GBT 19915-2026 猪链球菌病诊断技术标准立项发展报告

猪链球菌病诊断技术标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DiagnosticTechniquesforStreptococcusSuisDisease摘要猪链球菌病（*Streptococcussuis*disease）作为一种重要的人兽共患传染病，长期以来对全球养猪业造成严重经济损失，并对公共卫生安全构成持续威胁。近年来，随着我国生猪养殖规模化和集约化程度不断提升，猪链球菌病的流行病学特征和病原学特性发生了显著变化，原有诊断技术标准已难以完全适应当前疫病防控和监测工作的实际需求。在此背景下，国家标准化管理委员会批准立项修订GB/T19915-2026《猪链球菌病诊断技术》，该标准由国家市场监督管理总局和国家标准化管理委员会于2026年3月31日联合发布，并将于2026年10月1日正式实施。本标准在继承原有技术框架的基础上，系统引入了分子生物学诊断、质谱鉴定等现代检测技术，优化了病原分离鉴定流程，完善了酶联免疫吸附试验（ELISA）等血清学检测方法的操作规范和质量控制要求。本报告就该标准的立项背景、编制原则、主要内容、技术创新及其对兽医学领域和公共卫生事业的预期影响进行了系统阐述，旨在为标准的贯彻实施和相关技术研究提供参考依据。关键词：猪链球菌病；诊断技术；国家标准；分子生物学诊断；人兽共患病；动物疫病防控Keywords:Streptococcussuisdisease;Diagnostictechniques;Nationalstandard;Moleculardiagnostic;Zoonosis;Animaldiseasepreventionandcontrol1引言1.1标准立项背景猪链球菌病是由多种血清型猪链球菌（*Streptococcussuis*）引起的猪只急性或慢性传染病的总称，临床上以脑膜炎、败血症、关节炎、心内膜炎和肺炎为主要特征。该病分布广泛，几乎存在于所有养猪国家和地区。尤其值得关注的是，猪链球菌血清2型不仅对猪群具有高度致病性，还可通过接触感染猪只或其污染产品感染人类，引起脑膜炎、败血症甚至中毒性休克综合征，严重威胁公共卫生安全，已被我国列为法定报告的人兽共患病之一。2005年，我国四川省资阳、内江等地暴发了大规模人感染猪链球菌病疫情，累计报告病例200余例，死亡数十人，引起各级政府和社会各界的高度关注。这一事件深刻揭示了猪链球菌病诊断、监测和防控工作中存在的薄弱环节，也成为推动本标准早期版本制定的直接契机。此后，原国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会组织相关科研单位和高等院校启动了标准编制工作，并于2009年首次发布了GB/T19915-2009《猪链球菌2型病诊断技术》，为我国猪链球菌病的规范化诊断提供了重要的技术依据。进入“十四五”时期以来，我国生猪产业加速转型升级，标准化规模养殖比重持续提升，跨区域生猪调运日益频繁，猪链球菌病的传播风险因素日趋复杂。同时，分子生物学检测技术的快速发展、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）在病原微生物鉴定中的广泛应用，以及高通量测序技术的逐步普及，为猪链球菌病诊断技术的更新升级提供了新的技术可能。此外，2020年实施的《中华人民共和国生物安全法》和修订后的《中华人民共和国动物防疫法》对动物疫病诊断工作提出了更高要求，标准修订的外部环境已经成熟。1.2标准修订的必要性原GB/T19915-2009标准实施至今已超过十五年，其在指导和规范猪链球菌病诊断工作中发挥了积极作用，但面对新形势、新要求，其局限性和不适应性日益凸显。首先，原标准主要针对猪链球菌2型制定诊断规范，而流行病学调查表明，血清2型以外的其他血清型（如1/2型、3型、7型、9型等）引起的病例比例正在上升，原有标准的适用范围已不能覆盖当前疫病防控的实际需要。