第43讲　微生物的培养技术及应用

第43讲微生物的培养技术及应用核心考点考题统计考情分析1.微生物的基本培养技术2025·黑吉辽蒙卷T4

2025·河北卷T182025·江苏卷T11

2024·海南卷T122024·山东卷T151.命题特点：考基础原理方法；结合生产、科研、实验情境，考查微生物的培养、分离与应用。2.备考重点：以培养基和微生物培养为基础，掌握其培养、选择、计数与应用。2.微生物的选择培养和计数2025·四川卷T8

2025·山东卷T152025·湖南卷T5

2024·黑吉辽卷T192024·贵州卷T21

2024·甘肃卷T212024·江西卷T17

2024重庆卷T13考点二微生物的选择培养和计数考点一微生物的基本培养技术目录CONTENT高考真题感悟课时跟踪检测考点一微生物的基本培养技术1.

培养基的配制（1）培养基的概念：人们按照微生物对

的不同需求，配制

出的供其生长繁殖的营养基质。营养物质

（2）培养基的种类及用途ccccccccc（3）培养基的配方①主要营养物质：水、

、氮源、

⁠。②其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如表：碳源

无机盐

微生物乳酸杆菌霉菌细菌厌氧微生物特殊需求添加

⁠

⁠一般pH调

至

⁠一般pH调至

⁠

⁠无氧维生

素

酸性

中性或

弱碱性

提醒：（1）牛肉膏、蛋白胨提供的主要营养物质有氮源、碳源、维生素

等，牛肉膏还可以提供磷酸盐。（2）可通过培养基中碳源、氮源类型判断培养对象类型。如培养基中无

有机碳源，则培养物为自养生物；若培养基中无有机氮源，则培养物一般

为固氮微生物。2.

无菌技术（1）目的：获得

的微生物培养物。（2）关键：防止

污染。（3）常用方法：灭菌和消毒。（4）常见物品的消毒或灭菌方法①消毒方法及适用对象纯净

杂菌

②灭菌方法及适用对象教材拾遗：〔选择性必修3

P10“相关信息”〕生物消毒法是指利用生物或

其代谢物除去环境中部分微生物的方法。如寄生菌裂解细菌用于污水污泥

净化、畜禽粪便堆肥发酵消毒、水产养殖水体微生物调控消毒等。一些产

抗菌物质的微生物（如某些放线菌产抗生素），其代谢物能抑制病原微生

物，也属于生物消毒法的应用范畴。3.

微生物的纯培养概念辨析4.

酵母菌的纯培养过程

1.

酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌。（2024·江苏

卷）

（

×

）提示：灭菌可彻底杀死各种微生物。2.

不含氮源的平板不能用于微生物培养。（2023·山东卷）

（

×

）提示：固氮微生物的培养不需添加氮源。3.

接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃。（2023·山东卷）

（

×

）提示：培养基需灭菌处理后丢弃。×××

下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题：（1）用图中字母和箭头表示平板划线操作的正确步

骤：

⁠。d→b→f→a→e→c→h→g

（2）在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？提示：需要。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，

避免污染环境和感染操作者。（3）在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端

开始划线？提示：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划

线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能

得到由单个细菌繁殖而来的菌落。（4）接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养

基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？提示：培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无

菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落形成，说明培养基灭菌

不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。

平板划线操作的注意事项（1）灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。（2）第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生

物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来

的菌落。（3）划线时最后一次划线不要与第一次划线相连。（4）划线时用力大小要适当，避免用力过大将培养基划破。（5）操作第一步即取菌种之前以及每次划线之前都需要将接种环进行火

焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的不同：

培养基的配制和无菌技术1.

（2025·河北高考18题改编）隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA（一种功能性脂

肪酸）的藻类之一。从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的

发酵生产。下列叙述错误的是（

）A.

隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源B.

采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻C.

选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长D.

适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量√解析：由题干信息知，隐甲藻属于异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶片（富含有机碳）上生长繁殖，说明隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源，A正确；采集的腐烂叶片上含有隐甲藻，其经湿热灭菌后会杀死叶片上的隐甲藻，B错误；选择培养基中加入能抑制细菌生长而对隐甲藻无毒害作用的抗生素，有利于获得隐甲藻，C正确；隐甲藻属于好氧型藻类，适当提高发酵时的通气量和搅拌速率可增加溶氧量，有利于隐甲藻的生长繁殖，以提高DHA产量，D正确。微生物的纯培养2.

