阿尔茨海默病血液生物标志物检测前样本处理操作规范（2026版）：采集、处理、储存与质控全流程详解

标准与规范·2026版阿尔茨海默病血液生物标志物检测前样本处理操作规范采集·处理·储存·运输·质控全流程详解为AD血液标志物临床检测提供质量控制依据国家神经系统疾病医疗质量控制中心神经内科质控工作组认知障碍疾病质控专病组中华医学杂志2026第106卷第25期2568-2578页CONTENTS目录01背景与意义AD疾病负担·标志物价值·标准化需求02规范制订过程专家团队·制订原则·证据基础03血液采集流程采集前准备·操作规范·保存运送04血液处理流程血清血浆处理·存储·记录追踪05样本运输血浆血清运输·条件·记录06检测前处理与质控解冻稀释·检测顺序·质量控制01背景与意义AD疾病负担·血液标志物临床价值·检测前标准化需求01背景与意义AD疾病负担与早期诊断需求严峻的发病形势阿尔茨海默病是最常见的痴呆类型，已成为危害老年健康的重大疾病。2024年12月，国家卫生健康委员会等15个部门联合印发《应对老年期痴呆国家行动计划（2024-2030）》，全面推动老年期痴呆防控工作。早期精准诊断的必要性随着抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体等疾病修饰治疗药物的临床应用，早期和精准诊断AD的必要性日益凸显。脑内由Aβ沉积形成的老年斑和由磷酸化tau蛋白沉积形成的神经原纤维缠结是AD诊断的病理标准。传统诊断方法的局限由于大脑病理诊断实施困难和受Aβ与tau分子影像技术可及性限制，我国当前大多数医疗机构对AD的诊断缺乏病理学依据，误诊率高。脑脊液检测虽准确但属有创操作，PET影像费用高昂且可及性有限，临床亟需更便捷的检测手段。血液具有易于采集的优势，血液生物标志物检测成为AD早期筛查、临床诊断和病情监测的重要途径。01背景与意义血液生物标志物的临床价值与进展FDA批准首个血检2025年5月，FDA批准首个基于血液的Aβ病理确认检测——Lumipulsep-tau217/Aβ42比值，用于55岁以上有症状患者。敏感性91.7%，特异性超过97%。高诊断准确率p-tau217联合Aβ42/Aβ40比值在初级保健中诊断AD的准确率达88%-92%，显著高于常规临床诊断的61%-73%。中国队列研究AUC达0.92-0.95。纳入诊断标准2024年NIA-AA标准修订，将血浆p-tau217确认为核心1期诊断标志物，与脑脊液Aβ42/40和淀粉样PET并列。2025年AAIC发布血液标志物检测指南。核心挑战：检测前因素影响结果可靠性β-淀粉样蛋白和磷酸化tau蛋白等AD血液标志物的检测结果易受检测前因素影响：样本采集时间、空腹状态、从采集到处理时间、样本处理各步骤参数、样本存储条件、检测过程中样本冻融、样本检测顺序、检测环境等因素都会带来测量结果的变化。这降低了临床应用的可靠性，也限制了不同血液标志物研究间的可比性，因此检测前流程的标准化迫在眉睫。01背景与意义AD核心血液生物标志物谱系Aβ淀粉样蛋白Aβ42：脑内沉积的核心成分，血浆水平随病理进展下降Aβ40：总量参考，Aβ42/Aβ40比值更稳定临床意义：反映淀粉样蛋白病理，是AD病理分期的核心指标稳定性：对冻融和溶血敏感，Aβ40第2次冻融即显著下降p-tau磷酸化taup-tau217：诊断性能最优，AUC达0.92-0.95，AD核心标志物p-tau181：研究最广泛，临床应用较多p-tau217/Aβ42：比值诊断准确性更高，FDA已批准稳定性：相对稳定，但p-tau217/Aβ42比