病毒学检验重点

病毒的特点是：1、形体微小，能通过细菌滤器，用电子显微镜才能观察到。2、无细胞结构，

其主要成分是核酸和蛋白质3、每种病毒只含有一种类型的核酸（RNA或DNA）4、因缺乏

完整的酹系统和能源，故只能寄生于活细胞内，依靠宿主细胞的代谢系统合成蛋白质和核酸

5、病毒以其基因为模板，在宿主细胞内复制出新的病毒颗粒6、为了在生物界保存其种属，

病毒具备从一个宿主转移到另一个宿主的能力，并具有对敏感宿主的侵染性和复制性7、在

宿主体外，能以大分子状态存在，并可长期保持其侵染能力8、有些病毒的核酸能整合到宿

主细胞的基因组中，并能诱发潜伏感染

细胞培养技术：是对由组税分散成的单个细胞或某一型细胞群进行的休外培养方法，即模拟

体内的生理环境条件，提供细胞适宜的营养条件和温度，在无菌操作的基础上，使离体组织

细胞生长增殖并进行传代的技术

二、单层细胞培养：

用于培养病毒的细胞有原代细胞、传代细胞（二倍体细胞株和传代细胞系）

三、鸡胚的接种途径：1、羊膜腔接种2、绒毛尿囊膜接种3、尿囊腔接种4、卵黄囊接种

四、

间接计数在病毒检验过程中较为常用，是判定病毒感染性的定量方法，常用的有：空斑形成

单位法，50%终点法，血凝试验和干扰测定

空斑形成单位（PFUs）试验：是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的相主细胞

混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空

斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感染单位

的浓度

凡事能在细胞培养物中产生CPE的病毒都可用空斑技术来测定其滴度。

5（）%终点法：是将病毒悬浮液经一系列稀释后，接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞，将

每个稀稀度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做曲线，找出造成50%动物、鸡胚死亡或

病变的终点稀释度。

LD50：为造成50%动物或鸡胚死亡的病毒含量

ID50：即是指可造成50%动物或鸡胚感染的剂量

CCID50：造成50%细胞培养产生病变效应的剂量

五、病毒纯化的一般原则：1、释放病毒至细胞外2、去除细胞碎块3、病毒悬液浓缩

六、病毒的保存：1、用低温（-60~25℃）、超低温（-70以下）冰箱或液氮罐（-196^150）

保存

2、冷冻干燥保存

七、血清学实验的方法很多，最常用的是中和试验、补体结合试验、红细胞凝集及红细胞凝

集抑制试验

中和试验：是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，

再将混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存的病毒感染力的一种方法。

中和抗体：凡是能与病毒结合，并使其失去感染力的抗体称为中和抗体

中和试验必须在敏感的动物体内（包括鸡胚）和细胞培养中进行

中和试验所用的病毒应是具有感染力的病毒。用于中和试验的病毒必须先进行病毒滴度的测

定

中和试验中，通常以100TCID50/单位体积或100LD50/单位体积作为标准的病毒试验浓度

八、

血凝试验（HA）：有些病毒和病毒表面的血凝素能引起人或某些哺乳动物的红细胞发生凝集,

这就是所谓的红细胞凝集现象

血凝抑制试验（HAD：血清中血凝素抗体能够与病毒血凝素分子的抗原位点特异性结合，

干扰病毒血凝素与红细胞上受体的结合过程，从而抑制红细胞凝集。

HA和HAI应用：I、发现和鉴定病毒2、用于临床病原学诊断3、病毒型或亚型鉴定4、免

