CN119438562A 基于数字微流控系统的细胞裂解液和蛋白质前处理方法 （广东奥素液芯微纳科技有限公司）

道夏北社区一环路东侧夏北扇面产业基于数字微流控系统的细胞裂解液和蛋白％～2~0.25％RapiGestSF。2.根据权利要求1所述的细胞裂解液，其特征在于，其包括以下活性组分：0.08%~3.根据权利要求1所述的细胞裂解液，其特征在于，其包括以下活性组分：0.09%~其包括以下活性组分：0.09％～0.12％DDM、38～42mMCAA、8～12mMTCE5.根据权利要求4所述的基于数字微流控系统的单细胞蛋白质前处理方法，其特征在6.根据权利要求5所述的基于数字微流控系统的单细胞蛋白质前处理方法，其特征在7.根据权利要求4所述的基于数字微流控系统的单细胞蛋白质前处理方法，其特征在8.根据权利要求4_7任一项所述的基于数字微流控系统的单细胞蛋白质前处理方法，9.根据权利要求4_7任一项所述的基于数字微流控系统的单细胞蛋白质前处理方法，10.根据权利要求4_7任一项所述的基于数字微流控系统的单细胞蛋白质前处理方法，其特征在于，步骤S3中细胞裂解的温度为52℃~60℃,优选54℃~58℃；和/或裂解时间为11.根据权利要求4_7任一项所述的基于数字微流控系统的单细胞蛋白质前处理方法，其特征在于，步骤S4中进行反应的温度为35℃~39℃,时间3[0001]本发明属于生物技术领域，具体地是涉及一种基于数字微流控系统的细胞裂解指将细胞酶切成肽段后直接输送至质谱检测，相比标记方法是无需使用昂贵的标签试剂，[0004]微流控芯片上单细胞非标记定量样本前处理流程依次包括单细胞分离、细胞裂4[0009]单细胞蛋白质样本前处理系统目前已有产品CellenONE，通过液滴成像技术进行单细胞分选，超微量纳升试剂分配体系分配混合液到标准孔板或芯片(包括裂解液和酶试剂)，温控孵育进行反应，与液相进样系统链接直接进样。该体系最终反应体积得到约处理时无法做到平行，第一个样本试剂加入混合与最后一个样本试剂加入混合存在时间％～5[0028]在其中的一些实施例中，步骤S3中细胞裂解的温度为52℃_60℃,优选54℃~58[0029]在其中的一些实施例中，步骤S4中进行反应的温度为35℃~39℃,时间为1.5h~[0030]本发明在研究中发现，在数字微流控系统中，当通过合适的裂解液(0.08%~0.2％DDM+35～45mMCAA+5～15mMTCEP+85～100mMTEAB+0～0.25％ProteaseMAX+0~6[0041]下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Green和[0048]TCEP三乙基羧脲：还原剂，还原二硫键，使被还原的蛋白质更容易裂解和解微流控技术进行单细胞蛋白质组学前处理的方法，其中TMT标记单细胞蛋白组样本前处理7[0068]1mL裂解液0.1％DDM+40mMCAA+10mMTCEP+100mMTEAB+0.15％RapiGestSF配8制：100uL1％DDM+100uL100mMTCEP+100uL400mMCAA+150uL1％RapiGestSF+[0071]因非标样本处理步骤与TMT标样本制备的前半部分处理步骤相同，故以芯片的一[0075]4.在微流控系统中选择阶段1，512nL(0.08％～0.2％DDM+35～45mMCAA+5～15mMTCEP+85～100mMTEAB+0～0.25%[0078]7.裂解反应结束后，从注样孔注入由10μL移液枪注入酶切液512nL(0.05~9[0088]实验组一：裂解液为0.1％DDM+40mMCAA+10mMTCEP+100mMTEAB+0.15%[0089]表1.[0093]实验组二：考察不同浓度组分的裂解剂(制备方法为按照浓度称取各组分，溶于TEAB中即可)，以细胞悬液上片浓度为6×10^5个/mL，0.05ug/uLTrypsin/Lys_CMix+[0094]表2.[0097]结果显示：裂解试剂0.1％DDM+40mMCAA+10mMTCEP+0/0.15％RapiGestSF/高RapiGestSF浓度后虽对蛋白鉴定数无影响，但考虑到试剂成本及对质谱端离子源的影[0098]实验组三：考察不同浓度的酶解剂，以细胞悬液上片浓度为6×10^5个/mL，以CAA+10mMTCEP+100mMTEAB+0.15％RapiGestSF为裂解液，0.05ug/uLTrypsin/Lys_C