值对溶血敏感t-tau总taut-tau：反映神经元损伤程度临床意义：辅助判断神经元变性程度，与疾病进展相关稳定性：血清中第3次冻融显著下降，血浆中相对稳定注意：非AD特异性，需结合其他标志物综合判断GFAP与NfLGFAP：胶质纤维酸性蛋白，反映星形胶质细胞活化NfL：神经丝轻链蛋白，反映神经轴突损伤临床意义：诊断特异性不足，可用于预测疾病进展稳定性：NfL稳定性好，多次冻融影响小01背景与意义检测前因素对结果的影响AD血液标志物水平在AD患者和正常对照之间的倍率变化小（约8%-15%），限制其诊断效能溶血的影响中度溶血（100mg/dLHb）：Aβ42降10%，Aβ40降11%高度溶血（500mg/dLHb）：Aβ42降36%，Aβ40降42%p-tau217/Aβ42比值对溶血尤为敏感冻融次数的影响血清Aβ40：第2次冻融即显著下降血清Aβ42和t-tau：第3次冻融显著下降血浆标志物：多数在3个冻融循环内保持稳定采血管材质的影响聚苯乙烯材质会导致Aβ和t-tau水平显著降低推荐使用PET材质采血管，减少标志物黏附采血管添加剂（表面涂层、抗凝剂）可能干扰检测其他关键影响因素饮食和药物：非空腹状态下p-tau181升高，Aβ42/Aβ40不受禁食时间影响离心参数：离心力过大或时间过长可导致血细胞裂解储存延迟和温度：4°C可减轻延迟处理的影响01背景与意义本规范的定位与目标针对AD血液标志物易黏附、易降解、对冻融敏感的特性，本规范提出低吸附耗材使用、规范操作、控制样本冻融次数等针对性措施。血液处理的标准化可提高AD血液标志物临床诊断的可靠性和机构间的一致性。规范覆盖范围血液采集采集前准备采血物品选择静脉穿刺操作采集后保存运送血液处理血清分离处理血浆分离处理样本分装存储记录与追踪样本运输血浆运输条件血清运输条件运输记录追踪干冰运输规范检测前处理冻存样本解冻样本稀释操作检测顺序控制质量控制体系02规范制订过程专家团队·制订原则·证据基础·参考队列02规范制订过程制订单位与专家团队牵头单位国家神经系统疾病医疗质量控制中心神经内科质控工作组认知障碍疾病质控专病组通信作者王延江教授陆军军医大学大坪医院（陆军特色医学中心）神经内科，重庆400042唐毅教授首都医科大学宣武医院神经内科北京100053郁金泰教授复旦大学华山医院神经内科上海200040陈晓春教授福建医科大学附属协和医院神经内科福州35000102规范制订过程制订原则与文献检索方法本规范的制订遵循三个基本原则，确保科学性、适用性和实用性一参照国际标准与国际接轨，参考阿尔茨海默病协会全球生物标志物标准化联盟（GBSC）的建议和国际共识。二结合我国国情使本规范能够适应我国医疗机构和科研机构的常规实践和条件，兼顾临床诊断和科学研究的需求。三兼顾临床与科研规范针对AD血液生物标志物检测前样本处理操作规范相关重要问题进行了系统的文献检索。文献检索策略检索数据库包括PubMed、中国知网和万方数据知识服务平台，检索时间为自建库至2026年1月。中文关键词为"阿尔茨海默病""血液生物标志物""检测前过程""影响因素""指南""专家共识""操作规范"和"质量控制"；英文关键词为"Alzheimer'sdisease""bloodbiomarker""pre-analyticalprocess""influencefactor""guideline""consensus""standardprocedure"和"qualitycontrol"。