（2024·湖南高考6题）微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下

列操作正确的是（

）A.

①②⑤⑥B.

③④⑥⑦C.

①②⑦⑧D.

①③④⑤√解析：

由图可知，②中拔出棉塞后应握住棉塞上部；⑥中划线时不能

将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙；⑦中划线时第5次的划线

不能与第1次的划线相连；⑧中平板应倒置培养。①③④⑤正确，故选D。3.

（2025·黑吉辽蒙高考4题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受

且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用

所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（

）A.

以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基B.

逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株C.

配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求D.

用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面√解析：

该研究的目的是筛选出高耐受且降解金霉素能力强的菌株，可

以以金霉素为唯一碳源制备选择培养基进行筛选，且逐步提高培养基中金

霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株，A、B正确；微生物培养需要适宜的

pH等，C正确；稀释涂布平板法需用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表

面，D错误。考点二微生物的选择培养和计数1.

选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类

微生物生长的培养基，称为选择培养基。（1）筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培养基应以

⁠为唯一的

氮源。（2）将培养基放在高温环境中培养，可分离出

的微生物。（3）含青霉素的培养基可淘汰

，筛选出真菌。尿素

耐高温

细菌

（4）缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中

的微生物。（5）无有机碳源的培养基可筛选出

（填“自养”或“异养”）

型微生物。N2

自养

2.

稀释涂布平板法3.

微生物的数量测定4.

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作（1）实验原理（2）实验步骤（3）实验结果分析与评价教材拾遗：〔选择性必修3

P18“探究·实践”〕分解尿素的细菌合成的脲

酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在培养基中加入酚红

指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该细菌能够分解尿素。

1.

可用稀释涂布平板法对酵母菌计数。（2024·江苏卷）

（

√

）2.

平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒。（2023·山东卷）

（

×

）提示：应为灭菌。3.

血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定

（2023·江苏卷）

（

×

）提示：细菌数量的测定应使用细菌计数板。√××4.

某同学欲分离产脲酶菌，可在选择培养基中添加尿素作为唯一氮源。

（2022·江苏卷）

（

√

）5.

利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物。（2023·山

东卷）

（

√

）√√

1.

选择培养基四种常见制备方法或实例（1）加入某些特定的物质（前提是培养基具备全部营养成分）（2）改变培养基的营养成分（3）利用培养基中的“特定化学成分”进行分离（4）通过某些“特殊环境”进行分离2.

微生物的鉴别方法菌落特征鉴别法根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别指示剂鉴别法如以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂（酸性情况下呈黄色；碱性情况下呈红色），培养某种微生物后，培养基变红说明该种微生物能够分解尿素染色鉴别法如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物3.

两种纯化方法的比较项目平板划线法稀释涂布平板法分离结果

关键操作接种环在固体培养基表面连续划线①一系列的梯度稀释；②涂布平板操作接种用具接种环涂布器项目平板划线法稀释涂布平板法优点可以观察菌落特征，对混合菌进行分离可以计数，可以观察菌落特征缺点不能计数操作复杂，需要涂布多个平板共同点都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单个的菌落；都可用于观察菌落特征

选择培养基及微生物的筛选1.

（2024·黑吉辽高考19题改编）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作错误的是（

）A.

在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从未感病植株上采集样品B.

将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测C.

将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单

菌落D.

判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑

大小√解析：根据题干信息“某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病”可知，若要筛选出该内生菌，应该从未感染香蕉枯萎病的植株上采样，A正确。要筛选内生菌，同时防止样品表面杂菌对实验结果的影响，需要对样品进行消毒，用无菌水冲洗样品表面，收集冲洗液，对冲洗液进行无菌检测，B错误。稀释涂布平板法可用于分离微生物，将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离能获得内生菌的单菌落，C正确。要想判断内生菌对病原菌的抗性效果，需要比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小，D正确。2.

（2025·山东高考15题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探

究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情

况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是

（

）注：“＋”表示有；“－”表示无A.

可用平板划线法对该菌计数B.

制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高

压蒸汽灭菌C.

由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培

养基上，该菌可在常压下生长D.

由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为

唯一碳源的培养基上生长√解析：对微生物进行计数时应该用稀释涂布平板法接种，A错误；制备培养基的过程中，应先进行高压蒸汽灭菌再倒平板，B错误；②④组的自变量是压强，实验结果是常压下无菌落，高压下有菌落，说明在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在高压下生长，C错误；③④组的自变量

是唯一碳源的种类，实验结果是以淀粉为唯一碳源时无菌落，以纤维素为

唯一碳源时有菌落，压强条件均为高压，说明高压下该菌不能在以淀粉为

唯一碳源的培养基上生长，D正确。3.

