(2.3.1)-病理组织制片技术病理检验技术

病理组织制片技术——脱水、透明、浸蜡和包埋

基本技术流程取材

固定

洗涤

脱水

透明（媒染）

浸蜡（透蜡）包埋

切片（展片、贴片、烤片）

染色

封片一、脱水

将组织内的水分用某些化学试剂置换出来的过程称为脱水。所使用的化学试剂称为脱水剂。

1．脱水的目的（讨论）2、常用的脱水剂

(1)单纯脱水剂①乙醇

为最常用的脱水剂。

但易使组织收缩、变脆。

脱水剂脱水能力不足（优势）乙醇强组织收缩、变脆丙酮强收缩强、贵异丙醇强收缩弱、硬化小、贵（可取代乙醇）正丁醇较弱（透明）不易收缩、变脆异丁醇较强（透明）收缩、变硬作用小常用的脱水剂及特点3．脱水方法

一般把脱水剂配成各种浓度，自低浓度到高浓度依次进行，使组织中所含水分逐渐减少直至被脱水剂取代。常用梯度乙醇：70%、80%、90%、95%、95%、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ。4．自动脱水机（举例）一次性脱水盒自动脱水机注意

乙醇的量应充足。组织脱水的时间应根据其种类、大小、温度甚至脱水机类型的不同灵活掌握，一般为20～120min。若留置时间太长，会引起组织收缩、变硬，造成切片困难。5．自动脱水机问题处理（1）意外：自动脱水机停止工作。？

处理：按相反顺序依次处理退回。（2）如何换液

将后一缸酒精降级到前一缸酒精使用，100%酒精Ⅱ的位置上使用新配置的100%酒精。二、透明

用某些化学试剂(如二甲苯等)将组织中的脱水剂置换出来，以利于浸蜡和包埋，因组织块浸入这些试剂后常呈半透明状，故称透明(媒浸)。

所使用的化学试剂称为透明剂。1．透明的目的

透明是制片过程中很重要的环节。

大多数脱水剂不能和包埋剂(如石蜡)混溶，而透明剂既可与脱水剂混溶，又能和包埋剂(如石蜡)混溶，能起到桥梁作用。当组织被透明剂充分浸渍时，光线可透过，组织呈现不同程度的透明状态。2．常用的透明剂(1)二甲苯

是常用的一种透明剂。为无色、透明、有毒、易挥发的液体，不溶于水，其透明作用极强。

但易使组织收缩、变形、变脆，故组织块在二甲苯液中留置时间不宜太长。

小组织块以30min为宜，较大组织块可适当延长，但最好不要超过2h。若在无水乙醇之后，先用乙醇-二甲苯混合液(无水乙醇：二甲苯=1：1)处理，再浸入二甲苯，可减轻组织收缩。注意：二甲苯必须保持无水，若二甲苯中含有水分，易被组织吸收而影响透明程度。

三、浸蜡、包埋(一)浸蜡经过透明的组织块在熔化的石蜡中浸渍，使组织中的透明剂被完全置换出来的过程，称为浸蜡(透蜡)。

用于浸蜡的石蜡被称为浸透剂。

1．浸蜡的目的

浸蜡的目的是用石蜡等支持物去置换、替代组织中的透明剂，使组织具有一定的硬度，有利于切片。浸透剂的种类：石蜡、明胶、火棉胶等。思考与讨论

1、脱水但不透明，可以用液态石蜡实现浸蜡的目的吗？为什么？2、脱水、透明、浸蜡和包埋之间是什么关系？石蜡包埋蜡块2．注意事项（1）石蜡有高熔点和低熔点之分，一般使用的是熔点为56℃以上的石蜡。（2）要显示酶和保存抗原活性时，则需使用熔点为54℃以下的石蜡。（3）常规制片常用熔点为56～58℃的石蜡。（4）浸蜡的温度高于熔点2-4℃。（4）浸蜡时间应根据组织的种类、大小及室温的高低确定，一般以3～4h为宜。时间过长，常造成组织变硬、变脆，切片易碎而不成张；时间不足，组织较软，难以切成完好的切片。(二)包埋