02规范制订过程证据基础与参考队列通过系统文献检索，参照GBSC的建议，结合我国衰老与神经退行性标志物转化研究（TBRAIN）、重庆衰老与痴呆研究（CADS）、大湾区老年脑健康计划、中国认知与衰老研究（COAST）等多个血液标志物研究的实践经验，征求部分国内医疗机构、科研机构和生物标志物检测研发企业建议，形成专家共识，制订出本规范。参考的主要国内队列研究TBRAIN队列我国衰老与神经退行性标志物转化研究，为规范提供了重要的本土数据支持。CADS队列重庆衰老与痴呆研究，积累了丰富的血液标志物检测和样本处理经验。大湾区老年脑健康计划Greater-Bay-AreaHealthyAgingBrainStudy，为华南地区人群提供了参考数据。COAST与CABLE队列中国认知与衰老研究、中国AD生物标记和生活方式研究队列，覆盖多地区人群。03血液采集流程采集前准备·采血物品·静脉穿刺·保存运送03血液采集流程·采集前准备采集前准备：饮食与药物饮食状态影响血液标志物水平。与空腹状态比较，非空腹状态下血浆中的p-tau181水平更高，而Aβ42、Aβ40、神经丝轻链蛋白（NfL）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）水平更低，Aβ42/Aβ40不受禁食时间的影响。空腹要求空腹时间：至少禁食8h，以12-14h为宜，但不宜超过16h糖尿病患者：空腹时间不宜超过12h采血时间：宜安排在7:00-9:00采血空腹期间：可少量饮水，但采血前不宜改变饮食习惯药物与生物素生物素（维生素B7）：对生物素标志物的测定具有潜在的干扰作用，因此服用B族维生素者建议停用维生素2-3d采血前24h：受检者不宜剧烈运动其他药物：记录用药情况，便于结果分析时参考03血液采集流程·采集前准备采集前准备：运动情绪、采血时间与输液运动和情绪运动和情绪可能影响血液标志物水平。采血当天受检者宜避免情绪激动。采血前宜静息至少5min，使身体状态稳定后再采血。采血时间为了尽量减少采血时间引起的潜在偏差，建议在同一研究中，所有受检者都在同一时间段采血。血浆中Aβ42、Aβ40、总tau蛋白具有较弱的昼夜节律性变化。昼夜节律而Aβ42/Aβ40、p-tau217、p-tau181、p-tau231等标志物水平则保持相对稳定。统一采血时间可减少系统误差。输液的影响与处理输液是影响血液标志物水平及其检测稳定性的潜在因素，宜在输液结束3h后采血。对于输注代谢缓慢且严重影响检测结果（如脂肪乳剂）成分的液体，宜在下次输注前采血。紧急情况必须在输液时采血时，宜在输液的对侧肢体或同侧肢体输液点的远端静脉采血，并告知检验人员。03血液采集流程·采血物品采血物品准备与采血管选择采血管材质选择推荐：聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）材质采血管避免：聚苯乙烯材质，会导致Aβ和t-tau水平显著降低样本管和吸头：聚丙烯（PP）材质，蛋白低吸附品牌一致性：建议在整个研究中始终使用相同品牌的采血管，并尽可能减少批次数。抗凝剂选择：收集血浆时建议使用EDTA钾盐抗凝采血管，EDTA的不同钾盐形式对检测无明显影响。采血管的各种成分（表面涂层、添加剂等）可能会干扰临床实验室检测结果，是分析前变异的潜在来源。03血液采集流程·操作规范受检者确认、采血管标记与静脉选择受检者身份确认核对受检者的姓名、性别、年龄、住院号、诊疗卡、身份证等信息，确保受检者为被采血者本人。采血前确认并记录受检者空腹状态、运动、服用药物等相关信息。采血管信息标记推荐使用电子条形码，减少人为错误。标记信息应包括受检者唯一识别号、采集日期和时间、采集人员等关键信息。穿刺静脉的选择首选肘前区（正中、头、贵要静脉）。