（2025·湖南高考5题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述

正确的是（

）A.

稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数B.

完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照C.

土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分解成乙酸D.

用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质微生物的分离与计数√解析：平板划线法只能用于微生物的分离，不能用于计数，A错误；为了检测培养基是否彻底灭菌，完成平板划线后，培养时需增加一个未接种

的平板作为对照，B正确；醋酸菌是好氧细菌，在有氧条件下才能将葡萄

糖分解成乙酸，C错误；筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，

培养基中不能含有蛋白胨，D错误。4.

研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100

mL完全培养基。相关叙述正确的是（

）A.

过程②涂布器蘸取酒精后立即置

于酒精灯火焰上灼烧，以防酒精

挥发B.

根据涂布后菌落的数目计算出葡

萄酒过滤液的酵母菌密度约为6.8

×109个/LC.

后续还需对甲、乙、丙、丁瓶中的酒精浓度和活菌数量进行检测D.

分离出的优质酵母菌菌株可用于白酒酿造，能耐受酒精度40％vol以上

的发酵液√解析：过程②涂布器蘸取酒精后立即置于酒精灯火焰上灼烧，防止残留酒精影响微生物生长，冷却后用于涂布，A错误；若对菌液计数，需选取菌落数处于30～300的培养皿计数。平均菌落数除以涂布体积乘上稀释倍数求的是每毫升发酵液的微生物数量，还应该再乘103算出每升发酵液的微生物数，故先求平均菌落数为（62＋68＋74）÷3＝68，除以涂布体积0.1

mL后等于680个/mL，稀释倍数为104，再乘103，最后为6.8×109个/L，该数值是葡萄酒过滤液中所有菌种的数目，不只是酵母菌，B错误；后续还需对甲、乙、丙、丁瓶中的酒精浓度和活菌数量进行检测，以确定分离效果，C正确；分离出的优质酵母菌菌株可用于白酒酿造，能耐受的酒精度为多少还需要进一步通过实验才能确定，D错误。高考真题感悟一、命题角度练角度一以微生物的接种、培养为核心，考查生命观念、科学思维与科学

探究1.

（2023·山东高考15题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确

的是（

）A.

不含氮源的平板不能用于微生物培养B.

平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒C.

接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃D.

利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物√解析：不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，

不属于消毒，B错误；使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行

灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；脲酶可以催化尿素分

解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获

得氮源而进行生长繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生

长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。2.

（2023·辽宁高考9题）细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面

的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并

检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m3）。下列叙述错误的是（

）A.

采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理B.

细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置C.

同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值D.

稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高√解析：

为防止杂菌感染，接种前需要对培养基、培养皿、微生物采样

器进行灭菌，对实验操作者的双手进行消毒，A正确；纯化培养时，为防

止污染培养基和水分蒸发，培养皿应倒置放在恒温培养箱内培养，B正

确；微生物计数时在同一稀释度下，应至少需要对3个菌落数目在30～300

的平板进行计数，以确保实验的准确性，C正确；使用稀释涂布平板法对

微生物计数，数值往往偏小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，在平

板上只能观察到一个菌落，D错误。3.

（2023·广东高考10题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（

）A.a点时取样、尿素氮源培养基B.b点时取样、角蛋白氮源培养基C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基D.c点时取样、角蛋白氮源培养基角度二以微生物的分离和计数为情境，考查科学思维与科学探究√解析：由图可知，随着堆肥时间的延长，堆肥温度先升高后保持稳定，a点时堆肥温度最低，c点时堆肥温度最高。该实验的目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，应该用以角蛋白为唯一氮源的培养基进行筛选培养，且应该在高温条件下取样，即c点时取样，D符合题意。4.

（2023·河北高考12题）为筛选能平衡肠道菌群和降解胆固醇的乳酸

菌，下列相关实验设计错误的是（

）A.

从酸奶和泡菜中采样分离乳酸菌B.

平板倒置培养为筛选乳酸菌创造无氧环境C.

对目的菌株进行胆固醇降解能力的测定D.

