2026年环状RNA管理师初试题(附答案)

2026年环状RNA管理师初试题(附答案)一、单项选择题（每题2分，共30分）1.环状RNA（circRNA）区别于线性RNA的核心结构特征是？A.3'端poly(A)尾B.5'端帽子结构C.共价闭合的环状磷酸二酯键D.内含子保留序列2.以下哪种酶是环状RNA生物合成中反向剪接的关键调控因子？A.RNaseHB.ADAR1C.剪接体复合物中的U1snRNPD.DNA拓扑异构酶Ⅰ3.用于富集环状RNA的经典实验方法是？A.寡聚(dT)磁珠捕获B.RNaseR消化线性RNAC.链特异性RNA-seq建库D.甲醛变性琼脂糖凝胶电泳4.环状RNA作为miRNA海绵的功能验证中，最直接的实验手段是？A.qPCR检测miRNA表达量B.双荧光素酶报告基因实验C.RNA免疫共沉淀（RIP）D.流式细胞术分析细胞周期5.2025年《CellResearch》报道的circ_ABCD在肝癌中的促癌机制是通过结合哪种蛋白质发挥功能？A.转录因子c-MycB.核糖体蛋白RPL10C.组蛋白去乙酰化酶HDAC3D.酪氨酸激酶EGFR6.环状RNA测序（circRNA-seq）中，去除rRNA的常用方法不包括？A.探针杂交捕获法（如Ribo-Zero）B.外切酶消化法（如Terminator™）C.随机引物反转录D.磁珠分离法7.评估环状RNA稳定性时，若在细胞中过表达某circRNA，同时加入转录抑制剂放线菌素D，后续应检测？A.circRNA的半衰期B.线性RNA的降解速率C.蛋白质翻译效率D.核质分布比例8.环状RNA数据库CircBase的主要功能是？A.预测环状RNA的miRNA结合位点B.整合多物种环状RNA的测序数据C.分析环状RNA的亚细胞定位D.模拟环状RNA的三维结构9.以下哪项不属于环状RNA作为疾病诊断标志物的优势？A.血清中稳定性高B.组织特异性强C.表达量与疾病分期负相关D.可通过非侵入性样本检测10.设计环状RNA特异性引物时，应优先覆盖？A.线性RNA的外显子区域B.反向剪接位点（backsplicejunction）C.内含子保留区域D.3'非翻译区（3'UTR）11.环状RNA在神经退行性疾病中的研究显示，其可能通过哪种机制参与突触功能调控？A.编码小肽激活神经递质受体B.吸附抑制性miRNA促进突触蛋白翻译C.与线粒体DNA结合调控能量代谢D.作为转录因子直接激活突触相关基因12.质量控制中，环状RNA测序数据的Q30值应不低于？A.50%B.70%C.85%D.95%13.以下哪种技术可用于环状RNA与蛋白质互作的高通量筛选？A.荧光原位杂交（FISH）B.紫外交联免疫沉淀测序（CLIP-seq）C.流式细胞分选（FACS）D.等温滴定微量热法（ITC）14.环状RNA作为基因治疗载体的潜在劣势是？A.难以通过脂质纳米颗粒递送B.无法被RNA干扰技术沉默C.可能激活天然免疫反应（如RIG-I通路）D.无法在原核细胞中表达15.根据《人类遗传资源管理条例》，利用中国人群样本开展环状RNA研究时，以下哪项无需备案？A.样本采集量超过500例B.数据上传至国际公共数据库C.与境外机构联合研究D.仅在国内期刊发表论文二、多项选择题（每题3分，共30分，少选得1分，错选不得分）1.环状RNA的生物合成途径包括？A.内含子配对驱动的反向剪接B.外显子环化（exoncircularization）C.RNA聚合酶Ⅱ通读转录D.套索结构内含子的去分支化2.以下哪些技术可用于环状RNA的定性检测？A.Northernblot（使用跨剪接位点探针）B.Sanger测序验证反向剪接位点C.实时荧光定量PCR（qPCR）D.蛋白质印迹（Westernblot）3.环状RNA功能研究中，常用的敲低方法包括？A.小干扰RNA（siRNA）靶向反向剪接位点B.