CN119410579A 一种培养nk细胞的方法及应用 （中国医学科学院输血研究所）

本发明公开了一种培养NK细胞的方法及应用。本申请通过将hPSCs在3D培养装置中旋转培材或matrigel等基质胶，成球效率高且方便操28.权利要求1_4任一项所述的方法在培39.权利要求6所述的NK细胞群或权利要求7所述的药物组合物在制备预防/治疗自身免10.权利要求6所述的NK细胞群或权利要求7所述的药物组合物在制备对肿瘤细胞具有4[0012]进一步，所述培养基组分还包括含CHIR99021的补充剂1或含SB_431542的补充剂[0019]进一步，培养形成EB所使用的培养组分包括ncTarget培养基、Blebbistain、Y_5[0039]本发明的第六方面提供了本发明第三方面所述的NK细胞群或本发明第四方面所述的药物组合物在制备预防/治疗自身免疫免疫性疾病、血液系统疾病或癌症的药物中的[0040]本发明的第七方面提供了本发明第三方面所述的NK细胞群或本发明第四方面所述的药物组合物在制备对肿瘤细胞具有杀伤作用的产品中的应6图3是人多能干细胞形成EB球后接种于不同膜材料后向NK细胞诱导分化效率图，图，3B和3C是hiPSCs形成EB球分化10天后接种至不同材料继续培养15天CD56+CD45+NK细图4是人多能干细胞形成EB球后接种于不同孔径MCE后向NK细胞诱导分化效率图，其中，4A是hiPSCs形成EB球分化10天后接种至不同孔径MCE材料继续培养15天CD56和CD45流式检测图，4B和4C是hiPSCs形成EB球分化10天后接种至不同孔径MCE材料继续培养15天图5是人多能干细胞形成EB球后接种于MCE后在不同诱导分化体系中向NK细胞诱中诱导分化30天CD56+CD45+NK细图6是人多能干细胞形成EB球后接种于MCE后向NK细胞诱导分化第30天获得的细球后接种于或不接种于MCE后向NK细胞诱导分化第30天获得的细胞分别与人食道癌细胞种于MCE后向NK细胞诱导分化第30天获得的细胞分别与人食道癌细胞TE_1共培养0~72小时TE_1细胞存活率图，6C是人多能干细胞形成EB球后接种于或不接种于MCE后向NK细胞诱图7是人多能干细胞形成EB球后接种于MCE后向NK细胞诱导分化第30天获得的NK有技术和科学用语通常具有和本发明所属领域的普通技术人员通常理解的意思相同的意[0046]在一些实施方式中，所述过滤膜包括但不限于混合纤维素酯（mixedcellulPTFE聚偏氟乙烯（polyvinylidenefluoride，PVDF玻璃纤维（FiberGlass尼龙6678[0073]在一些实施方式中，药学上可接受的是指当施用于动物诸如人时不产生不利的、[0077]本发明提供了上述NK细胞群或上述药物组合物在制备预防/治疗自身免疫免疫性9按上述方法培养iPSC至90%汇合度时进行拟胚体形成[0085]使用本领域已知的机械或酶解离方法将多能干细胞解离成单个细胞，使用accutase消化酶将iPSC消化为完全的单细胞悬液，细胞以约1~5×106/mL密度接种于为了进一步确认接种和不接种MCE材料培养出的NK细胞是否具有杀伤活性，本次孔板中。按效靶比E:T=5：1的比例分别加入接种和不接种MCE培养后得到的NK细胞，在通过本实验室研发的3D培养装置（一种生物反应器及生物反应设备，申请号：201721202793.0图1A将hPSCs旋转培养自发形成EB，然后在该装置中进一步向造血细胞诱导分化（图1B）。通过流式检测分析发现分化第4天检测到CD34_KDR+中胚层细胞（polyethersulfone，PES聚四氟乙烯（polytetrafluorethylene，PTFE聚偏氟乙烯作用。15和KBM581中接种于MCE上能获得更多的NK细胞。杀伤实验证实，使用本申请的方法诱导得到的NK细胞对食道癌细胞Eca_1和TE_1