当无法在肘前区的静脉进行采血时，也可选择手背的浅表静脉。目前尚不清楚不同部位静脉血液的AD标志物是否存在差异，需进一步探索。绑扎止血带时间不宜超过1min，宜在采集第一管血时松开止血带，避免止血带绑扎过紧或时间过长导致溶血等情况。03血液采集流程·操作规范静脉穿刺操作规范消毒：待消毒剂自然干燥后进行穿刺，以尽可能避免样本溶血。穿刺与采血要点穿刺角度静脉穿刺针与手臂呈30度左右的角度刺入静脉。采血管的实际采血体积应大于采血管容积的50%。采血管的实际采血体积过少可能导致t-tau水平降低。采血顺序为避免添加剂交叉污染，含不同添加剂的采血管需按序采集：柠檬酸钠管→血清管→肝素管→EDTA管→糖酵解抑制管预防溶血消毒后待部位自然干燥不可穿过血肿部位采血使用注射器采血，确保针头牢固地安装在注射器上以防出现泡沫使用注射器时避免过度用力抽拉针栓轻柔颠倒混匀含有添加剂的标本03血液采集流程·保存运送血液标本采集后的保存与运送核心要求静脉血液标本采集后应及时送检或分装保存。血液运送使用专用送检箱，在采血后30min内室温（15-25°C）条件下运送到血液成分分离或分装地点。运送过程保持采血管直立，避免颠簸，以减少溶血发生。关键参数运送时间采血后30min内完成运送室温条件下（15-25°C）使用专用送检箱运送姿态保持采血管直立避免剧烈颠簸和晃动减少溶血风险注意事项关于极端环境中采集和运输对AD血液标志物的影响，目前缺乏相关数据，有待进一步研究。04血液处理流程血清处理·血浆处理·细胞成分·存储·记录追踪04血液处理流程·血清处理血清处理：静置与离心静置条件含添加剂促凝管：采集后立即轻柔颠倒，室温直立静置30-60min金黄色管盖：凝血时间30min；红色管盖：凝血时间30-60min延迟离心：4°C暂存不超过2h，避免血细胞裂解和蛋白降解离心参数：(1500-2000)×g，室温（15-25°C），离心10-15min含分离胶或促凝剂的采血管可缩短至10min离心前在4°C暂存的样本应在4°C离心离心时间过长或离心力过大可能导致血细胞裂解，过短或过低可能导致血清与血细胞分离不完全。04血液处理流程·血清处理血清处理：吸样、分装与质控品收集吸样混匀用蛋白低吸附移液器吸头从液面上层轻柔抽取血清，留下底部5mm以上上清液以避免吸取细胞成分。转移至蛋白低吸附锥形管，轻柔颠倒或吹打8-10次混合均匀。分装要求使用标注唯一二维码的蛋白低吸附冻存管，血清等分成250μl至1ml。锥形管和样本管置于冰上，吸头尖端位于液面下2mm内，样本垂直、悬空、一次性打入。冻融敏感性与质控品收集血清中的AD生物标志物对冻融次数较为敏感：Aβ40水平在第2次冻融即显著下降，Aβ42和t-tau水平在第3次冻融显著下降。因此通过合理分装减少血清样本的冻融次数十分必要，控制样本冻融次数不超过2次。质控品收集：将所有采血管内剩余的上清汇集至一蛋白低吸附离心管内，(1500-2000)×g离心，4°C10min，再将上清液转移至另一蛋白低吸附离心管中，做好质控品标记，于-80°C冰箱或液氮中冻存。04血液处理流程·血浆处理血浆处理：EDTA管操作规范采血完成后，立即轻柔颠倒5-10次使血液与添加剂混匀。采集完成后，采血管在室温（15-25°C）下直立静置30min。延迟离心可导致血浆AD生物标志物水平下降，其中以Aβ水平的下降最为显著。血浆处理关键步骤离心参数推荐离心参数为2000×g，室温（15-25°C），离心10min。若离心前血液样本在4°C暂存，应在4°C离心。除t-tau在4°C离心条件下水平较低外，其余大多数标志物在室温和4°C离心条件下无显著差异。