GBT 26347-2026 蚊虫抗药性检测方法 生物测定法标准立项发展报告

蚊虫抗药性检测方法生物测定法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:ResistanceTestMethodsforMosquitoes—BioassayMethods摘要蚊虫传播的媒介疾病（如登革热、疟疾、寨卡病毒病等）对全球公共卫生构成重大威胁，化学防治是控制蚊媒疾病传播的核心手段之一，然而蚊虫对杀虫剂抗药性的不断发展严重削弱了防控效果。科学、规范、统一的抗药性检测方法是开展抗药性监测、制定合理用药策略、延缓抗药性发展的基础。本报告以《蚊虫抗药性检测方法生物测定法》（GB/T26347-2026）标准为对象，系统阐述了该标准的立项背景、编制依据、核心技术内容及其对公共卫生实践的价值。该标准由全国卫生检疫标准化技术委员会归口管理，是对GB/T26347-2010版的修订升级，将于2027年2月1日正式实施。报告详细介绍了标准的主要修改内容，包括幼虫浸渍法与成蚊接触筒法技术参数的更新、实验室质量控制要求的细化，以及标准适用性的扩展。此外，报告还重点介绍了标准主要起草单位中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所在标准编制和抗药性监测领域的技术支撑作用。该标准的实施将为我国蚊媒传染病的精准防控提供重要的标准化技术保障。关键词：蚊虫；抗药性检测；生物测定法；标准修订；公共卫生；媒介生物控制AbstractMosquito-bornediseases,suchasdenguefever,malaria,andZikavirusdisease,poseasignificantthreattoglobalpublichealth.Chemicalcontrolremainsoneofthecorestrategiesforinterruptingdiseasetransmission;however,theescalatingresistanceofmosquitoestoinsecticideshassubstantiallyunderminedtheefficacyofvectorcontrolprograms.Scientific,standardized,andharmonizedresistancetestingmethodsserveasthefoundationforresistancesurveillance,rationalinsecticideuse,andresistancedelaystrategies.Thisreportsystematicallyelaboratesonthebackground,technicalbasis,corecontent,andpublichealthsignificanceofthenationalstandard*ResistanceTestMethodsforMosquitoes—BioassayMethods*(GB/T26347-2026).Thisstandard,supervisedbytheNationalTechnicalCommitteeonHealthQuarantineStandardization,representsacomprehensiverevisionofthe2010editionandisscheduledforimplementationonFebruary1,2027.Thereporthighlightsmajortechnicalupdates,includingrefinedlarvalimmersionandadultcontactbioassayprotocols,enhancedlaboratoryqualitycontrolrequirements,andexpandedapplicability.Furthermore,thereportprovidesadetailedintroductiontotheNationalInstituteofParasiticDiseasesattheChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,theleadingdraftinginstitution,underscoringitstechnicalcontributionstostandardformulationandresistancesurveillance.Theimplementationofthisstandardwillproviderobusttechnicalsupportforprecisevector-bornediseasepreventionandcontrolinChina.Keywords:mosquito;resistancetesting;bioassaymethod;standardrevision;publichealth;vectorcontrol一、引言蚊虫是传播疟疾、登革热、流行性乙型脑炎、寨卡病毒病、黄热病等多种严重传染病的重要媒介生物，其对杀虫剂的抗药性问题已成为全球媒介生物控制领域面临的核心挑战之一。据世界卫生组织（WHO）估计，全球约有半数人口面临蚊媒传染病的感染风险，每年因蚊媒疾病导致的死亡人数超过70万人。化学防治作为当前蚊媒传染病防控最为直接和有效的干预措施，其效果高度依赖于杀虫剂的敏感性状况。然而，长期、大规模、重复使用化学杀虫剂不可避免地诱导了蚊虫抗药性的产生与扩散。据抗药性行动联盟（IRAC）统计，全球已有超过300个蚊虫种群被报道对一种或多种常用杀虫剂产生抗药性。中国作为蚊媒传染病流行区域广泛的国家，中华按蚊（*Anophelessinensis*）、白纹伊蚊（*Aedesalbopictus*）、致倦库蚊（*Culexquinquefasciatus*）等重要媒介种群对拟除虫菊酯类、有机磷类等杀虫剂的抗药性水平呈逐年上升趋势，部分地区甚至出现了对多种杀虫剂的高水平多重抗性，严重威胁到媒介传染病防控的成效。在此背景下，建立科学、标准化的蚊虫抗药性检测方法，对掌握抗药性发生动态、阐明抗性机制、指导杀虫剂合理选用以及制定延缓抗药性发展策略具有不可替代的作用。生物测定法作为抗药性检测的基础方法，通过直接测定蚊虫对杀虫剂的剂量-反应关系，能够客观评价其敏感性和抗性水平，是世界卫生组织推荐和各国广泛采用的标准方法。我国早在2010年即发布了GB/T26347-2010《蚊虫抗药性检测方法生物测定法》，为全国蚊虫抗药性监测工作的规范化开展发挥了重要作用。然而，随着检测技术的进步、国际标准方法的更新以及抗药性监测实践经验的积累，原标准中的部分技术参数和操作细节已难以完全适应新形势下的工作需要，亟需进行系统修订。本报告旨在全面阐述GB/T26347-2026《蚊虫抗药性检测方法生物测定法》的修订背景、技术内容及预期应用效益，为相关技术人员和管理决策者提供参考。二、标准修订背景与现实需求2.1国际标准动态与国内技术发展世界卫生组织（WHO）分别于2016年和2018年发布了更新的《蚊虫幼虫杀虫剂抗药性检测协议》和《成蚊杀虫剂抗药性检测协议》，对试虫准备、诊断剂量、判读标准及质量控制提出了更为细化且更具可操作性的要求。美国疾病控制与预防中心（CDC）的抗药性检测技术亦在不断演进，其瓶底生物测定法（CDCBottleBioassay）因其操作便捷性和结果可标准化程度高，被越来越多的实验室采纳作为补充方法。与此同时，国内在蚊虫抗药性监测领域积累了日益丰富的基础数据和技术经验。全国媒介生物监测网络覆盖范围持续扩大，各省（自治区、直辖市）疾病预防控制中心普遍建立了媒介抗药性监测实验室。然而，由于各实验室在试虫饲养、药剂配制、实验操作和结果判读等环节存在差异，导致不同地区间监测数据的可比性不足，直接影响全国抗药性态势的综合研判和防治策略的精准制定。据中国疾病预防控制中心统计，全国开展蚊虫抗药性监测的县（区）级疾控机构已从"十二五"初期的不足200个增长至目前的500余个，各实验室对标准方法的需求更加迫切和多样化。