用石蜡或其他包埋剂将组织包成一定形状，使其具有一定的硬度和韧度，便于切成薄片的过程，称为包埋。观察与思考

如果组织块经浸蜡后不包埋，可以直接切片吗？图一尚未包埋的组织图二包埋成功的蜡块1．包埋的目的

用包埋剂将经过浸透剂浸透的组织块包起，可使组织具有一定的硬度和韧性，有利于切成薄片，也有利于组织块的妥善保存。2．包埋方法

(1)石蜡包埋法

石蜡包埋法为切片技术中最常用的包埋法。

用石蜡包埋的组织块常称为蜡块，蜡块经编号处理后易于收藏保存。①常规石蜡包埋

一般较硬的组织用较硬的石蜡包埋，柔嫩的组织用较软的石蜡包埋。

多用56℃石蜡，蜡温以高出石蜡熔点2～4℃为宜，过高易造成组织烫伤，过低使组织和石蜡出现裂隙而影响切片。②胃镜标本的包埋③体液标本的包埋

体液标本，如痰液、胃液、尿液、胸水和腹水等，一般不做包埋和切片，若需做切片检查时，也可用石蜡包埋。

(2)火棉胶包埋法

火棉胶切片常用于大块组织的制片(如整个眼球或神经组织等)。3．注意事项

(1)确定包埋面

临床病理诊断过程中，对皮肤或者胃壁等有层次的组织，切片中通常都要同时显示组织各层结构。

所以，包埋时正确的确定包埋面，非常重要。确定包埋面主要方法

①实质性脏器的组织及肿瘤组织一般以组织块最大面作为包埋面。②囊、管状结构的组织如血管和各种囊肿壁等，以横断面为包埋面。③有被覆上皮的组织如皮肤和消化道、呼吸道、泌尿道等自然管道，其包埋面应垂直于上皮面，横断面朝下包埋。(2)同一蜡块内包埋多个组织块时

组织的性质应相同(如同属软组织)，组织块的大小、厚薄要相近，且包埋方向要一致，组织块间的距离不能太大。(3)难切的组织(如皮肤、骨等)以及需切连片的组织均应单独包埋。(4)神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。(5)操作应迅速(尤在室温较低的情况下)(6)若将管腔或空洞标本与小标本包埋在一个蜡块内时，不能将小标本放入管腔或空洞标本内。附：溶液的配置和换算什么是溶质？溶液中被溶剂溶解的物质。组织学中最常用的溶剂？水（一）百分浓度

百分浓度是指每100份溶液中所含溶质的份数，用符号(％)表示。（1）质量比质量百分浓度：指100g溶液中所含溶质的克数。百分浓度=溶质质量g／溶液质量g×100%（2）质量比体积百分浓度：指100ml溶液中所含溶质的克数。百分浓度=溶质质量g／溶液体积ml×100%（3）体积比体积百分浓度：指100ml溶液中所含溶液的毫升数。百分浓度=溶质体积ml／溶液体积ml×100%练习一A．质量-质量百分浓度B．质量-体积百分浓度C．体积-体积百分浓度D．体积-质量百分浓度E．以上均可1．将36g盐酸溶于水中制备一定百分浓度的盐酸溶液，它的百分浓度属于2．制备伊红溶液，应采用的百分浓度计量方法是3．制备75％乙醇，即将75ml纯乙醇加入25ml蒸馏水，因此其百分浓度可计为答案：1．A，2．B，3．C

练习二、高浓度向低浓度稀释公式：C浓×V浓=C稀×V稀例1：使用100ml的1%的氢氧化钠溶液配置0.5%的氢氧化钠溶液？100ml*1%=Xml*0.5%X=200ml练习1：使用50ml的5%的高锰酸钾配置2%的高锰酸钾溶液？例2：配置一份0.0025%的氯化钠溶液。提示：首先配置2.5%的氯化钠溶液，再稀释1000倍。练习2：你需要添加多少毫升水至150ml的20%的氯化钠溶液中获得7.5%的溶液？（二）物质的量浓度定义：物质的量浓度=n(B)/Vn(B)代表溶质的物质的量，V代表溶液的体积，如果没有做特别说明的话，溶剂为水。物质的量的