检测目的菌株对消化道环境的耐受力√解析：筛选目的菌时应从富含目的菌的环境中去取样，酸奶和泡菜中富含乳酸菌，可以从中采样进行分离纯化，A正确；平板倒置培养是为了防止培养皿皿盖上的水珠落入培养基造成污染，不是创造无氧环境，B错误；筛选的是能平衡肠道菌群和降解胆固醇的乳酸菌，所以，初步筛选后，还需要进一步进行目的菌胆固醇降解能力的测定，以获得符合要求的乳酸菌，C正确；因筛选出的目的菌是在肠道发挥作用，所以，还需要检测目的菌株对消化道环境的耐受力，D正确。5.

（2024·重庆高考13题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微

生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪

便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验

获得目的菌株，正确的是（

）A.

①通常在等比稀释后用平板划线法获

取单个菌落B.

②挑取在2种培养基上均能生长的用

于后续的实验C.

③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙D.

粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少√解析：

平板划线法无需稀释，A错误；由图可知，②是筛选不能在尿素

唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后

续的实验，B错误；所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不

产生脲酶或分泌脲酶抑制剂，所以③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得

到甲、乙，C正确；由图可知，甲不产生脲酶而乙可以产生脲酶，且乙同

时分泌脲酶抑制剂，粪便中可能还含有其他能产生脲酶的菌株使甲能够产

生NH3，所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的减少，D错误。二、长句表达练6.

（2022·河北卷23题节选）枯草芽孢杆菌为好氧微生物，液体培养时应

采用

（填“静置”或“摇床震荡”）培养。培养过程中抽样

检测活菌数量时，应采用

（填“稀释涂布平板法”或

“显微镜直接计数法”），其原因是

⁠

⁠

⁠。摇床震荡

稀释涂布平板法

用稀释涂布平板法在培养基上看到

的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽

孢杆菌也计算在内

7.

（2022·全国乙卷37题节选）用菌株C可产生S，若以制糖废液作为碳

源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简

要写出实验思路：

⁠

⁠

⁠。设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测

定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，确定最适碳源

浓度

课时跟踪检测1.

（2025·江苏宿迁模拟）微生物培养是发酵工程的重要基础，下列说法

正确的是（

）A.

不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间，细菌一般

在25

℃培养1～2天B.

平板划线法和稀释涂布平板法均可用于微生物的分离与计数C.

培养基表面的一个单菌落均由一个活菌增殖形成D.

显微镜直接计数利用细菌计数板或血细胞计数板1234567891011√解析：

不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间，细

菌一般在35～37

℃培养，A错误；平板划线法和稀释涂布平板法均可用于

微生物的分离，计数一般用稀释涂布平板法，B错误；培养基表面的一个

单菌落不一定是由一个活菌增殖形成，C错误；显微镜直接计数利用细菌

计数板或血细胞计数板，D正确。12345678910112.

（2025·江苏高考11题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如

下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（

）A.

制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌B.

将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布C.

连续划线时，接上次划线的起始端开始划线D.

鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存√1234567891011解析：

紫外线常用于消毒，以杀死空气中或物体表面的微生物，不能

对培养基进行灭菌，A错误；可用稀释涂布平板法分离土壤中的微生物，B正确；用划线法接种时，需灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次线。注意不要

将最后一次的划线与第一次的划线相连，C错误；鉴定后的致病菌，可接

种在斜面培养基上于冰箱内短期保存，D错误。12345678910113.

（2025·安徽马鞍山模拟）土壤中某些微生物能将全球植物每年产生的

40％～60％纤维素分解利用。科研人员利用微生物培养技术对土壤中的纤

维素分解菌进行分离和计数。下列叙述正确的是（

）A.

分别对土壤中该菌和细菌总数计数时，选用的稀释范围不同B.

分离土壤中该菌时，必须用稀释涂布平板法，涂布器使用前需灭菌C.

对该菌计数时，需选择培养24

h、菌落数为30～300的平板进行计数D.

可利用加入了刚果红的选择培养基对土壤中的纤维素分解菌进行筛选√1234567891011解析：

因土壤中细菌总数通常比纤维素分解菌的数量多，所以在计数

时，为了保证计数的准确性，分别对土壤中纤维素分解菌和细菌总数计数

时，选用的稀释范围不同，A正确；分离土壤中纤维素分解菌时，常用稀

释涂布平板法，但不是必须用这种方法，平板划线法也可以用于分离微生

物，B错误；对该菌计数时，为了保证结果的准确性和可靠性，需选择培

养一定时间（如48

h等，不一定是24

h

）、菌落数为30～300的平板进行计

数，C错误；利用加入了刚果红的鉴别培养基对土壤中的纤维素分解菌进

行筛选，刚果红能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，在纤维

素分解菌周围会出现透明圈，从而筛选出纤维素分解菌，这里是鉴别培养

基不是选择培养基，D错误。12345678910114.

