CN119410779A 一种基于熔解曲线法检测核酸变异的探针和引物、方法 （广州迈景基因医学科技有限公司）

际生物岛螺旋四路9号第一层C101-3一种基于熔解曲线法检测核酸变异的探针针和引物。本申请的检测方法提高了PCR熔解曲线法对低丰度的变异DNA的检测能力，最低可以22.根据权利要求1所述的一种基于熔解曲线法检测核酸变异的探针和引物，其特征在3.根据权利要求2所述的一种基于熔解曲线法检测核酸变异的探针和引物，其特征在4.根据权利要求1所述的一种基于熔解曲线法检测核酸变异的探针和引物，其特征在5.根据权利要求4所述的一种基于熔解曲线法检测核酸变异的探针和引物，其特征在6.根据权利要求1所述的一种基于熔解曲线法检测核酸变异的探针和引物，其特征在7.根据权利要求1所述的一种基于熔解曲线法检测核酸变异的探针和引物，其特征在3[0002]PCR熔解曲线是对PCR产物进行加热过程中，跟PCR产物相关的荧光信号发生变化而得到的荧光强度变化的曲线。在加热过程中，DNA解链一半时对应的温度称之为熔解温曲线法存在一些缺陷：由于肿瘤组织细胞的异质性，DNA变异可能仅仅在一部分细胞中发[0006]为了提高肿瘤组织的体细胞DNA变异检测的灵敏度和准确性，本申请提供一种基4所述探针靠近5'末端的部分序列与上游引物3'末端开始的部5于野生型对照组只有一个或没有熔解峰，含有变异DNA的检测组的熔解曲线会至少有一个本申请通过上游引物与探针必须存在重叠的部分，通过探针和上游引物存在Tm引物与探针结合到野生型DNA时产生竞争，探针能够很好地压制野生型DNA和上游引物异DNA。是本申请的发夹型探针的结构示意图；图1中的B是本申请的发夹型探针阻止野生型DNA扩6与探针形成的熔解峰：实施例3的0.2%突变频率的突变型DNA的PCR扩增产物与探针形成的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，[0032]其中，本申请的下游引物长度根据PCR引物设计中对Tm值的要求进行调整，可为78[0058]从图2的检测结果中可以看出，野生型DNA的PCR扩增产物与探针形成的熔解峰的解峰，这表明本申请的检测方法能够通过熔解峰不一致这个特征，达到检测变异DNA的目标记是指探针与上游引物序列重叠的部分，加粗标记是指本实施例中的突变型DNA的变异9[0065]从图3的检测结果中可以看出，野生型DNA的PCR扩增产物与探针形成的熔解峰的有熔解峰外，在较低温度50℃左右还存在有突变型DNA的PCR扩增产物与探针形成的熔解标记是指探针与上游引物序列重叠的部分，加粗标记是指本实施例中的突变型DNA的变异型PCR扩增产物与探针形成的熔解峰和0.2%突变频率的突变型DNA的PCR扩增产物与探针形使用未被荧光荧光修饰的探针进行检测时，只需进一步加入荧光染料也可达到检测变异检测EGFRD770delinsGY(c.2308_2309insGT探针：VIC_5'_ctgaGCCAGCGTGG_ACAACCCtcag_[0079]从图5的检测结果中可以看出，未发现野生型DNA的PCR扩增产物与探针形成的熔本实施例还显示本申请的检测方法至少可检测0.2%_1%突变频率的DNVIC_5'_CGAGGTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGTACCTCG_3'_BHQ1(中间序列为SEQ[0087]从图6的检测结果中可以看出，野生型DNA的PCR扩增产物与探针形成的熔解峰的55℃左右有熔解峰外，在较低温度