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一种小鼠原代肺泡巨噬细胞的体外长期扩种体外长期扩增小鼠原代肺泡巨噬细胞的培养方法。该方法使用含20_40ng/mlGM_CSF、5_15ng/mlTGFβ和0.8_1.2μM罗格列酮的Macrophage_SFM无血清培养基培养分离获得的2Macrophage_SFM无血清培养基中进行扩增培2.根据权利要求1所述的小鼠原代肺泡巨噬细胞的体外长期扩增培养方法，其特征在3.根据权利要求1所述的小鼠原代肺泡巨噬细胞的体外长期扩增培养方法，其特征在4.根据权利要求1所述的小鼠原代肺泡巨噬细胞的体外长期扩增培养方法，其特征在5.根据权利要求2或3所述的小鼠原代肺泡6.根据权利要求5所述的小鼠原代肺泡巨噬细胞的体外长期扩增培养方法，其特征在3用细胞因子M_CSF诱导骨髓前体细胞或血液单核细胞分化为巨噬细胞，被称为骨髓衍生的[0003]现有的研究方法是用含有10%胎牛血清的完全培养基和GM_CSF体外培养肺泡巨噬增培养方法，将分离获得的小鼠原代肺泡巨噬细胞在含20_40ng/mlGM_CSF、5_15ng/mlTGFβ和0.8_1.2μM罗格列酮的Macrophage4里，我们应用Macrophage_SFM无血清培养基和GM_CSF/TGFβ/Rosiglitazone体外培养新鲜分离的小鼠肺泡巨噬细胞。我们发现此培养体系在体外能够长期大量扩增肺泡巨噬细胞，×放大倍数。5[0030]7.将装有1毫升温肺泡灌洗液缓冲液的[0033]10.将收集的肺泡灌洗液通过70μm细胞过滤器，过滤培养基、细胞因子及激动剂：Macrophage_SFM（Gibco）、100x青霉素/链霉素为了筛选无血清培养基，我们选用了X_VIVO15（Lonza）和Macrophage_SFM6用上述含有不同添加物的培养基培养新鲜分离的原代小鼠肺泡巨噬细胞。每隔2_3天更换SFM无血清培养基能够维持原代肺泡巨噬细胞的长期存活物的培养基培养新鲜分离的原代小鼠肺泡巨噬细胞。每隔2_3天更换含有上述添加物的无[0047]发现这5株来源于不同个体的原代肺泡巨噬细胞均能够长期存活并增殖了40倍左内插入留滞针（24GA拔出针头后使用移液枪导入适量体积（2×106Cellsin50_80μlPBS）的细胞悬液，将GFP阳性的体外扩增的原代肺泡巨噬细胞（exvivoexpanded胞悬液，将GFP阳性的体外扩增的肺泡巨噬细胞（exvivoexpandedaleveolar胞缺陷小鼠的肺中（图7这提示我们体外培养的肺泡巨噬细胞用于体内细胞治疗的可能78

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