吸样混匀使用蛋白低吸附移液器吸头或移液管从液面上层轻柔抽取血浆。留下底部5mm以上的上清液以避免搅动细胞层。血浆汇集至锥形管后，根据样本量轻柔颠倒锥形管或使用移液器轻柔吹打8-10次混合血浆。分装与冻融血浆中大多数AD生物标志物在3个冻融循环内保持稳定。分装体积可根据检测使用的仪器和检测项目确定，一般来讲可分装为330μl/管。离心后样本延迟储存置于4°C可减轻延迟储存的影响。04血液处理流程·细胞成分血液细胞成分的处理与利用如需收集血液细胞成分用于其他用途，比如提取DNA、RNA或某类细胞，可根据使用目的对离心后抗凝血的细胞成分进行进一步分离和处理。血液细胞成分的收集应在血浆分离后进行，避免影响血浆标志物的检测质量。细胞成分的处理方法应根据后续检测或研究目的选择合适的分离技术和保存条件。常见用途与处理要点DNA提取用于基因检测和遗传分析。白细胞层分离后可使用专用DNA提取试剂盒。提取后的DNA可在-20°C或-80°C长期保存。RNA提取用于基因表达分析。需使用RNA稳定剂或立即液氮冻存。RNA对温度敏感，应避免反复冻融。特定细胞分离如外周血单个核细胞（PBMC）分离。使用密度梯度离心法或细胞分选仪。分离后的细胞可冻存或直接用于功能实验。04血液处理流程·样本存储样本存储条件与要求长期存储条件存储温度：-80°C冰箱或液氮中样本管：带密封圈的样本管，防止液体蒸发耗材：低温专用冻存管、冻存盒、标签纸存放姿态：样本管需直立保存于样本盒中，防止样本倾斜、倒置或倒置而增加蛋白的吸附。温度监控：低温冰箱需每日记录箱内温度，确保温度波动在正常工作范围。样本信息录入系统后冻存，建立样本存放位置索引，便于快速找到所需样本。待检样本冻融不超过2次。04血液处理流程·记录追踪样本记录与追踪系统推荐使用样本管理系统进行样本的全流程追踪，从采集、处理、存储到检测的每个环节都应有完整记录。每管样本应有唯一标识（二维码或条形码），可通过扫码快速查询样本信息和处理历史。记录信息清单采集与处理信息受检者唯一识别号采集日期和时间采集人员采血管类型和品牌处理时间和方法离心参数存储与使用信息分装日期和体积存储位置（冰箱编号、架号、盒号）冻融次数记录检测项目和检测日期样本状态（在库/已用/废弃）质量异常记录04血液处理流程·注意事项处理注意事项与人员要求处理操作注意事项避免溶血操作轻柔，避免剧烈震荡。吸样时不搅动细胞层。转移样本时避免产生泡沫。低温操作锥形管和样本管置于冰上。操作在低温环境下进行。减少样本在室温下的暴露时间。耗材选择全程使用蛋白低吸附耗材。移液器吸头一次性使用。避免不同样本间交叉污染。人员资质与培训样本采集和处理人员应经过专业培训，考核合格后方可上岗。培训内容包括静脉采血技术、样本处理规范、质量控制要求和生物安全防护。定期进行操作考核和质量评估，确保操作人员持续符合规范要求。建立人员资质档案，记录培训和考核情况。05样本运输血浆运输·血清运输·记录与追踪05样本运输·血浆运输血浆样本运输条件血浆样本在运输过程中应保持低温，避免温度波动导致标志物降解。运输时间和温度条件直接影响样本质量。使用专用冷链运输箱，配备温度记录仪，全程监控运输温度。运输时间与温度条件3小时内室温（15-25°C）运输使用专用送检箱保持样本管直立避免剧烈颠簸3-24小时冷藏（2-8°C）运输使用冰袋或冷链箱避免样本直接接触冰袋记录温度变化超过24小时-20°C或-80°C冷冻运输使用干冰或液氮罐确保全程冷冻状态-20°C下延迟2周对多数标志物无显著影响05样本运输·血清运输血清样本运输与记录追踪血清运输条件血清样本运输条件与血浆基本一致，根据运输时间选择室温、冷藏或冷冻运输。