其次，随着兽医诊断实验室基础设施建设的全面推进，酶联免疫吸附试验（ELISA）、聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR等技术已在全国各级动物疫病预防控制机构和第三方检测机构中广泛普及，亟需将这些成熟技术纳入标准体系，以满足不同层级实验室的诊断需求。再次，国内外对猪链球菌病原学、致病机制和免疫学特性的研究不断深入，特别是在细菌分型鉴定方面，新一代测序技术和生物信息学分析手段的发展为病原体的精准鉴定和溯源调查提供了更为先进的技术手段。因此，通过系统修订，形成覆盖病原学检查、血清学检测与分子生物学诊断等多个技术层面的综合性标准，既是提升我国猪链球菌病诊断能力和防控水平的内在要求，也是完善动物疫病诊断标准体系、推动标准化战略在兽医领域深入实施的重要举措。本标准修订工作对于保障生猪产业持续健康发展、维护公共卫生安全和食品安全均具有重要的现实意义和长远的战略价值。2标准编制依据与原则2.1编制依据本标准依据《中华人民共和国标准化法》及其实施条例、《中华人民共和国动物防疫法》、《中华人民共和国生物安全法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》等法律法规编制，在技术内容上参照了OIE《陆生动物诊断试验与疫苗手册》中猪链球菌病的相关章节，同时参考了世界动物卫生组织（WOAH，原OIE）以及国际标准化组织（ISO）在兽医学诊断技术领域的相关标准文件，确保了标准的科学性、先进性和国际协调性。在技术指标和方法的确定方面，编制组充分收集分析了近年来国内外猪链球菌病诊断技术研究的最新进展，参考了全国动物卫生标准化技术委员会相关技术文件，以及中国兽医药品监察所、中国动物疫病预防控制中心、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所等权威机构发布的技术指南和研究成果，力求各项技术内容具有充分的科学依据和验证数据支撑。2.2编制原则本标准的编制严格遵循以下原则：（1）科学性原则。所有纳入标准的技术方法均经过充分的实验室验证和临床应用评估，确保检测方法的特异性、敏感性和重复性符合规定要求。（2）实用性原则。充分考虑我国各级动物疫病诊断实验室的技术条件和装备水平差异，设置了分层次的技术方案。在方法筛选过程中，对操作的便捷性、检测周期、试剂成本等因素进行了综合考量与权衡，确保所推荐的方法既科学可靠，又切实可行，便于在各级各类实验室推广使用。（3）协调性原则。标准技术内容与国家现行法律法规、动物疫病防治政策以及相关标准体系保持协调一致，避免术语定义、操作程序和判定标准之间的冲突或重复。（4）开放性原则。在确立技术内容时，兼顾国际兽医诊断技术发展前沿趋势，为标准未来的修订和扩展预留接口，同时积极参考和采纳国际通行技术方案，提升标准的国际化水平。3标准主要内容3.1适用范围本标准规定了猪链球菌病的诊断技术及其要求，适用于猪链球菌病的临床诊断、实验室诊断、检疫检验及流行病学调查。标准内容涵盖了猪链球菌的病原学检查（包括细菌分离培养与鉴定）、分子生物学检测（包括常规PCR、实时荧光定量PCR等方法）和血清学检测（主要为ELISA方法），并对各检测方法的适用范围、操作程序、结果判定和质量控制进行了明确规定。标准将猪链球菌的病原分离鉴定方法作为确诊和分型鉴定的基础方法，将PCR检测方法作为快速筛查和病原检测的重要补充手段，将血清学检测用于流行病学调查和感染状态的评估。3.2诊断方法框架3.2.1病原学检查病原分离鉴定是猪链球菌病诊断的“金标准”，也是开展后续分型鉴定和溯源研究的技术基础。标准规定，采集病猪的脑组织、关节液、心血、肝脏、脾脏等病变组织作为样本。样本采集时应严格遵守无菌操作规范并做好个人防护，疑似人或猪感染猪链球菌的样本，必须在生物安全二级（BSL-2）或以上等级的实验室中处理。在培养条件方面，标准明确采用含5%绵羊血的血琼脂平板，在35~37℃、含5%CO₂（或厌氧）环境下培养18~24小时。