2.2抗药性发展态势与方法局限性近年来，我国主要传疟媒介中华按蚊和嗜人按蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性已在全国范围内广泛报道，白纹伊蚊对溴氰菊酯、氯菊酯和高效氯氰菊酯的抗性倍数也呈现从低水平向中高水平发展的趋势。在华南和西南部分地区，致倦库蚊已表现出对多种杀虫剂的高水平多重抗性。抗药性问题的严峻形势对抗药性检测方法的灵敏度、准确性和时效性提出了更高要求。GB/T26347-2010标准实施十余年来，在指导全国蚊虫抗药性监测工作中发挥了重要作用，但随着实践经验的积累和外部条件的变化，该版本逐渐暴露出一些有待改进之处。其一，标准中幼虫浸渍法和成蚊接触筒法的部分操作参数与世界卫生组织更新后的推荐方法存在不一致之处，影响了国际间监测数据的横向比较。其二，标准对实验室质量控制、试虫品系管理等关键环节的规定不够具体，而实验室间检测结果的系统偏差可能直接影响抗性水平的准确判定。其三，标准尚未覆盖部分快速发展的新型检测辅助技术及其与生物测定法的互补应用，难以全面满足基层监测工作的实际需要。研究表明，不同实验室间对同一蚊虫种群抗性判定结果的一致率仅为75%~80%，这一数据凸显了方法标准化和质量控制规范化的迫切性。2.3法律法规赋能与政策支持三、标准修订原则与技术路线3.1修订原则本标准修订遵循科学性、先进性、实用性和协调性的基本原则。-科学性：以实验数据为依据，充分借鉴国内外最新研究成果和监测实践经验，确保技术指标的准确可靠。-先进性：积极参考WHO推荐方法和其他国家标准，合理吸收新技术、新方法，保持标准的技术领先性。-实用性：综合考虑不同层级实验室的技术条件和资源配置，确保标准的可操作性和适用性。-协调性：与现行有效的其他相关国家标准和行业标准保持协调统一，避免冲突，形成合力。3.2编制依据标准修订主要参考了以下文件和文献：-世界卫生组织（WHO）2016年版《MonitoringandManagingInsecticideResistanceinAedesMosquitoPopulations》、2018年版《TestProceduresforInsecticideResistanceMonitoringinMalariaVectorMosquitoes》等技术协议；-GB/T26347-2010《蚊虫抗药性检测方法生物测定法》原版框架和内容；-GB/T31719-2015《病媒生物综合管理技术规范》等配套国家标准；-《中华人民共和国药典》及相关药品标准中关于实验质量控制的技术通则；-2010年以来国内核心期刊发表的蚊虫抗药性监测研究报告和抗药性机理研究文献；-全国病媒生物抗药性监测网络积累的历年监测数据和技术报告。3.3标准适用范围本标准规定了蚊虫抗药性检测中生物测定法的基本原理、试验材料、试虫要求、操作步骤、结果计算与判定以及试验报告等技术要求。适用于我国主要传病蚊种包括中华按蚊、嗜人按蚊、微小按蚊、大劣按蚊、白纹伊蚊、埃及伊蚊、致倦库蚊、淡色库蚊和三带喙库蚊等对有机氯类、有机磷类、拟除虫菊酯类及氨基甲酸酯类等常用卫生杀虫剂的抗药性生物测定，也适用于其他蚊虫种类和相关杀虫剂的检测。四、标准核心技术内容4.1标准结构体系本标准按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定编写，在结构上涵盖范围、规范性引用文件、术语和定义、原理、仪器与材料、试剂与药剂、试虫要求、检测方法、结果计算与判定、试验报告等主体章节。修订后的标准结构更加清晰完整，技术内容顺应国际前沿要求进行了系统更新。4.2检测方法体系标准规定的生物测定法主要包括幼虫浸渍法和成蚊接触筒法两种方法，两种方法互为补充，可根据监测目的和试虫采集情况选择使用。（一）幼虫浸渍法幼虫浸渍法主要用于测定蚊虫幼虫对杀虫剂的敏感性，是评价杀虫剂对幼期蚊虫毒力的标准方法。修订后的标准对以下技术环节进行了完善：-试虫要求：明确使用Ⅲ龄末至Ⅳ龄初的幼虫作为供试试虫，规定同一批次试验中幼虫的龄期一致性要求，并要求试虫应来自标准化饲养品系或现场采集后经一代标准饲养的幼虫。-药剂配制：规定使用分析纯级原药，以丙酮为溶剂配制母液，并以含0.5%吐温-80的白开水（或脱氯自来水）系列稀释至所需测试浓度。