疫机体后抗体效价的测定5、病毒抗原变异分析等

九、

病毒的分离和鉴定：是指从病人、带菌者、外环境中采集标本经过适当的处理，采用一系列

物理化学生物学等手段,将病毒从标本中分离出来,并通过有关特异性方法鉴定属何种病毒,

这一类方法称为病毒的分离与鉴定。

十、标本的采集：1、从病原体入侵部位取材2、从病原体感染的靶器官取材3、根据病原体

的排泄途径取材4、从环境中采集标本时，则应根据目的，参考病原体可能存在的环境，传

播途径采集标本

十一、病毒的分离方法：细胞培养法、鸡胚接种法、动物接种法

十二、病毒的鉴定：

初步鉴定：1、根据临床表现、流行病学特征与标本来源

2、生物学特性:细胞病变效应、血吸附和血凝作用、干扰现象、理化特性、接种动物的观察

最终鉴定：1、血清学与免疫学方法：中和试验、血凝抑制试验、免疫荧光试验、酶免疫学

试验2、病毒基因的鉴定：PCR技术，核酸分子杂交技术、核酸序列分析

3、电子显微镜技术：超薄切片电子显微镜技术、负染电子显微镜技术、免疫负染电子显微

镜技术、免疫超薄切片电子显微镜技术

十三、病毒感染的早期诊断技术

1、对潜伏期较短的病毒，由于机体未能对感染的病毒产生相应地抗体，因此应选择检测病

毒颗粒或病毒抗原及病毒核酸。对于潜伏期10天以上的病毒感染，可检测特异性IgM

抗体作为早期感染的指标。

2、IgM抗体是原发感染的证据，也是早期感染的证据

IgM检测：ELISA法、免疫荧光法

3、病毒特异成分的检测（I）核酸成分的检测：核酸杂交、PCR（2）奸恶感染材料中病毒

抗原成分：免疫荧光技术、酶免疫技术、ELISA、免疫胶体金技术（3）感染细胞中特征

性包涵体的检测：核内包涵体、胞浆内包涵体、胞质内和胞核内包涵体

4、电镜或免疫电镜技术：负染标本电镜技术、免疫电镜技术

十四、痘病毒

痘病毒：是病毒界体积最大结构最复杂的DNA病毒

1、引起的疾病：天花、猴痘、牛痘、传染性软疣

2、天花的传播途径为空气飞沫传播，也可通过人-人接触或传播媒介进行传播

3、猴痘的主要传播途径是感染的动物咬伤人类或人类接触了感染动物的体液、分泌物和血

液而感染、人与人之间密切接触或吸入含病毒的飞沫和接触污染物业能干热该病

4、病毒的分离培养：鸡胚绒毛尿囊膜法、细胞培养法、实验动物法

十五、

1、疱疹病毒是一类中等大小、结构相似、有包膜的DNA病毒。

2、引起人类感染的疱疹病毒现有8个成员：HSV-1>HSV2>VZV、HCMV、HHV-6、HHV-7>

EBV、HHV-8

3、疱疹病毒感染特点可表现为：（1）显性感染，病毒增殖并破坏细胞，临床表现为急性感

染或隐性感染；（2）病毒经原发感染后长期潜伏于体内，当机体抵抗力下降时常引起复发感

染；（3）病毒基因常与细胞基因组整合，导致细胞转化，甚至癌变；（4）可发生宫内感染导

致胎儿畸形。

4、致病：

IISV：疱疹性角膜炎、结膜炎、疱疹性脑炎（IISV-l）s生殖性疱疹（IISV-2）

途径：密切接触、空气飞沫、性交、接吻

VZV：原发感染形式是水痘、复发感染时带状疱疹

途径：直接接触、空气中飞沫气溶胶

HCMV：巨细胞包涵体病、先天性畸形、先天性感染

途径：垂直传播、水平传播、医源性感染

EBV：传染性单核细胞增多症、儿童淋巴瘤、鼻咽癌

途径：主要经唾液（如接吻）传播、偶尔也经过输血•传播、飞沫不是主要途径

5、哪些疱疹病毒有潜在致癌作用？

对人或动物有较强的致癌作用的疱疹病毒有：①HSV-2,与宫颈癌发生有美；②CMV可

能与宫颈癌、前列腺癌、结肠癌和Kaposi肉瘤等发生有关。③EBV与鼻咽癌、Burkitt淋巴

瘤的发生有密切关系。

2、HSV有两种血清型，分别是.HSV-1、和HSV-2:前者常引起唇

疱疹，后者常引起生殖器__________疱疹。