猪链球菌在血琼脂平板上形成细小、灰白色、半透明、α溶血的菌落。分离菌株需通过革兰氏染色镜检观察形态特征，呈现革兰氏阳性球菌，呈单个、成对或短链状排列。生化鉴定方面包括VP试验、七叶苷水解试验、6.5%NaCl肉汤生长试验等。值得注意的是，仅有α溶血特性尚不足以将猪链球菌与其他草绿色链球菌群进行区分，因此需结合生化反应结果和分子生物学方法加以鉴别。在菌种保存方面，标准要求纯化后的分离菌株应在添加15%~20%甘油的TSB培养基中于-80℃或液氮条件下保存，或采用冻干法进行长期保藏。3.2.2分子生物学检测分子生物学检测方法的纳入是本标准修订的重要亮点之一。聚合酶链式反应（PCR）检测技术具有快速、灵敏、特异等优点，可在24小时内完成检测，特别适用于批量样本的初筛和病原的快速鉴定。标准中明确规定针对猪链球菌种特异性基因（如*16SrRNA*、*gdh*、*recN*等）以及主要毒力相关基因（如*cps2J*、*mrp*、*epf*、*sly*等）设计引物，通过PCR扩增和产物分析实现病原的快速检测和初步分型。其中，*cps2J*基因作为荚膜多糖合成相关基因，可用于猪链球菌血清2型的特异性鉴定；*gdh*基因（谷氨酸脱氢酶基因）在猪链球菌中高度保守，可用作属内种水平的鉴定靶标。实时荧光定量PCR（qPCR）技术是一种在密闭体系中完成扩增和信号检测的方法，较常规PCR具有更高灵敏度和特异性，且可以有效降低产物污染风险。标准推荐优先采用TaqMan探针法进行qPCR检测，判定标准为Ct值≤35判定为阳性，35<Ct值<40判定为可疑，需重复检测或结合其他方法综合判定，Ct值≥40判定为阴性。该方法的检测灵敏度一般可达10¹~10²CFU/mL或拷贝数/反应。此外，标准还引入了多重PCR技术，可在一个反应体系中同时实现猪链球菌的种属鉴定和主要血清型分型，大大提高了检测效率。3.2.3血清学检测酶联免疫吸附试验（ELISA）具有操作简便、高通量、成本较低等优势，适用于大规模流行病学调查和猪群感染状况的血清学评估。标准规定采用间接ELISA方法，以纯化的猪链球菌全菌抗原或重组蛋白（如重组MRP蛋白、重组EPF蛋白等）作为包被抗原，检测血清中的特异性IgG抗体。ELISA方法的判定标准为：样品OD值与阴性对照平均OD值的比值（即S/P值或P/N值）大于设定阈值判定为阳性；介于临界区间的判定为可疑，应在间隔2~3周后重新采样复检。标准要求每批次检测需设置标准阳性对照、阴性对照和空白对照，各孔OD值的变异系数应控制在合理范围内。值得说明的是，由于猪只母源抗体的干扰和亚临床感染等因素，血清学检测结果仅能反映动物既往或当前的感染状态，需结合病原学或分子生物学检测结果进行综合判断后才能作出确诊结论。3.3实验室生物安全和质量管理鉴于猪链球菌为人兽共患病原体，标准对实验室生物安全和质量管理提出了严格要求。首先，涉及猪链球菌分离培养和大量活菌操作的程序必须在生物安全二级（BSL-2）实验室中进行，操作人员应接受专业培训并做好个人防护，佩戴防护手套、护目镜和防护面罩。涉及气溶胶产生的操作（如离心、匀浆、超声裂解等）应在生物安全柜内完成。在实验室质量管理方面，标准对检测过程中使用的主要试剂、培养基、诊断血清等明确规定了质量验收要求，强调每一批次试剂在使用前应进行阳性对照和阴性对照验证。建议各实验室定期参加能力验证计划或实验室间比对活动。同时要求建立完善的检测记录和样品管理系统，规范样品接收、标记、保存和处置程序。在样本保存方面，用于病原学检测的组织样品应在采集后24小时内处理；不能及时检测的，应于2~8℃冷藏保存不超过48小时，或于-20℃以下（长期保存需在-80℃）冷冻保存。用于血清学检测的血清样品在2~8℃条件下可保存1周，长期保存需置于-20℃或更低温度条件下，避免反复冻融。4新旧标准主要技术变化对比与原GB/T19915-2009标准相比，本次修订在技术内容上实现了大幅优化与拓展。