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文档简介
2009-06-17发布I本标准由河北省畜牧兽医局提出。本标准起草单位：河北省饲料产品质量监督检验站、石家庄市畜产品质量监测中心。本标准主要起草人：武英利、王萍、左晓磊、王作艳、1饲料用酶制剂中酸性蛋白酶活力的测定——分光光度法1范围5.12比色管：25mL。方法中所用试剂，除另有规定外均为分析纯试剂，所用水应符合GB/T6682—2008三级以上用水26.2磷酸(85%)。6.3钨酸钠(Na₂WO₄·2H₂O)。6.6浓溴水(99%)。6.9乳酸(80%～90%)。6.10乳酸钠(70%)。6.12L-酪氨酸标准品(含量大于99.0%)。于2000mL磨口回流装置中加入钨酸钠(Na₂WO₄·2H₂O)100水700mL、85%磷酸50mL、浓盐酸100mL,小火沸腾回流10h,取下回流冷却器，在通风橱中加入硫酸锂(Li₂SO₄)50g、水50mL和数滴浓溴水(99%),再微沸15min,以除去多余的溴(冷后仍有绿色需再加溴水，再煮沸除去过量的溴),冷却，加水定容至1000mL。混匀，过滤。制得的试剂应呈称取无水碳酸钠42.4g,用水溶解并定容至1000mL。称取三氯乙酸65.4g,用水溶解并定容至1000mL。量取盐酸9mL,用水溶解并定容至1000m量取盐酸90mL,用水溶解并定容至1000mL。7.7乳酸缓冲溶液，pH3.0甲液称取乳酸10.6g,加水溶解并定容至1000mL。乙液称取乳酸钠16g,加水溶解并定容至1000mL。7.8酪素溶液，浓度10g/L称取酪素1g置研钵中(精确至0.0002g),加浓乳酸2～3滴湿润，研磨3min,加入15mL乳酸缓冲溶液，静置，将上清液转移至100mL容量瓶中。残渣继续研磨至少3min,加入10mL乳酸缓冲溶液，静置，将上清液转移至容量瓶中，如此重复至少3次，将酪素全部转移至容量瓶中。在沸水浴中加热至完全溶解，冷却后用乳酸缓冲溶液定容至刻度。此溶液在冰箱内4℃贮存，有效期为3d。7.9L-酪氨酸工作溶液，浓度100μg/mL35.00mL,福林工作溶液1.00mL,置40℃±0.2℃水浴中显色20min(准确计时),作为标准测试溶液。9.2.1称取试样0.5～2g(精确至0.0002g)置研钵中，用少量9.3.1.1准确量取9.2.2测定溶液(混悬溶液，摇匀后立即量取)1mL于25mL比色管中9.3.1.2取1.00mL酪素溶液加入9.3.11比色管中，摇匀，静置10min,用定量滤纸过滤，滤液备用。9.3.2.1准确量取9.2.2试验溶液(混悬溶液，摇匀后立即取样)1mL于25mL比色管中，置温度9.3.2.3准确量取9.3.2.2滤液1.00mL,加碳酸钠溶液5.00mL,加福林工作溶液1.00mL,置温度以0浓度标准测试溶液为空白对照，在680nm波长处测定样品空白测试溶液和样品测试溶液的吸9.4结果计算与表述式中：X——酶活力单位，U/g;W—用回归方程计算出的试样溶液相当的L-路氨酸量，μg;n——试
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