3.HSV-1发生的原发感染主要引起一龈口炎,HSV-2发生的原发感染主要引起

生殖器疱疹。

4.CMV可通过输血感染，发生输血后单核细胞增多症和肝炎等病症。

5.EBV主要侵犯」细胞，也可感染上皮细胞。

6.VZV在儿童.初次感染时引起一水痘，在成年人常引起带状疱疹_____________。

7.与EBV感染有关的疾病主要有三种，分别是传染性单核细胞增多症、非洲儿童恶性淋

巴瘤和鼻咽癌。

8疱疹病毒感染宿主细胞可表现为增殖性感染和潜伏性感染。

十六、乳头瘤病毒及检验

1、DNA病毒、无包膜

2、人乳头瘤病毒（HPV）只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，引起皮肤黏膜异常增生，使

宿主组织发生疣状或乳头状瘤病变。通过性接触可导致生殖器肛门部位的感染，是尖锐

湿疣或肛门生殖器疣的病原体,

3、HPV有严格的宿主和组织特异性、不产生病毒血症、不能再体外细胞中培养

病毒分离鉴定。ELISA法检测病毒抗原p24；还可以用RT-PCR等方法检测HIV的RNA。

7、临床晚期：1、严重的细胞免疫缺陷2、发生各种致死性机会感染3、发生各种恶性肿瘤

免疫标志：HIV抗原或抗体

病毒标志：分离HIV的基因

相关标志：CD4T细胞

8、抗体确证阳性：CD4>200/uLCD4/CD8<1

9、治疗原则：抗感染、抗肿瘤、杀灭或抑制HIV病毒，增强机体免疫力功能

十九：呼肠弧病毒：轮状病毒（HRV）,RNA病毒

1、轮状病毒是引起婴幼儿急性腹泻的重要病原体，粪口途径传播

2、轮状病毒表面有3种抗原：组抗原、中和抗原、凝素抗原

轮状病毒与肠道病毒的区别：

分类：轮状病毒属呼肠病毒科，肠道病毒属小RNA病毒科；

核酸：轮状病毒为双链RNA,分节段，无感染性；肠道病毒为单正链RNA,轮状病毒有双

层衣壳；肠道病毒为单层衣壳；

致病性：轮状病毒A组主要引起婴幼儿腹泻，B组引起成人腹泻：肠道病毒通过病毒血症

侵犯多种器官组织，引起多种临床疾病，但很少引起明显的肠道病变（ECHO病毒例外）

轮状病毒；是引起急性胃肠炎的一种病毒，属于呼肠病毒科，为双链RNA病毒。是人类、

哺乳动物和鸟类腹泻的重要病原体。分A-G7个组，A组轮状病毒是导致6个月-2岁婴幼儿

严重胃肠炎的主要病原体。轮状病毒因负染后在电镜下外形呈车轮状，故名

二十、小RNA病毒

1、无包膜、9个属：肠道病毒属、心病毒属、鼻病毒属、口蹄疫病毒属、肝病毒属、脊髓

灰化炎病毒

2、小RNA病毒科引起人类和动物的普通感冒，无菌性脑腴炎和呼吸道疾病

3、肠道病毒属在肠道内增殖，却很少引起肠道疾病

肠道病毒所致疾病：

（1）神经系统感染：如脊髓灰质炎、无菌性脑膜炎、肌肉麻痹等；

（2）呼吸道感染：如疱疹性咽峡炎

（3）心肌炎和心包炎

（4）皮肤黏膜损伤：如手足口病、皮疹、黏膜疹

（5）眼病：如急性出血性结膜炎

肠道病毒的共同特点：

（1）（1）属于小RNA病毒科，病毒体直径约27nm,无包膜。核酸为单正链RNA,

有感染性。

（2）’（2）抵抗力强，耐酸、肢溶剂及一般化学消毒剂。在污染水和粪便中可存

活数月，在疾病的流行上有重要意义。对热、紫外线、氯和氧化剂敏感。

（3）（3）除柯萨奇A组某些型别的病毒必须在乳鼠中增殖外，其余肠道病毒均

可以用细胞分离、培养，引起明显的细胞病变。

（4）（4）通过粪一口途径传播，易感对象主要是儿童，主要的感染类型为隐性

感染。

4、脊髓羡庙炎病毒的致病特点：①经消化道感染，多表现为隐性感染或轻症感染，极少数

幼儿体内病毒可经两次病毒血症后侵犯中枢神经系统，引起脊髓灰质炎，造成肢体弛缓性摊

痪；②组织损伤是由病毒对细胞的直接破坏（CPE）造成的。

脊髓灰质炎病毒的传播途径：主要通过污染的食物、生活用品等经消化道传播，少数通过空