首先，标准的适用范围由“猪链球菌2型病”扩展为“猪链球菌病”，突破了仅针对血清2型的限制，使标准可以全面覆盖不同血清型菌株引起的感染诊断。其二，在实验室诊断技术体系中增加了实时荧光定量PCR和多重PCR等分子检测方法，形成了从传统病原学鉴定到现代分子检测的多层次诊断策略。其三，对ELISA技术操作流程和质量控制指标体系进行了系统完善，提出了明确的判定标准。此外，新标准全面强化和细化了生物安全防护要求，并与现行法律法规密切衔接，增强了标准的可操作性和执行力。在附录设置方面，修订版标准提供了更为详细的培养基和试剂配制方法、引物序列信息以及结果报告格式模板等技术资料，有效增强了标准的实用性和可操作性。上述变化充分体现了标准修订紧跟兽医诊断技术前沿、面向基层应用需求、服务疫病精准防控的导向。5主要参与起草单位介绍中国动物卫生与流行病学中心本标准的主要起草单位之一为中国动物卫生与流行病学中心（ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter，CAHEC），该中心是农业农村部直属的正局级事业单位，是国家动物疫病防控技术支撑体系的核心力量。中国动物卫生与流行病学中心的前身可追溯至1979年成立的农业部动物检疫所，2006年经中央机构编制委员会办公室批准更为现名。中心内设国家外来动物疫病诊断中心、国家动物流行病学研究中心、国家疯牛病参考实验室、国家新城疫参考实验室等重要技术机构，同时承担世界动物卫生组织（WOAH）相关协作中心和参考实验室的职能，在国际动物卫生领域具有重要影响力。中心拥有一支高素质的科研和技术人才队伍，现有专业技术人员中高级职称人员占比超过40%，多人入选国家百千万人才工程、农业农村部杰出青年科学家等人才计划。实验室建筑面积逾万平方米，配置了包括第二代和第三代高通量测序仪、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪、流式细胞仪、全自动微生物鉴定系统等在内的大型精密仪器设备，硬件条件达到国际先进水平。中心实验室已获得中国合格评定国家认可委员会（CNAS）认可和国家计量认证（CMA），建立了符合ISO/IEC17025要求的质量管理体系。在猪链球菌病研究领域，中国动物卫生与流行病学中心长期承担全国猪链球菌病监测和流行病学调查任务，建立了覆盖全国主要养殖区域的菌株资源和流行病学数据库，系统开展了猪链球菌病原学、遗传进化、耐药性和致病机制等研究工作。近年来，该中心先后主持或参与完成了多项国家和行业标准的制修订工作，积累了丰富的标准化工作经验。中心相关团队以猪链球菌全基因组测序和比较基因组学分析为切入点，深入解析了我国猪链球菌主要流行血清型的遗传多样性，并围绕药敏试验方法和耐药性监测技术开展了系统研究，相关学术论文发表于EmergingInfectiousDiseases、FrontiersinMicrobiology、VeterinaryMicrobiology等国内外权威学术期刊。6标准实施预期效果与展望6.1对动物疫病防控的促进作用GB/T19915-2026《猪链球菌病诊断技术》的实施，将显著提升我国猪链球菌病诊断工作的规范化水平和质量控制能力。统一的技术标准有利于实现不同地区、不同实验室之间检测结果的可比性和互认性，为全国范围内的疫情监测、流行病学调查和区域化防控管理奠定坚实的技术基础。6.2对公共卫生安全的保障意义猪链球菌病作为重要的人兽共患病，其早期发现和精准诊断对于防止疫情向人群扩散具有关键意义。新标准明确了人感染风险样本的生物安全操作要求，强化了从养殖环节到兽医诊断环节的全链条生物安全理念，将有效降低从业人员的职业暴露风险。6.3对标准化体系建设的贡献标准修订将推动兽医学领域标准化工作的系统化发展，其制定过程中探索建立的方法验证和文本编写规范，可为后续同类标准的制修订提供参考借鉴。同时，本标准的修订也为未来国内标准与国际标准的对接奠定了基础。6.4未来发展方向随着病原微生物诊断技术的高速迭代，猪链球菌病诊断技术标准仍需持