试管苗的继代增殖培养专家讲座

第一节试管苗繁殖一、试管苗快速繁殖类型（一）无菌短枝型：将待繁殖材料剪成带一叶单芽茎段，转入成苗培养基，一定时间后可成苗，再剪成带一叶单芽茎段，继代又可成苗。（二）丛生芽增殖型：从芽到芽。（三）器官发生型：分为直接和间接两种形式，直接器官发生是指较少发生或不发生愈伤组织而直接从外植体表面再生不定芽。第1页（四）胚状体发生型从植物叶片、子房、花药、未成熟胚等诱导体细胞发生。其发生和成苗过程类似合子胚或种子。这种胚状体含有数量多、结构完整、易成苗和繁殖速度快特点，是植物离体无性繁殖最快方法，是人工种子和细胞工程前提，受到国内外普遍重视。第2页（五）原球茎型原球茎是一个类胚组织，培养兰花类茎尖或腋芽可直接产生原球茎，能够分化成植株。第3页二、提升增殖率方法（一）选取最正确培养基1、促进腋芽形成与生长调整物质。促进芽丛生长培养基：加入0.1～10.0mg·L-1细胞分裂素，偶然也用较高浓度。应用最多是6-苄基氨基嘌呤（BA），其次是激动素（6-糠基腺嘌呤，KT）和2-异戊烯基腺嘌呤（2ip），玉米素（ZT）用较少；第4页除细胞分裂素以外，培养基中还经常加入低浓度生长素，以促进腋芽生长，但要预防愈伤组织化。惯用和生长素是NAA（萘乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、IAA（吲哚乙酸），浓度在0.1∽1.0mg.L-1。第5页培养基中还经常加入低浓度生长素，以促进腋芽生长，但要预防愈伤组织化。惯用生长素是NAA、IBA、IAA，浓度在0.1∽1.0mg.L-1。有时还加入低浓度GA3（赤霉素），以促进腋芽伸长。第6页2、诱导不定芽形成与生长调整物质。诱导外植体形成不定芽时，普通使用细胞分裂素浓度高于生长素浓度配比，但也经常采取细胞分裂素和生长素浓度比值靠近于1配比。惯用细胞分裂素是BA、KT和玉米素，浓度在0.1∽10.0mg.L-1。有还加入低浓度2，4-D才能诱导不定芽产生第7页3、促进胚状体形成和增殖与生长调整物质。由体细胞形成胚状体叫体细胞胚（Somaticembryo）。生长素在体细胞胚胎发生中起着主要作用。普通是在含有丰富还原氮培养基上，加有生长素，尤其是2，4-D以诱导胚状体发生，然后转移到降低浓度或没有生长素培养基上使其成熟、萌发和生长。第8页（二）改进培养环境条件：1、温度。大多数植物最适培养温度在23～32℃之间,惯用25℃±2℃温度。普通低于15℃培养组织生长出现停顿，而高于35℃对生长也不利。2、光照。普通认为1000～5000Lx即可满足其需要，3、湿度。普通要求70%∽80%相对湿度，过低应洒水，过高应通风除湿。第9页第二节继代增殖培养应注意问题一、分化再生能力衰退现象1、经屡次继代后，会逐步降低或丧失愈伤组织中含有从外植体开启分裂时就包含进来成器官中心（分生组织），造成维管束难以形成，只能保持无组织细胞团。也有些人认为在继代过程中，逐步消耗了母体中原有与器官形成相关特殊物质。第10页2、衰退可能也与内源生长调整物质降低或丧失相关。3、可能是细胞不正常染色体聚集造成形态发生能力丧失。4、植物材料5、培养基及培养条件6、继代培养次数7、季节：第11页二、驯化现象在植物组织培养中，发觉一些植物组织经长久继代培养，发生了一些改变。开始继代培养要加入生长调整物质，其后加入少许或不加入生长调整物质就能够生长、这种现象称为“驯化”（acclimation）。第12页三、玻璃化现象（一）玻璃苗特征和发生原因离体繁殖中出现玻璃化芽苗，过分含水化，叶片肿胀，呈透明或半透明，水浸状，失绿，脆弱易碎；玻璃化可能是培养基渗透势不妥所致。有些人发觉琼脂和蔗糖浓度与玻璃化成负相关.培养基中植