-试验操作：修订后标准进一步细化了药液体积（如每测试杯100mL）、幼虫转移方式（使用宽口吸管转移幼虫，避免幼虫损伤）、试验温度（(25±1)℃）和光照条件等关键参数。-结果记录：规定24小时或48小时处理后的幼虫死亡数和死亡率计算方式，以及对照死亡率超过10%时的试验无效判定标准。（二）成蚊接触筒法成蚊接触筒法用于测定成蚊对杀虫剂的接触毒性反应，是WHO推荐的成蚊抗药性检测标准方法。本次修订对此方法的以下方面进行了重点更新：-试虫准备：规定使用羽化后3~5天、未吸血的健康雌成蚊作为供试试虫，明确成蚊饲养条件和交配状态的标准化要求。-药纸制备：细化了诊断剂量药纸（或药膜）的制备方法和质量控制要求，包括药剂纯度、药纸浓度范围等。-接触装置：仍以标准接触筒为基本试验装置，分为药纸筒和恢复筒两部分，并设空白对照筒。-接触时间与结果判定：规定标准接触时间为60分钟，恢复期观察时间为24小时，以无法站立或飞行的个体判为死亡。-区分击倒与死亡：要求记录击倒率并在24小时后记录死亡率，以准确评估药剂的致死效果。4.3质量控制与数据分析要求鉴于抗药性检测结果的准确性高度依赖于实验条件和操作的标准化程度，修订后的标准重点强化了以下质量控制要求：-标准敏感品系对照：规定实验室应保有标准敏感品系（如感白纹伊蚊品系、感致倦库蚊品系），并定期测定其对参照杀虫剂的LC₅₀或诊断剂量的敏感性，确保品系敏感性稳定。当对照品系的LC₅₀值与基线值相比出现显著漂移时，应查明原因并予以纠正。-试验条件控制：对温度、湿度、光照周期等环境条件进行了明确规定（如幼虫试验温度为（25±1）℃，成蚊试验温度为（27±1）℃、相对湿度为（75±10）%），以减小环境因素对试验结果的干扰。-对照设置与有效性判定：明确溶剂对照和空白对照的设置要求，规定对照死亡率超过10%（幼虫法）或20%（成蚊法）时试验结果视为无效，需重新测试。-致死中浓度（LC₅₀）和抗性倍数（RR）的计算方法：要求采用概率单位分析法（ProbitAnalysis）计算LC₅₀及其95%置信区间。抗性倍数计算以敏感品系的LC₅₀为基准，当RR<5时为敏感或低水平抗性，5≤RR<10时为中等水平抗性，RR≥10时为高水平抗性。抗性频率以诊断剂量下的死亡率表示。-数据记录与可追溯性：要求对重要试验环节和结果进行完整、规范化的记录，保证数据的可追溯性和报告的可核查性。4.4主要修订内容对比在GB/T26347-2010版本的基础上，本次修订涉及以下关键变化：|修订要点|2010版|2026版（主要变化）||---------|--------|------------------||诊断剂量参数|参照旧版WHO方法，部分虫种/药剂参数需更新|依据WHO最新协议全面校准诊断剂量数据，新增多种药剂与蚊种组合的诊断剂量参考值||幼虫龄期判定|较为笼统|明确Ⅲ龄末至Ⅳ龄初，并增加判定标准说明||成蚊日龄|≦7天|明确3~5天，统一虫龄窗口||试验温湿度条件|仅在常规要求中提及|按幼虫法和成蚊法分别给出明确的温湿度区间||质量控制|无专门章节|新增独立的"质量控制"技术章节，细化对照设置、品系管理和无效试验判定规则||结果表述|以LC₅₀为主|统一采用LC₅₀结合RR分级评价，强调与国际数据可比性||附录资料|—|增加抗性分级判断流程图及标准操作记录表格|4.5抗性判定与分级标准修订后标准在抗性水平的判定和分级方面提供了更为清晰和可操作的规范。当抗性倍数（RR）＜5时判定为敏感或低水平抗性，5≤RR＜10时判定为中等水平抗性，RR≥10时判定为高水平抗性。当采用诊断剂量法（WHO瓶法）时，24小时死亡率介于98%~100%判定为敏感种群，介于90%~97%判定为可能抗性（需进一步验证），低于90%的判定为抗性种群。标准要求对判定为抗性或可能抗性的种群开展抗性机制初步检测（如代谢酶活性测定、靶标位点突变分子检测等），为抗性治理策略的制定提供更全面的信息。五、主要起草单位介绍本标准的修订工作凝聚了国内媒介生物控制领域多家权威机构的集体智慧和丰富实践经验。标准由中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所牵头，联合中国疾病预防控制中心传染病预防控制所、各省（