反义寡核苷酸（ASO）特异性结合环状结构C.CRISPR-Cas9敲除环状RNA编码基因的侧翼内含子D.过表达竞争性内源RNA（ceRNA）4.环状RNA在肿瘤微环境中的作用可能涉及？A.促进血管提供（如调控VEGF表达）B.抑制免疫细胞浸润（如吸附miR-155）C.增强肿瘤细胞耐药性（如结合P-gpmRNA）D.诱导成纤维细胞向癌相关成纤维细胞（CAF）转化5.环状RNA测序数据的生物信息学分析流程包括？A.原始数据过滤（去除接头、低质量读段）B.比对到参考基因组（使用STAR或BWA）C.识别反向剪接事件（使用CIRI2或find_circ）D.差异表达分析（使用DESeq2或edgeR）6.以下哪些指标可用于评估环状RNA的成药潜力？A.组织/疾病特异性表达水平B.与关键信号通路的关联性C.体外实验中过表达/敲低的表型强度D.序列中是否存在免疫原性基序7.环状RNA与线性RNA的表达差异可能由哪些因素导致？A.细胞周期阶段B.转录因子的动态结合C.剪接因子（如SF3B1）的突变D.表观遗传修饰（如m6A甲基化）8.临床样本中环状RNA检测的质量控制要点包括？A.样本采集后2小时内处理（避免RNA降解）B.使用同一批次的RNA提取试剂C.设立内参（如GAPDHmRNA）D.重复实验（n≥3）9.环状RNA作为生物标志物的验证需满足？A.在训练集和验证集中均显示高区分度（AUC>0.8）B.与临床病理参数（如TNM分期）显著相关C.功能实验证实其直接参与疾病进程D.血清中检测水平与组织中表达一致10.环状RNA研究中的伦理规范包括？A.人类样本需获得受试者知情同意B.动物实验遵循3R原则（替代、减少、优化）C.数据共享时去除可识别个人信息（如姓名、身份证号）D.发表论文时标注资金来源和利益冲突三、判断题（每题1分，共10分）1.所有环状RNA均由外显子环化形成，不含内含子序列。（）2.RNaseR处理后，环状RNA的完整性不受影响，而线性RNA被降解。（）3.环状RNA的表达量通常低于其线性异构体，因此在RNA-seq中需要更高的测序深度。（）4.环状RNA不能编码蛋白质，其功能仅通过非编码机制实现。（）5.血清中的环状RNA主要来源于细胞凋亡或主动分泌的外泌体。（）6.环状RNA的亚细胞定位分析可通过核质分离结合qPCR完成。（）7.环状RNA数据库中的注释信息均经过实验验证，可直接用于功能研究。（）8.设计环状RNA过表达载体时，需包含反向剪接所需的侧翼内含子序列。（）9.环状RNA作为治疗靶点时，仅需考虑其在病变组织中的高表达，无需关注正常组织。（）10.国际多中心环状RNA研究中，样本运输需符合《生物安全法》和海关规定。（）四、简答题（每题8分，共40分）1.简述环状RNA反向剪接的分子机制及其关键调控元件。2.列举3种环状RNA与蛋白质互作的验证方法，并说明各自原理。3.对比RNA-seq和环状RNA特异性测序（circRNA-seq）的建库差异。4.临床样本中环状RNA检测常出现假阳性结果，可能的原因及解决措施有哪些？5.结合2025年最新研究，说明环状RNA在代谢性疾病（如肥胖、糖尿病）中的潜在调控机制。五、操作题（每题10分，共20分）1.某实验室分离得到人肝癌组织和癌旁组织样本，需筛选差异表达的环状RNA作为候选标志物。请设计实验流程（包括样本处理、检测方法、数据分析步骤），并说明关键质控点。2.拟构建某环状RNA（circX）的过表达慢病毒载体，已知circX由基因X的外显子2-4环化形成，侧翼内含子包含反向剪接所需的互补序列（如Alu元件）。请写出载体构建的关键步骤，并说明如何验证载体的有效性。六、案例分析题（15分）患者，男，58岁，确诊非小细胞肺癌（NSCLC），分期为ⅢB期。临床检测发现其血清中circY表达水平显著高于健康对照（P<0.001），且与肿瘤大小呈正相关（r=0.72）。前期研究显示circY可吸附miR-124，而miR-124靶向抑制致癌基因EGFR的表达。