（2023·浙江1月选考19题）某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进

行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，

经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（

）A.

培养基pH需偏碱性B.

泡菜汁需多次稀释后才能划线接种C.

需在无氧条件下培养D.

分离得到的微生物均为乳酸菌√1234567891011解析：因为乳酸菌经过无氧呼吸产生乳酸，故其生活的环境是酸性，培养基pH需偏酸性，A错误；平板划线接种时不需要稀释，B错误；乳酸菌是厌氧型微生物，所以需在无氧条件下培养，C正确；参与泡菜发酵的微生物有植物乳杆菌、短乳杆菌和明串珠菌等，所以分离得到的微生物除了乳酸菌，还会有其他耐高盐的微生物，D错误。12345678910115.

（2025·江苏盐城模拟）土壤中有丰富的微生物，若要利用其中某种微

生物，则需要进行菌种的分离和纯化，过程如图。下列相关叙述正确的是

（

）A.

实验结果表明，5

g土样中的活菌总数

约为1.1×108个B.

可以根据平板上的菌落特征，挑取相

应菌落在平板上多次划线纯化所需微生物C.

可以利用血细胞计数板对锥形瓶中的菌体进行直接计算D.

若筛选土壤中能分解尿素的细菌，需要将尿素加入图中的锥形瓶和试

管中√1234567891011解析：

4号试管中的稀释倍数为105，其进行稀释涂布平板法计数的结

果表明每克土壤中的菌株数为（113＋106＋111）÷3×10×105＝1.1×108

个，5

g土样中的活菌总数约为5×1.1×108＝5.5×108个，A错误；可以根

据平板上的菌落特征，挑取相应菌落在平板上多次划线纯化所需微生物，

因为菌落具有特异性，B正确；不可以利用血细胞计数板对锥形瓶中的菌

体进行直接计算，若其中的细菌数目过多，则会由于菌体相互重叠而不能

计数，C错误；若筛选土壤中能分解尿素[CO（NH2）2]的细菌，尿素可以

为微生物生长提供氮源，所以所配培养基应以尿素作为唯一氮源，锥形瓶

和试管中不需要加入，D错误。12345678910116.

（2025·湖北宜昌模拟）发酵技术广泛应用于食品、医药、农业等领

域。下列叙述正确的是（

）A.

菌落的大小、颜色、有无荚膜等肉眼可见的特征都可作为菌种鉴定的

依据B.

显微直接计数法具有直观、快速和操作简便等优点，但测得结果往往

偏小C.

防止杂菌污染是获得纯培养物的关键，对血清等生物制品常采用过滤除

菌法D.

玻璃制品涂布器在使用前后都必须进行严格的消毒，避免杂菌污染培

养基√1234567891011解析：菌落的大小、颜色等肉眼可见特征可用于菌种鉴定，但荚膜属于细菌个体结构，需借助显微镜观察，无法通过菌落直接判断，A错误；显微直接计数法具有直观、快速和操作简便等优点，但测得结果往往偏大，因为无法区分死菌与活菌，把死菌也计算在内了，B错误；防止杂菌污染是纯培养的关键，血清等不耐高温的生物制品需用过滤除菌法，避免高压灭菌破坏其有效成分，C正确；涂布器需灭菌而非消毒，使用前需酒精浸泡后灼烧灭菌，使用后也需灼烧灭菌，仅消毒无法彻底杀灭芽孢等微生物，D错误。1234567891011

7.

（2025·山东青岛三模）随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。下列说法正确的是（

）A.

诱变选育高产菌株时，通过向培养基加入刚果红染液，选择透明圈大

的即为目的菌株B.

可使用紫外线进行诱变，无需筛选即可得到产纤维素酶高的菌种C.

能在以纤维素为唯一碳源培养基中生长的菌株一定是纤维素分解菌D.

富集培养应使用液体培养基，目的是能得到更多能产纤维素酶的菌株√1234567891011解析：诱变选育高产菌株时，通过向培养基加入刚果红染液，应选择透明圈直径/菌落直径值最大的为目的菌株，A错误；基因突变具不定向性和多害少利性，因此使用紫外线进行诱变需要对菌株进行筛选，B错误；能在以纤维素为唯一碳源培养基中生长的菌株可能是纤维素分解菌，也可能是其他能分解纤维素的微生物或与纤维素分解菌共生的微生物，C错误；富集培养应使用液体培养基，利于微生物与培养液的接触，利于微生物的增殖，能得到更多能产纤维素酶的菌株，D正确。12345678910118.