气飞沫

二十一、冠状病毒

1、单股正链RNA,有包膜

2、人类冠状病毒通常引起成人普通感冒，儿童可以引起上呼吸道感染，肠道感染

3、SARS冠状病毒主要引起下呼吸道感染，主要传播途径是通过近距离的空气飞沫、接触

病人的呼吸道分泌物和与病人密切接触造成传播

二十二、披膜病毒

1、风疹病毒属，仅发现风疹病毒一种，即风疹病毒。风疹病毒只感染人类，人是唯一宿主。

一般感染风疹病毒危害不大，主要是风疹，但妊娠妇女感染后，尤其是前三个月感染，常导

致胎儿发生宫内感染，导致胎儿发育障碍，产生各种各样的畸形、流产、死产等，称为先

天性风疹综合症（CRS）

传播途径：主要通过空气飞沫经呼吸道传播，其次是通过正胎盘垂直传播和人-人密切接触

传播

二十三、黄病毒

流行性乙型脑炎病毒：通过蚊子叮咬传播，三代喙库蚊是我国JEV的主要传播媒介，高度

散发

二十四、正粘病毒

1、流感病毒又分为四个型，分别为甲型流感病毒，乙型流感病毒、丙型流感病毒、thogoto

病甫

2、甲型流感病毒科可感染各种禽类、人和其他哺乳动物。乙型只感染人类，因（人），thogoto

（家禽）

3、大部分流感爆发是由甲型和乙型病毒引起

4、流感病毒基因组分节段的特点使病毒具有较高频率发生基因重配，容易导致基因变异

5、血凝素HA和神经氨酸酷NA是划分甲型流感病毒亚型的主要依据

6、按核蛋白的可溶性补体结合抗原的不同，流感病毒被分为甲、乙、丙三型

甲型流感病毒又根据其表面血凝素及神经氨酸酶抗原性的不同再分为若干亚型，HA有15

中抗原（H1-H15）,NA有9种抗原型（N1-N9）

流感病毒的变异主要有两种：抗原漂移、抗原转变

抗原漂移；发生在IIA或NA分子内的点突变，这种变异石属于“量变”的积累，一般不会

引起暴发流行。

抗原转变：变异基因节段之间的重配，可引起病毒基因的''质变"，可引起世界的流感暴发

流行

7、甲型流感可导致世界性流行，乙型流感可局部流行，而C型流感常呈散发流行。

甲型流感流行的特点是：突然发病，发病率高，迅速蔓延，流行过程短但能多次反复

全球流感大流行具有以下特点：1、流感的发病率高，传播速度快，超额死亡率高2、新的

亚型出现后，旧的亚型不再在人群中流行

HA：血凝素；是流感病毒包膜上可以与人或动物红细胞表面受体结合而引起红细胞凝集的

糖蛋白刺突；HA可介导病毒对宿主细胞的吸附。具有免疫原性，可刺激机体产生保拧性抗

休；很多其他病毒也具有HA活性和糖蛋白结构，如麻疹病毒的H蛋白。

NA：神经氨酸的；流感病毒包膜的一种糖蛋白刺突，可水解宿主细胞膜表面糖蛋白末端的

“乙酰神经氨酸随，使成熟病毒体从细胞膜上解离而释放；NA具有免疫原性，相应抗体能

抑制酶的水解作用。很多其他病毒也具有类似活的，如腮腺炎病毒的HN蛋白

二十五、副粘病毒

副粘病毒包括两个亚科：副粘病毒亚科和肺病毒亚科

副粘病毒亚科包括：副粘病毒属、麻疹病毒属、腮腺炎病毒属

副粘病毒感染的一个重要标志：多核巨细胞的形成（HN蛋白和F蛋白在这个过程中起着不

可替代的作用）

麻疹病毒一麻疹：症状是斑丘疹，发热和呼吸道症状，并发症常见，麻疹并发症中最严重的

是中枢神经系统的并发症，亚急性硬化性脑炎

麻疹本身可自愈，但常引起严重的并发症导致死亡

RSV（呼吸道合胞病毒）可以通过呼吸道分泌物和飞沫传播，也可通过直接接触传播

MuV（流行性腮腺炎）主要通过飞沫传播，唾液及污染的衣服亦可传染，孕妇感染本病可

通过胎盘传染胎儿。

MV以空气飞沫直接传播为主，经鼻咽部或眼结合膜进入机体，也可通过被病毒污染的物品

间接传播

二十六、布尼亚病毒

1、肾综合症出血热（HFRS）：亦称流行性出血热，是由仔综合征出血热病毒引起的自然疫

源性急性传染病

临床上以发热、出血、低