磁珠分离细胞技术

磁珠分选技术➢磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上

，

从

而与细胞相连:抗体偶联磁珠

、二抗磁珠、

生物素磁珠

、OligodT磁珠➢在高强度

、梯度磁场中达到磁性分离的目

的:分离细胞

、

蛋白

、核酸

、细菌等➢免疫学+细胞生物学+磁力学➢基于抗体对抗原的特异性识别:免疫磁珠磁珠分选技术2·磁珠·磁力架·分离柱或分离试管磁珠分选系统MACS,Dynal,BD,StemCell,R&D…3管式分选Dyna

lbeads®Dyna

lbeads分离试管磁力架4

5柱式分选6磁性铁珠在分选器作用下形成强大的磁场,使含磁珠的细胞悬浮在磁场中撤去磁场,将标

记的细胞洗出未标记的细胞先行流出MACS微珠进

行磁性标记7微球;均一性好;也适用于细胞活化;·BDd≈200nm，

超顺磁化微粒;包被了高质量的BD抗体;·StemCell管式;柱式;·R&Dd≈150nm，

链酶亲和素磁珠

，

类胶体.·MACSd≈50nm，

多聚糖和氧化铁组成的超顺磁化微粒;可被细胞生物降解而无需解离磁珠;分离丰度极小的细胞(10-8);·Dynald=4.5um﹑2.8um﹑1um，

多聚材料包被的氧化铁超顺磁8抗免疫球蛋白磁珠抗生物素磁珠抗链酶亲和素磁珠抗荧光素磁珠直标间标9➢分选或去除用多个抗体混合物标记

的多种细胞➢分选稀有细胞和抗原弱表达的细胞➢在没有直接标记微珠可选时➢使用自备抗体或配体的磁性分选中间标扩展了分选范围10·阳阳性性分分选选·去去除除分分选选分选策略·多多重重分分选选11➢

目的细胞磁性标记后,作为阳性的标记组分直接分选出来。➢高纯度,高回收率,操作简单,尤其是富集稀少细胞。目标细胞滞留

在分选柱内目标细胞被洗

脱,收集用磁珠标记

目标细胞12应用anti-CD19磁珠分选人外周血中的B细胞阴性组分(未滞留在分选柱上的细胞)阳性组分(滞留在分选柱上的细胞)分选前13➢去除不需要的细胞➢缺乏针对目的细胞的特

异性抗体（如肿瘤细胞)➢不需要抗体和目的细胞结合

，

即细胞不被刺激（如T细胞

、B细胞

、NK细

胞功能分析)➢需进一步通过阳性选择14➢非目的细胞磁性标记

后,作为阴性的组分滞

留在分选柱上,未标记

的目的细胞被分选出来。

非目的细胞滞留在

分选柱上,被去除分选细胞亚群。标记非目的细胞应用去除法分选人外周血中的B细胞生物素标记CD2

,

CD14

,

CD16

,

CD36

,

CD43

,CD235a;

再加入链酶亲和素标记的磁珠15标记去除非目的细胞标记目的细胞洗脱目

的细胞➢先去除非目的细胞

，

再进行阳性分选。➢非目的细胞也表达用

来阳性选择目的细胞的

抗原;要分选非常稀有

细胞

，

先去除非目的细

胞再行阳性分选

，

可获

得高纯度的目的细胞。

16应用：

分选人外周血中

的CD4+CD25+

T细胞阳性分选后的阴性组分

阳性分选后的阳性组分

17去除分选后分选前用标记1标记目标细胞洗脱目标细胞去除磁珠标记用标记2标记目标细胞洗脱目标细胞➢进行多次连续阳性分

选,进行新标记前先去

除原来的磁珠标记。➢可进行多参数分选。

18应用：

分选人外周血中

的CD3+CD56+

T细胞分选前第一次阳选第二次阳选19在分选的同时进行分

程中很难去除死细胞难于同时进行多种选。20·优点:操作简单

，

高效快捷

，

无

菌和细胞状态更有保证

，

回收率、纯度高。

·缺点:不能

析

，

分选过

团块的干扰，

标记物的分➢过滤(单个细胞)有死细胞或者碎片的单细胞悬液

脐带血提取的单个核细胞)21➢分选标本：

不含

➢骨髓

、外周血

、

➢处理的组织细胞

➢