（2025·湖南长沙一模）科研人员先在12个固体培养基上各涂以数目相

等（约5×104个）的对T1噬菌体敏感的大肠杆菌，经5

h培养后，平板上长

出大量的微菌落（约5

100个细胞/菌落）。取其中6个（A组）直接喷上T1

噬菌体，另6个（B组）则先用灭菌后的涂布器把平板上的微菌落重新均匀

涂布一遍，然后喷上等量T1噬菌体。培养后计算这两组平板上形成的抗T1

噬菌体的菌落数。结果发现，A组长出28个菌落，B组长出353个菌落。下

列说法正确的是（

）A.

该实验通过等比稀释的操作对微菌落进行计数B.B组中所使用的培养基为选择培养基C.B组的涂布使单个抗T1噬菌体自发突变大肠杆菌形成一个菌落的概率增加D.

该实验证明重新涂布后再喷T1噬菌体导致了抗性突变的大量发生√1234567891011解析：题中未提及等比稀释操作，仅描述涂布菌液后培养，直接喷噬菌体或重新涂布后喷噬菌体，A错误；B组培养基未添加特殊成分，仅通过喷T1噬菌体筛选抗性菌落，培养基不是选择培养基，B错误；A组中微菌落是聚集的，若一个微菌落内存在多个抗性突变体，它们会因位置重叠仅形成1个菌落，B组重新涂布后，抗性突变体被分散，每个均可独立形成1个菌落，因此，B组的涂布操作提高了单个抗性突变体形成菌落的概率，导致菌落数更多，C正确；抗性突变是自发产生且发生概率极低，噬菌体仅起选择作用，不会诱导突变，B组菌落数增加是因分散后抗性菌独立成菌落，而非突变率提高，D错误。12345678910119.

（2025·福建漳州一模）科研小组用双层平板法测定某污水样本中噬菌体的数量，操作流程是：①先铺2％琼脂于培养皿底层，形成底层琼脂培养基；②将敏感指示菌和待测污水样本混合液，加入已熔化并降温至45～48

℃的1％琼脂培养基中，迅速倾注于底层培养基上，形成上层培养基；③倒置培养一段时间后，计数噬菌斑。双层平板如下图所示。下列叙述正确的是（

）A.

倒平板前需对培养基和培养皿进行干热

灭菌B.

可用酵母菌作为敏感指示菌对T2噬菌体

进行计数C.

上层培养基冷却至45～48

℃，主要目的是防止底层培养基液化D.

上层培养基中琼脂浓度较低，形成的噬菌斑较大便于计数√1234567891011解析：对培养基通常采用湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）法进行灭菌，而培养皿常用干热灭菌法，A错误；T2噬菌体专门寄生在大肠杆菌体内，酵母菌不是T2噬菌体的宿主，不能用酵母菌作为敏感指示菌对T2噬菌体进行计数，B错误；上层培养基冷却至45～48

℃，主要目的是防止高温杀死敏感指示菌和噬菌体，C错误；由题注可知琼脂浓度越低越有利于噬菌体扩散，上层培养基中琼脂浓度较低，形成的噬菌斑较大便于计数，D正确。123456789101110.

（2023·北京高考16题）自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作

用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释

出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。（1）用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成

分，其中蛋白胨主要为细菌提供

和维生素等。解析：蛋白胨主要为细菌提供氮源、碳源和维生素等。氮源、碳源

1234567891011（2）A菌通常被用作溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基

倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊

（如图），表明

⁠。解析：将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊，表明A菌能在培养平板中生长繁殖。A菌能在培养平板中生长繁殖

1234567891011（3）为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含

菌量较高的湖泊水样

后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培

养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现

。采用这种方

法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。解析：将含菌量较高的湖泊水样稀释后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现溶菌圈。稀释

溶菌圈

1234567891011（4）为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下

材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤

纸小片、离心机和细菌培养箱）

⁠

⁠。解析：根据实验材料和设备，圆形滤纸小片可用于吸收某种物质，离心机可用于分离菌体和细菌分泌物，为探究P菌溶解破坏A菌的方式，可假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂。假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶

解破裂12345678