血清样本对温度变化同样敏感，应避免反复冻融。运输过程中保持样本管直立，避免渗漏和污染。运输记录要求记录运输起始和到达时间记录运输过程中的温度变化记录运输人员和接收人员记录样本数量和状态异常情况及时记录和报告接收与验收样本到达检测机构后，接收人员应立即核对样本数量、标识和状态，检查样本是否有溶血、脂血、浑浊、渗漏等异常情况。核对运输记录，确认运输温度符合要求。对不合格样本应记录原因并及时通知送检单位，根据情况决定是否重新采集。验收合格的样本应及时入库或进入检测流程，避免长时间室温放置。06检测前处理解冻离心·样本稀释·检测顺序·盲法设计06检测前处理·解冻离心冻存样本解冻与离心冻存样本应在-80°C冰箱中至少存放24h后再取出解冻。解冻后立即进行离心处理，去除沉淀和细胞碎片。解冻过程应在室温或4°C条件下进行，避免高温加速蛋白降解。解冻与离心操作要点解冻条件室温或4°C解冻避免反复冻融解冻后尽快检测记录解冻时间离心参数2000×g离心10min4°C或室温离心去除沉淀和细胞碎片取上清液用于检测注意事项冻融不超过2次避免样本浑浊异常样本标记记录剩余样本及时回冻06检测前处理·样本稀释样本稀释操作规范稀释液选择推荐：使用检测试剂盒配套的稀释液避免：使用其他品牌或自制稀释液，可能影响检测结果稀释比例：根据检测试剂盒说明书和标志物浓度确定操作要点：吸头尖端位于液面下2mm内，样本垂直、悬空、一次性打入稀释液中。加入样本后，使用移液器吹打3次混匀，避免产生气泡。稀释后的样本应在规定时间内完成检测，避免长时间放置导致标志物降解或吸附。06检测前处理·检测顺序检测顺序与随机化安排同一样本需要检测多种标志物时，应优先检测对冻融最敏感、最易降解的标志物，以减少反复冻融对检测结果的影响。大样本量检测时应采用随机化安排，避免批次效应和检测顺序偏差。推荐检测顺序（按冻融敏感性从高到低）第一优先：Aβ40、Aβ42（最敏感，第2次冻融即显著下降）第二优先：t-tau、p-tau181、p-tau217、BD-tau（第3次冻融显著下降）第三优先：GFAP、NfL（稳定性较好，多次冻融影响较小）06检测前处理·实验设计样本盲法与桥接设计样本盲法设计检测前对样本进行编号盲化，检测人员不知道样本对应的受检者信息和分组情况。盲法设计可以减少检测人员的主观偏差，提高检测结果的客观性和可靠性。样本编号应随机分配，避免按分组或时间顺序排列。桥接设计当检测需要分多个批次进行时，应设置桥接样本。桥接样本在每个批次中都进行检测，用于校准批次间差异。桥接样本应覆盖低、中、高不同浓度水平，确保校准的有效性。质量控制样本设置每个检测批次应设置阳性对照、阴性对照和标准曲线，确保检测系统的稳定性和准确性。使用收集的混合血清或血浆作为内部质控品，每批次检测至少设置低、中、高三个浓度水平的质控样本。质控结果应在允许范围内，否则该批次检测结果无效，需要重新检测。07质量控制内部审核·设备校准·人员资质·不合格样本·外部比对07质量控制·内部管理内部审核、设备校准与人员资质内部审核定期开展内部质量审核检查操作规范执行情况审核记录完整性发现问题及时整改建立持续改进机制设备校准离心机定期校准转速和时间移液器定期校准准确度低温冰箱每日记录温度检测仪器定期维护保养建立设备校准档案人员资质专业培训考核合格上岗定期继续教育和培训操作技能定期考核建立人员资质档案关键岗位人员授权管理质量控制体系建设建立完善的质量管理体系，制定标准操作程序（SOP），明确各岗位职责和操作流程。定期开展质量控制培训和演练，提高全