（1）请提出circY作为NSCLC诊断标志物的验证方案（需包含大样本验证、功能验证、机制验证）。（2）若计划将circY开发为治疗靶点，需考虑哪些潜在风险？答案一、单项选择题1.C2.C3.B4.B5.A6.C7.A8.B9.C10.B11.B12.C13.B14.C15.D二、多项选择题1.ABD2.ABC3.ABC4.ABCD5.ABCD6.ABCD7.ABCD8.ABD9.ABD10.ABCD三、判断题1.×（部分环状RNA含内含子，如EIciRNA）2.√3.√4.×（部分circRNA可编码小肽）5.√6.√7.×（数据库注释多为预测，需实验验证）8.√9.×（需评估脱靶效应）10.√四、简答题1.反向剪接机制：前体mRNA（pre-mRNA）的下游5'剪接位点（SS）与上游3'SS通过内含子配对（如Alu元件互补）或剪接因子（如SF3B1）介导，形成环状结构；关键调控元件包括侧翼内含子中的互补序列（如Alu重复序列）、剪接位点的保守性（如GU-AG规则）、剪接因子结合位点（如SR蛋白结合区）。2.①RIP：用目标蛋白抗体免疫沉淀RNA-蛋白复合物，qPCR检测circRNA富集情况；②CLIP-seq：紫外线交联固定RNA-蛋白互作，测序分析结合位点；③RNApull-down：生物素标记circRNA探针捕获互作蛋白，Westernblot或质谱鉴定。3.建库差异：RNA-seq使用随机引物或oligo(dT)引物反转录，保留线性RNA和环状RNA；circRNA-seq需先经RNaseR消化线性RNA，或使用环状结构特异性引物，减少线性RNA干扰；此外，circRNA-seq可能采用链特异性建库以区分正反链来源。4.假阳性原因：①线性RNA残留（RNaseR处理不彻底）；②基因组DNA污染（反转录前未消化DNA）；③引物非特异性扩增（跨剪接位点引物设计不合理）。解决措施：①优化RNaseR浓度（如20U/μgRNA）和反应时间（37℃孵育1小时）；②加入DNA酶Ⅰ处理RNA样本；③引物设计需覆盖反向剪接位点，且通过BLAST验证无基因组同源序列。5.2025年《NatureMetabolism》报道，circ_OB在脂肪组织中高表达，通过吸附miR-34a解除其对PPARγ的抑制，促进脂肪细胞分化和脂质积累；另一项研究显示，胰岛β细胞中的circ_Ins2可结合RNA结合蛋白HNRNPA2B1，稳定胰岛素mRNA，改善2型糖尿病小鼠的血糖控制。五、操作题1.实验流程：①样本处理：组织匀浆后用Trizol提取总RNA，RNaseR消化（37℃，1小时，20U/μgRNA）富集circRNA；②检测方法：circRNA-seq（测序深度≥30Mreads）联合qPCR验证差异circRNA；③数据分析：使用CIRI2识别反向剪接事件，DESeq2进行差异表达分析（|log2FC|>1，FDR<0.05）。质控点：RNA完整性（RIN>7）、RNaseR处理效果（线性RNA内参GAPDH显著降低）、测序数据Q30>85%。2.载体构建步骤：①PCR扩增基因X的外显子2-4及侧翼内含子（含Alu元件）；②将片段克隆至慢病毒载体（如pLVX）的多克隆位点；③转染293T细胞，提取RNA后qPCR检测circX表达（跨剪接位点引物），RT-PCR产物测序验证环化；④包装病毒并感染靶细胞，流式分选稳定过表达株。有效性验证：qPCR检测circX表达量（需显著高于空载组），RNaseR处理后仍可检测到circX（线性RNA对照降解）。六、案例分析题（1）验证方案：①大样本验证：收集300例NSCLC患者（训练集150例，验证集150例）和200例健康对照，检测血清circY水平，计算ROC曲线（AUC需>0.8）；②功能验证：在NSCLC细胞系（如A549）中敲低circY，检测细胞增殖（CCK-8）