SEQIDNO:75具有至同种型均被认为在本公开的范围内。人类UPK3B同种型a前体在NCBI记录号NP_085047.1中基酸序列：[0447]人类UPK3B同种型b前体在NCBI记录编号NP_8[0449]人类UPK3B同种型c前体在NCBI记录号NP_872识别非靶抗原或在MHC_I复合物中的其肽衍生物的胞外配疫细胞激活降低)的信号转导或免疫细胞中蛋白表达的变化。免疫细胞的抑制或阻止可以体在表达该抑制性受体的免疫细胞中激活抑性方式调节受体活性的配体结合结构域均被认为在本公开[0466]本公开的抑制性受体可被设计为包含与抑制性受体的胞外结构域融合的跨膜结地，短的寡核苷酸或多肽接头(优选长度为2至10个氨基酸)可形成抑制性受体的跨膜结构[0470]在一些实施方案中，抑制性胞内结构域分离自具有糖鞘脂微结构域1(PAG1)的磷蛋白膜锚。在一些实施方案，抑制性胞内结构域分离自白细胞免疫球蛋白样受体B1域中的一个或两个)或ZAP70KI_K369性受体包含分离自或源自与胞内结构域和/或跨膜结构域相同的蛋白(例如含ITIM的蛋白)[0480]本公开提供了包含LILRB1抑制性结构域和任选的LILRB1跨膜结构域和/或铰链结照抑制性受体相比，在抑制性受体中包括LILRB1跨膜结构域和/或LILRB1铰链结构域可增胞外免疫球蛋白结构域、跨膜结构域和两至四个基于细胞质免疫受体酪氨酸的抑制基序子序列相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，LILRB1的一个或多个结构域包含与SEQ[0483]在具有分离自或源自LILRB1的一个或多个结构域的受体的一些实施方案中，个结构域由与SEQIDNO:55的序列或子序列相同的多核苷酸结构域或包含至少一个或至少两个基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)的胞内结构域，其中每个ITIM独立地选自NLYAAV(SEQIDNO:56)、VTYAEV(SEQIDNO:57)、VTYAQL(SEQ[0486]如本文所用，“基于免疫受体酪氨酸的抑制基序”或“ITIM”是指具有S/I/V/LxYxxI/V/L(SEQIDNO:547)等的共有序列的保守氨基酸序列，其存在于免疫系统的许多(SEQIDNO:57)。在一些实施方案中，胞内结构域包含与SEQIDNO:60至少95％相同的序(SEQIDNO:58)。在一些实施方案中，胞内结构域包含与SEQIDNO:61至少95％相同的序(SEQIDNO:59)。在一些实施方案中，胞内结构域包含与SEQIDNO:62至少95％相同的序构域包含或基本上由与SEQIDNO:65相[0496]在一些实施方案中，胞内结构域包含与LILRB1胞内结构域(SEQIDNO:70)至少95％相同的序列。在一些实施方案中，胞内结构域包含或基本上由与LILRB1胞内结构域[0499]在具体实施方案中，胞内结构域包含至少三个免疫受体酪氨酸抑制性基序[0504]在具体实施方案中，胞内结构域包含至少七个免疫受体酪氨酸抑制性基序